植物愈伤组织培养

植物组织培养试题

一、名词解释

1. 外植体

2. 愈伤组织培养

3. 单倍体育种

4. 液体悬浮培养

5. 玻璃化现象

1、外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子

等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。

2、热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。

3、平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

4、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

5、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。

1、脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

2、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。 4、纸桥培养：将培

拟南芥组织培养

一、种子消毒：

方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。

方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。

消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。

方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。 二、选用的培养基

选用1/2MS培养基对种子进行培养。（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。

MS培养基

植物组织培养试卷

植物组织培养试卷

一、名词解释：（每小题3分，共15分）

1．初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。

2．脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。

3．液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。

4．细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。

5．再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。

二、填空（每空1分，共40分）

1． 植物组织培养过程中，最常用的培养基是 ，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用 和 调节pH，大多数植物的pH要求调节在 范围内。 2． 可以通过 、 、 、 、 等措施预防褐变的发生。 3． 植物组织培养时，外植体可以是 、

实验11 植物组织培养

1．植物组织培养的原理是植物细胞的全能性。

2．植物组织培养的各个步骤应严格执行无菌操作技术，所以在生产时为了防止污染，植物组织一般要先进行消毒，先用70%的酒精浸泡，再用5%的次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗。各种器皿和培养基等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。

3．与培养微生物的LB培养基相比，植物组织培养的MS培养基中要添加生长素和细胞分裂素类似物。4．在菊花的组织培养过程中，首先将消毒后的菊花茎的切段接种在加有适当配比生长调节剂的MS培养基上，给予一定的温度和光照，使其先脱分化形成愈伤组织，再将其转移至含有较多细胞分裂素类似物——苄基腺嘌呤（简称BA，需用HCl溶解）的培养基上，诱导其长出丛状苗。将它分株后，再移入含有较多生长素类似物——萘乙酸（简称NAA，需用NaOH溶解）的培养基上，使其生根。

5．通过植物组织培养产生的幼苗需要移栽至草炭土或蛭石中，给予适宜的光照、温度和80%以上的湿度等条件，锻炼一段时间，最后再定植到土壤中。

植物的克隆

（1）植物克隆的理论基础是植物细胞的全能性，技术基础是植物组织培养。

（2）在植物组织培养过程中，将离体的植物组织或细胞放在加有适当配比生长调节剂的培养基上进行培养，它会先发生脱

生菜组织培养技术论文

学院：生命科学学院

专业:

学号:

姓名:

2013级生物科学

201312200501003

方来

前言：生菜（Romaine Lettuce）属菊科莴苣属，为一年生或二年生草本作物，因其生长快、栽培容易、产量高、鲜食口感好而广受欢迎。生菜中含有丰富的营养成分，其中富含B族维生素和维生素C、E等，含水量很高，而且最突出的特点就是超级低脂。生菜此外富含膳食纤维以及多种矿物质生菜，对于人的消化系统大有裨益。它也可以促进胃肠道的血液循环，对于脂肪、蛋白质等大分子物质，能够起到帮助消化的作用。另外对于胆汁的形成也有促进作用，并且可以为血液消毒。生菜的子叶、叶片离体培养容易，再生率和转化率较高，我们选择生菜作为研究植物组织培养技术的材料，为进一步研究生菜的生理效应做基础。

1. 材料与方法

实验材料：生菜种子

试剂：MS培养基 2,4-D 6-BA NAA 实验方法

生菜种子的消毒→种子在MS培养基上培养生芽→外植体→诱导愈伤组织→分化成完整植株 种子的消毒 培养

75 %的酒精表面消毒30s，无菌水冲洗2次，再用0.1%升汞消毒8min，无菌水冲洗4~6次[1]。将消过毒的种

植物组织培养

农学函授专用

1

计划学时：2学时 属累计学时：1-2学时

教学目的：让学生了解组织培养的概念、类型及发展简史。

教学重点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念，组培的条件，组织培养的类型

教学难点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念 教学方法：理论讲解 教学过程： [ A ] 组织教学 [ B ] 讲授新课

第一章 绪 论

第一节 植物组织培养的基本概念

植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。本书所指植物组织培养具有广泛的含义。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。经各国科学家80多年的辛勤探索，现在可以说几乎所有的植物，其器官、组织或细胞都能离体培养成功。大多数还能从细胞的一部分，甚至没有细胞壁的裸露的原生质体中，再生出无数的小植株。这项技术已非常成熟，并取得了巨大的经济效益，在生物学理论探讨和生产实践上已经取得了卓越的成就。

植物组织培养是生物技术的一个工作平台，近几年来由于转基因技术取得巨大成功，边境证基因植物的组织培养上了一个新的台阶。

一、植物组织培养的概念

指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适

植物组织培养

农学函授专用

1

计划学时：2学时 属累计学时：1-2学时

教学目的：让学生了解组织培养的概念、类型及发展简史。

教学重点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念，组培的条件，组织培养的类型

教学难点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念 教学方法：理论讲解 教学过程： [ A ] 组织教学 [ B ] 讲授新课

第一章 绪 论

第一节 植物组织培养的基本概念

植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。本书所指植物组织培养具有广泛的含义。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。经各国科学家80多年的辛勤探索，现在可以说几乎所有的植物，其器官、组织或细胞都能离体培养成功。大多数还能从细胞的一部分，甚至没有细胞壁的裸露的原生质体中，再生出无数的小植株。这项技术已非常成熟，并取得了巨大的经济效益，在生物学理论探讨和生产实践上已经取得了卓越的成就。

植物组织培养是生物技术的一个工作平台，近几年来由于转基因技术取得巨大成功，边境证基因植物的组织培养上了一个新的台阶。

一、植物组织培养的概念

指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适

篇一：植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告

一、实验目的

1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；

2．通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织 学习愈伤组织的建立方法；

4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织 学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。

二、实验原理 （一）植物组织培养

植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。 （二）植物细胞的全能性

植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。 （三）组织的分化与器官建成

外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细

第一章

1植物离体培养：通过无菌操作，把植物细胞或其他类型的外植体，接种于人工配置的培养基上，给予人工控制的环境条件，使培养或操作对象表现生长发育等生命活动。 2细胞全能型：细胞具有该有机体的全部遗传信息，并具有形成有机体所有细胞类型的能力。 3园艺植物生物技术的应用领域一在细胞工程的应用；1良种繁育，使繁殖系数大，周年生产，繁殖速度快，苗木整齐一致。2离体种质保存，克服常规保存方法占用大量土地或消耗大量人力物力等缺点，并方便种质资源的地区和国际交换，避免病虫的人为传播。3细胞工程育种，培育园艺新品种，克服远缘杂交育种障碍。4有用物质的生产，大规模的细胞发酵罐培养生产药物，食品，调料香精等日用化工品。二基因工程运用：作为园艺作物改良的有效手段之一。三：分子标记运用，加快育种速度，降低选育种的成本，有效提高品种改良的成效。四：在植物学基础研究上的应用：进行遗传多样性的分析，系谱分析，基因表达及调控的研究等。

4细胞脱分化：指外植体中已分化的细胞，在切割损伤和培养物内外因素作用下，逐渐丧失其原有的分化了的结构和功能，合成代谢变得旺盛，细胞壁由厚变薄，细胞内部结构发生变化，细胞高度液泡化，回复到分生组织状态，形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。 5

植物组织培养实验指导

2012.3

附录 培养基母液的配制

一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。

二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。 三、实验器具与药品：

电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。

配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。

四、培养基母液的配制过程

首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。 母液种类 成分 规定用扩大 称取量母液定配1LMS量ml/L 倍数 m