vero细胞怎么培养

Vol.24No.6

1998212华　东　理　工　大　学　学　报　　　　　JournalofEastChinaUniversityofScienceandTechnology　　　　　 659

Vero细胞的微载体培养

——放大过程中的接种工艺

张　立3　严　春　范卫民　张元兴　俞俊棠

(华东理工大学生物化工研究所,上海200237)

　　提要:概述了用微载体系统培养贴壁细胞放大过程中的接种方法,研究了球转球

的工艺条件,并建立了球转球的动力学模型。用此方法成功地在国产50L生物反应

器中培养Vero细胞,细胞密度达1.1×107cells mL。

关键词:细胞培养;Vero细胞;接种技术;微载体;放大培养

中图分类号:Q951.6,R978.19

,[1],但这些病毒1967年VanWezelAL[2]成功地

R利用DEAE22,让贴壁依赖性细胞贴附在微体上在生

、最有效的模式[3]。80年代,开发了多种有效的微载体,如PharmL(Swede)的Cytodex21、Cytodex23,90年代开发了巨孔载体及相应的生物反应器[4]。同时,科研人员对培养工艺也进行了研究。

当培养规模较小(如1.5L,2.5L)时,游离的种子细胞可从方瓶或滚瓶中获得;当

Vol.24No.6

1998212华　东　理　工　大　学　学　报　　　　　JournalofEastChinaUniversityofScienceandTechnology　　　　　 659

Vero细胞的微载体培养

——放大过程中的接种工艺

张　立3　严　春　范卫民　张元兴　俞俊棠

(华东理工大学生物化工研究所,上海200237)

　　提要:概述了用微载体系统培养贴壁细胞放大过程中的接种方法,研究了球转球

的工艺条件,并建立了球转球的动力学模型。用此方法成功地在国产50L生物反应

器中培养Vero细胞,细胞密度达1.1×107cells mL。

关键词:细胞培养;Vero细胞;接种技术;微载体;放大培养

中图分类号:Q951.6,R978.19

,[1],但这些病毒1967年VanWezelAL[2]成功地

R利用DEAE22,让贴壁依赖性细胞贴附在微体上在生

、最有效的模式[3]。80年代,开发了多种有效的微载体,如PharmL(Swede)的Cytodex21、Cytodex23,90年代开发了巨孔载体及相应的生物反应器[4]。同时,科研人员对培养工艺也进行了研究。

当培养规模较小(如1.5L,2.5L)时,游离的种子细胞可从方瓶或滚瓶中获得;当

AEP对LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型抗炎实验

一、试剂与仪器 （一）细胞系 RAW264.7。 （二）试剂 胎牛血清

DMEM HyClone，美国 10000 U/mL 青霉素/链霉素Gibco，美国

DMSO Sigma，美国 lipopolsaccharide Sigma，美国 甲基四唑蓝(MTT) Sigma，美国 对氨基苯磺酸 Sigma，美国 N-α-萘乙二胺 Sigma，美国 （三）仪器 超净台 酶标仪

CO2恒温细胞培养箱 显微镜 离心机

（四）供试品配置

LPS 溶液配置：称取 LPS 粉末 5 mg，溶于 1 mL DMSO 中，得 5 mg/mL 母液。用时将母液用培养基稀释至 2 μg/mL（DMSO＜0.1%）。

MTT 溶液配置：称取 MTT 50 mg，溶于 10 mL PBS

　　我们知道，我们的身体是一个由细胞构成的王国，极其精密复杂，同时又高度有序。任何伟大的王国都既需要能干建设者，也需要勇猛防卫兵，我们身体细胞王国也不例外。

　　两者功能有什么不同

　　当我们的人体还在成长时，干细胞是细胞王国的建设者，通过分化源源不断提供新生细胞，增加我们身体细胞的数量;当我们成年后身体不再成长，干细胞又会扮演细胞王国的维护者，及时替换和更新衰老或受损的细胞。

　　干细胞是建设者

　　当有外敌入侵，如细菌和病毒，免疫细胞就会扮演细胞王国的军队，快速反应，将其清除。如果细胞王国中出现叛变分子，如正常细胞突变为癌细胞，免疫细胞就会扮演安保系统，将其识别并清除。

　　免疫细胞是防卫者

　　当外敌入侵过多，或王国内叛变分子太多，免疫细胞没有能力全部清除时，我们的身体就会生病。

　　两者如何分类

　　现在，让我们来进一步分别了解干细胞和免疫细胞，他们都分哪些种类，不同种类功能有何差异：

　　(1)按照分化潜能分类，干细胞分为：全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。

　　如果把人体比喻为一棵树，深埋大地的种子就是全能干细胞，就如同种子可以发育成长为一颗参天大树。

　　大树的主要枝干可以比喻为多能干细胞，如脐带/胎盘间充质干细胞，可以向

昆虫细胞培养及其应用进展

摘 要: 随着生命科学的迅速发展, 细胞工程愈来愈受到人们的重视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值, 已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。本文综述了有关昆虫细胞培养的研究进展, 包括昆虫细胞培养基研究开发, 昆虫细胞系的建立和组织培养, 利用生物反应器大规模培养昆虫细胞, 昆虫细胞2杆状病毒表达系统,构建基因工程细胞系及其稳定性表达, 以及昆虫细胞培养的应用前景和研究展望。 关键词: 昆虫细胞系; 昆虫细胞培养; 基因表达;培养条件

昆虫的组织培养最早始于 1915 年, 直到1962 年 Grace 才成功建立了世界上第一个细胞系, 此后昆虫细胞培养在世界范围内广泛开展, 不断有新细胞系建立的报道。现在, 昆虫细胞培养已在细胞生物学、分子生物学、昆虫学、病毒学、生物化学、遗传学等领域的研究工作中发挥着重要的作用。 1 昆虫细胞培养基

昆虫细胞培养基的发展经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段. 天然培养基采用取自动物体液或从组织中提取的成分作为培养液. 合成培养基最大的特点是各种成分已知.无血清培养基是在已知细胞所需营养物质和贴壁因子基础上, 在基

Hela细胞传代培养操作步骤

1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。 2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。

3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。

4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。 5．取待传代的细胞。打开versene，用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。

6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。（加versene主要是为了将旧培养基洗去）。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。 7．打开胰酶，然后将versene弃掉。换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。

8．将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法，去除容器中

鸡胚培养

第一节 鸡胚接种

一、鸡胚的结构

鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人

类和动物病毒的生长增殖，是常用的病毒分离培养方法之一（衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚）。目前，鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒，尤其在禽类病毒的研究上应用较多。可用于病毒的分离、鉴定，抗原和疫苗制备，以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展，不少病毒已不再用鸡胚来分离培养，但对某些病毒来说，鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。鸡胚培养的优点是，来源充足，价格低廉，操作简单，无需特殊设备或条件，易感病毒谱较广，对接种的病毒不产生抗体等。当然，鸡胚培养也有其缺点，即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外，多需用第二试验系统来测定病毒存在与否；非 SPF 鸡胚，亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。因此，用鸡胚分离培养病毒时，必须考虑这些问题。原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚，最好用 SPF 鸡胚。

一般说来，孵育至 8-14 天的鸡胚最有利于病毒的生长，因为此阶段鸡胚发

育日趋完善，各种脏器均已形成，已能经受接种物的适当刺激，同时胚胎细胞幼嫩，骨胳不健全，还未长出羽毛，很利于

培养皿 器底面(积c2m )加培液量(养lm )96孔 板.0320 .1 4孔2 2板1 0 12.板孔4. 2.5 06板 孔.9 2.654 孔 板8 2.503. cm5养培皿 8 .30 c6培m皿养 125. 0cm9培养 皿491 .001 0c培m养 皿55 010. 5c2塑m料培养瓶2 5.50 5c7m塑料培瓶 75 1养53- 20m5L璃培玻瓶养19 4 .0 100L玻璃培养瓶 3m.5710. 0 52m0玻璃培养瓶L 78 510.可获细量 1×105 5胞1×501 ×1602. ×501 6710×6 .2010×6 52.10×6 1.2×120 631.×106 571×0 62×01 37106 6×1×06 2107×

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摘要

CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得，为上皮贴壁型细胞。微载体细胞培养开始于19世纪60年代末期，最早使用离子交换凝胶（DEAE-Sephadex A50）作为载体，轻微搅动即可悬浮在培养基中。由于这种微载体带有电荷，利于细胞贴附于载体上进行生长繁殖。载体处于悬浮状态时，这样既可大大增加细胞附着面积，又使细胞能与培养基充分接触，进而有利于细胞的生长，因此能达到大量培养细胞的目的。后来根据细胞附着生长的特点，对微载体进行改良，使其电荷或其介质更利于细胞附着和生长。培养液中大量的微载体为细胞提供了极大的附着表面，1 g 微载体其比表面积可达6000 cm2，从而可实现细胞的高密度培养。首先将CHO细胞在无血清培养基（SAF-CHO-G-004）中进行无血清驯化。其次将CHO细胞（成功用无血清驯化后的细胞）用0.25%胰酶消化制成细胞悬液后，沿导流管加入含明胶微载体和SAF-CHO-G-004细胞培养基的WhcltonBioster瓶罐中连续培养生成一定量的种子细胞。最后将种子细胞进行大规模

昆虫细胞培养及其应用进展

摘 要: 随着生命科学的迅速发展, 细胞工程愈来愈受到人们的重视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值, 已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。本文综述了有关昆虫细胞培养的研究进展, 包括昆虫细胞培养基研究开发, 昆虫细胞系的建立和组织培养, 利用生物反应器大规模培养昆虫细胞, 昆虫细胞2杆状病毒表达系统,构建基因工程细胞系及其稳定性表达, 以及昆虫细胞培养的应用前景和研究展望。 关键词: 昆虫细胞系; 昆虫细胞培养; 基因表达;培养条件

昆虫的组织培养最早始于 1915 年, 直到1962 年 Grace 才成功建立了世界上第一个细胞系, 此后昆虫细胞培养在世界范围内广泛开展, 不断有新细胞系建立的报道。现在, 昆虫细胞培养已在细胞生物学、分子生物学、昆虫学、病毒学、生物化学、遗传学等领域的研究工作中发挥着重要的作用。 1 昆虫细胞培养基

昆虫细胞培养基的发展经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段. 天然培养基采用取自动物体液或从组织中提取的成分作为培养液. 合成培养基最大的特点是各种成分已知.无血清培养基是在已知细胞所需营养物质和贴壁因子基础上, 在基