药敏实验分析

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我院小儿血液细菌培养及药敏分析

作者：王美烨

来源：《中国实用医药》2015年第01期

【摘要】 目的 了解本院小儿血液细菌培养的分布和生长状况以及对药物敏感的分析情况。方法 对本院血培养检出菌株进行定性分析。对阳性菌株进行鉴别检验和体外药物敏感试验。结果 小儿血液细菌培养的阳性率为37.17%。分离菌株中， G+菌占54.7%， 其中表皮葡萄球菌占43.8%， 位于第一位。易产生耐药的微球菌和肠球菌分别占17.3%、4.1%， 分别居于第三、五位。结论 小儿血液感染病原菌种类多， 耐药性差异大， 耐药率高。 【关键词】 血液细菌；耐药性；药敏分析

败血症是严重威胁少年儿童健康的三大疾病之一， 平均死亡率为28%～37%， 尤其是耐药菌株种类和数量的增加， 使得感染患儿的有效治疗变得十分困难[1， 2]。败血症的临床表现没有特异性， 目前临床上仍以血液培养阳性为诊断标准[3， 4]。为了解败血病小儿血病原菌培养分布和对抗生素的耐药情况， 文章对本院426例血液培养阳性患儿的病原菌分布及药敏情况进行研究， 以便在临床上选择最佳的治疗方案。

药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。

一. 药敏纸片的制备

1.材料

抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等

2．方法

PBS的配制

A.制备L储备液

LNa2HPO4 ： +1000 mL蒸馏水

或 +1000 mL蒸馏水

L NaH2PO4 : +1000 mL蒸馏水

或 +1000 mL蒸馏水

B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用

L磷酸缓冲液的配制

抗菌药物原液的配制和保存期限

抗菌药物配制溶剂和保存期限

抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃

青霉素 PBS 1280 3个月1周

半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周

头孢菌素类 PBS 1280

附件：

病原生物学实验设计论文

论文题目：猩红热致病菌分离、鉴定、致病力分析及

药敏实验

指导老师：韩秀霞 赵巍

小组成员：

班 级：2011级临床五年制七班

2013年5月29日

研究内容摘要（200字以内） 该论文已猩红热病原菌为研究对象，取病人咽拭子进行分离培养，继而进行纯化增生，将分离后的病原菌进行涂片镜检以及触酶试验，已验证其为A组乙型溶血链球菌。然后对其进行病原菌的致病力分析和药敏实验，验证病原菌对各种抗生素的敏感程度。 关键词 （3-5个）：A组乙型溶血链球菌、猩红热、病原菌分离、鉴定、致病力分析及药敏实验 一、选题的目的和意义（主要说明：进行研究的必要性、预期达到的目的、实际应用价值和学术意义）（600字以内） 进行研究的必要性：2005年-2011年中国共报告的猩红热病例225 538人，其中死亡5人。2011年中国猩红热发病率较往年大幅度升高。存在春冬两个发病高峰。尤其是2011年上半年，香港澳门等地区相继报道猩红热疫情爆发，香港发生因猩红热致2名儿童死亡事件。这是近十年来猩红热疫情最严重的一年。近年来严重侵袭性A组β型溶血性链球菌感染在欧美

医药知识共享

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2 0 1 第3第2 o年2 1月 2卷 1期

医影与验学像检 i量 量量蚕蠢

1 4例肛周脓肿细菌培养、敏及临床分析 7药沈丽娟【摘要】目的：察痔科病人肛门、肠周围脓肿感染的病原茵茵群特点及抗生素耐药状况，观直探讨因不同病原茵感染引起的肛周脓肿与肛瘘形成的

相关性。方法：集 1 4例脓液标本的临床资料，搜 7并做细菌培养、定及药敏试验结果：液标本需氧致病菌的检出率为 9 .,鉴脓 19主要为大肠埃希茵。 其次为克雷伯茵属。其中，兰阴性杆菌占 9,兰阳性球茵占 1 。本组共检出厌氧茵 1 8:弱类杆菌 9株，化链球茵 4株需氧茵耐药革 0革 O 3株脆 7消 1 统计结果可看出：亚胺培南、万古霉素的敏感率为 l O, O%青霉素的耐药率为 1 0, 0%其余抗菌素均有不同程度耐药。结论：门周围脓肿多为肠源性细肛 茵、合菌感染，源性细菌感染易形成肛瘘。未检测到耐亚胺培南、混肠万古霉素的病原茵，链球茵感染对所选择抗茵素全部敏感，未发现耐药茵株青霉素不应列为常规药物使用。。。

【键词】周脓肿；瘘；菌培养；药性关肛肛细耐【中图分类号】 4 R4 6【献标识码】B文 【章编号】 0 6 1 5 2 L ) 2

国际检验医学杂志 2 1 00年 6第 3卷第 6月 1期

I a d Jn 00 V 1 1N . m JL b Me, e2 1, o., o 6 u 3

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经验交流

泌尿生殖道支原体感染检测结果及药敏分析詹熵，忠心卢

(北省武汉市中心医院检验科湖【键词】支原体感染；泌尿生殖系统；抗药性，生物关 微中图分类号： 3 5 R 6 . R 7; 994文献标识码： B

40 1) 3 0 4

文章编号： 6 34 3 ( 0 O 0 6 50 1 7— 1 0 2 l ) 60 0— 2

为 J解乍殖泌尿道支原体感染及耐药状况，对尿道及阴，现道分泌物进行支原体检测及选择 1 药物进行体外抗解脲尿 2种原体 ( e pama u e it u Uu)人型支原体 ( c p a Ur a ls rayi m, c和 My o ls

率最高的是红霉素 ( 2 1 )其次为左氧氟沙星 ( 9 7 )洛 5 ., 3 .和美沙星 ( 5 6 ) Uu和 Mh混合感染的药敏结果巾耐药率最 3 .;低的是交沙霉素 ( 6 0 )美满霉素 ( 0 0 )强力霉素 1.、 2. 、 ( 4 0 )耐药率最高的是红霉素 ( 8 0 )其次为罗红霉素

摘要:药敏试验能够快速的确定病原菌以及药物敏感结果，加强耐药监测，减少用药的盲目性，合理使用抗生素有效控制感染，避免耐药菌的产生，提升治愈率。临床微生物实验室应选择先进、方便的方法进行常规的抗菌药物敏感实验。

关键词:临床,常用,细菌,药敏,试验,方法，药敏,试验,能够,快速

药敏试验能够快速的确定病原菌以及药物敏感结果，加强耐药监测，减少用药的盲目性，合理使用抗生素有效控制感染，避免耐药菌的产生，提升治愈率。临床微生物实验室应选择先进、方便的方法进行常规的抗菌药物敏感实验。

一、国内常用常用的四种方法:

第一种纸片扩散法

原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，在纸片周围抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长K的透明圈即抑菌圈。其大小反映测试菌对测定药物的敏感性，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度呈负相关。

优点:药敏试验具有重复性好、操作简便、试验成本相对较低、结果直观、容易判读、便于基层开展等。

缺点:其虽是一一种传统、经典的药敏试验方法，但随着全自动微生物分析仪的推广和应用，K-B 纸片扩散法出现药敏试验假耐药、受人为因素影响较大、试验耗时长的缺点也渐渐体现出来，同时快速性、准确性方面存在不足[1]。

应用:应用于兼性厌氧

微量肉汤稀释法药敏检测

以下实验方法主要适用于需氧菌及部分兼性厌氧菌（以大肠杆菌为例），微需养菌和厌氧菌的培养条件亟待摸索。本实验方法，虽然操作较为繁琐，但是能够确切的得到细菌临床分离株对某种抗菌药物的MIC值，以此作为临床用药指导的部分依据。 菌悬液的制备：

① 菌液培养：取待测菌保存液10μL加入1mLMH肉汤（可根据实际需要做调整），置37℃温箱过夜静止培养12小时左右；

② OD600值测定：利用紫外分光光度仪测定OD值，MH肉汤调整菌液浓度使其OD600值落在0.08-0.1之间，此时菌液浓度约10cfu/mL（大约需将培养菌液稀释7-10倍左右）； ③ 上样菌液稀释：将待测菌液在步骤②所得稀释倍数的基础上再稀释1000倍，此时菌液浓度约10cfu/mL（即7000-10,000倍），此时的菌液即为上样菌悬液； 注意：测定OD值所需菌液应在超净台中无菌取样，剩余菌液还需实验。 抗菌药物的制备：

抗生素母液配制：参照NCCLS标准上抗菌药物相应的R（抗药）值制备待测抗菌药物（母液浓度要远远大于R值，至少160倍），分装于无菌小管置-20℃备用（附件一.常用抗生素溶液的配制）。

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注意：无菌操作，抗菌药物的稀释液均需灭菌，溶解后

大肠杆菌的分离以及药敏试验（悠然）

摘 要：山东某集团送检的疑似大肠杆菌病的病死鸡的心、肝、脾，进行病原菌的分离、鉴定和药敏试验。结果显示引起该鸡场鸡只发病的病原为大肠杆菌，对阿米卡星、新霉素敏感，对头孢和新霉素的复方制剂中度敏感，几乎对可克林霉素不敏感。表明该鸡场出现了耐药的致病性大肠杆菌，在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素，在使用药物治疗大肠杆菌病时，应根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意交替用药，按疗程投药。 关键词：大肠杆菌；分离鉴定；致病性；药敏试验

大肠杆菌病是由大肠杆菌某些血清型菌株引起的一类疾病的总称。各个品种和日龄的鸡均可发病，但肉仔鸡最易感。随着养禽业的迅速发展与高度集约化饲养，鸡大肠杆菌病已成为鸡群重要的疾病之一。为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。 1 材料与方法 1.1 病料来源

2006年11月山东省某集团养殖场场送检的疑似大肠杆菌病的病料若干，已死亡鸡只死亡时间不超过24 h。 1.2 细菌分离培养

无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，接种在普通琼脂平板及普通肉汤，37℃培

检验科第一季度细菌药敏分析报告

2016年12月21日至2017年3月20日，我科共收集全院73例细菌培养与鉴定标本，共检出致病菌18例，其中排名前三的细菌分别是：第一，葡萄球菌6例；第二，链球菌5例；第三，肠杆菌、铜绿假单胞菌各2例。其余真菌、粘质沙雷菌、假单胞菌各一例。

首先，从以上的细菌普来看，葡萄球菌和链球菌感染为我院感染的主要病菌，与近2年的细菌耐药性来看，每种病菌的对抗生素浓度和种数的耐受程度和都有所增加，这意味着将来的细菌感染治疗工作会越发困难。从第一季度的感染情况来看，链球菌的感染机率大幅上升，其耐药程度比以往也有所增加。链球菌主要通过飞沫传染，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。空气、器械、敷料等注意消毒。对急性咽峡炎和扁桃体炎患者，尤其是儿童，须治疗彻底，防止超敏反应性疾病的发生。由于细菌族别不同，对抗生素的敏感相应也不同，所以临床用药最好以药敏实验为指导。

以上感染排列前三的细菌的详细耐药情况如下表：

抗生素名称 耐药例数 青霉素 5 红霉素 5 诺氟沙星 3 苯唑西林 3 左氧氟沙星 2 利福平 2 （6例葡萄球菌属耐药情况统计）

抗生素名称 耐药例数 青霉素 4 红霉素 5 万古霉素 3

实验七 高锰酸钾吸收曲线的绘制

【实验目的】

1.熟悉紫外可见分光光度计的原理、组成及使用方法； 2.掌握测定及绘制药物吸收曲线的方法。 【实验器材】

752N型紫外可见分光光度计、万分之一电子天平、计算机

1000ml棕色容量瓶、20ml大肚移液管、烧杯、50ml容量瓶、胶头滴管、擦镜纸、滤纸、坐标纸

KMnO4（分析纯）、蒸馏水、甲醇（分析纯） 【实验原理】

在紫外-可见光区，物质对光的吸收主要是分子中外层电子的能级跃迁所致，主要是指π→π*、n→π*两种跃迁类型，物质分子结构不同，产生的跃迁类型也不同，物质通过紫外吸收产生的吸收光谱也不相同。

在待测物质的浓度一定的条件下，用各种不同波长的光线作为入射光，测定物质的吸光度（A），然后以波长（λ）为横坐标，相应的吸光度（A）为纵坐标，绘制出的曲线就称为该物质的吸收光谱曲线。吸收光谱曲线是物质的特征曲线，体现了物质对不同波长的光的吸收能力。

在一定的温度、pH值等条件下，待测物质的性质确定，吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。物质的结构不同，它们的最大吸收波长也往往不同。 本实验是