免疫组化定量分析imagej

ImagJ是一款简单的图像处理与分析软件，可以用来进行WB定量分析。 一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析 1、File——》open 打开WB片子 2、把图片转化成灰度图片 image——》type——》8-bit 3、消除背景影响

process——》subtract background 选择50基本可以 4、设置定量参数

analyze——》set measurements，点击面积，平均密度和灰度值及Integrated Density 5、设置单位

analyze——》set scale ，在“unit of length”的方框里输入“pixels” 6、把图片转换成亮带，Edit——》invert 7、选择Freehand

Selection，尽量把条带圈起来，点击键盘m，出来IntDen灰度值

当测定完所有条带，选结果中的“Edit ”的“SelectAll”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析

8、复制数据IntDen进行分析

二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析 1、File——》open 打开WB片子 2、如条带不正，需修正

image——》transform——》rotate 调节angl

免疫组织化学 第一节 概 述

1、概念：免疫组织化学(IHC)又称免疫细胞化学。它是组织化学的分支，是应用免疫学及组织化学的原理，对组织切片中的某些化学成分进行原位显示的技术。

采用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测，检测相应的目的抗原（或抗体）,并进行定位、定性和定量分析。

实际上该法是以免疫学方法取代化学方法的一种特殊的组织化学染色技术。 免疫组织化学技术的出现和发展给传统病理学带来了一场革命，使纯形态的病理学发展成为了形态与免疫信号相结合的现代病理学。其技术应用20多年来对临床病理诊断产生了深刻的影响，目前已成为了病理诊断中不可缺少的、最重要的辅助手段。 2、发展史

3、免疫组织化学的临床应用

适用于蛋白水平上组织的抗原或抗体检测。凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。 主要用于常规石蜡切片难以完成的疑难肿瘤的诊断

（1）对肿瘤的组织起源进行鉴别诊断，确定转移性恶性肿瘤的原发部位 （2）对肿瘤的良恶性进行综合判断

（3）对肿瘤进行进一步的病理分

第１章 定量分析概论

一、选择题

1. 试样用量为0.1 ~ 10 mg的分析称为 (A) 常量分析 (B) 半微量分析 (C) 微量分析 (D) 痕量分析

2. 试液体积在1 ~ 10 mL的分析称为 (A) 常量分析 (B) 半微量分析 (C) 微量分析 (D) 痕量分析

3. 每100 mL人体血浆中,平均含K+18.0mg和Cl-365 mg。已知M(K+)= 39.1 g/mol, M(Cl-) = 35.5 g/mol。血浆的密度为1.0 g/mL。则血浆中K+和Cl-的浓度为 (A) 1.80 ×10-1和3.65 mol/L (B) 7.04×10-3和1.30×10-1 mol/L (C) 4.60×10-3和1.03×10-1 mol/L (D) 4.60×10-6和1.03×10-4 mol/L

4. 海水平均含 1.08×103 ?g/g Na+和 270 ?g/g SO42-, 海水平均密度为1.

免疫组化步骤

1、 烤片：放于60℃烘箱内，20-25min； 2、 脱蜡：二甲苯I、II、III，3次，5min/次；

注：从烘箱中拿出迅速放入二甲苯中，防止蜡凝；

3、 复水：100%酒精---100%酒精---95%酒精---90%酒精---80%酒精

---70%酒精---50%酒精，5min/次； 4、 ddH2O洗2次，5min/次；

5、 抗原修复：柠檬酸盐抗原修复液1x（迈新MVS-0100），125℃，

5min；

注：1x修复液：198ml ddH2O + 2ml抗原修复液100x,混匀；

抗原修复高压锅的使用：确定垫圈和导热片的放入，加入700ml ddH2O，放入铁架固定切片盒，注意不要压到导热片，盖上锅盖检查排气嘴是否可以自由旋转，锅盖上的“close”对准白点，“open”所指处与边缘无缝隙，设置程序，开始；结束后等到排气口的红色指示消失即可打开锅盖；

6、 修复结束后冷却至室温（30min），1xPBS洗2次，5min/次； 7、 去除 H202酶：3%H202，15min；注意遮光；

注：用1xPBS稀释30% H202至3% H20（如5ml 30% H202+45ml 2PBS 50ml 3%H202）

数字化定量分析

1直觉性交易在实战当中产生的模糊概念 2为什么要进行数字化定量分析

数字化定量分析是一种方法，并不是我的方法才叫数字化定量分析，有数字在内的都叫量化，量化的基础是数学，数学具备唯一值，而解决唯一值才会使得操作思路清晰，把一片模糊的操作概念定在了具体的一个点上。

3定量空间：空间的1、2、3求4

技术分析有三个基本原理： （1）价格包容一切；

（2）趋势一旦形成即将延续； （3）历史往往重复发生。

数学公式：4=2×3÷1（这里的1、2、3、4指的是行情位置的坐标）

公式解释：历史上一个波段的起点为1，终点为2；我们需要测算的这波行情的起点为3，求这个波段的终点4。用2乘以3然后除以1，得出我们想要求出的4。

第一：速度的自相似性越强越好。首先我们来观察各个波段速度的自相似性，

1

自相似性可以看做行情运行的角度或速度，自相似性越强，效果就越好。

第二：同在一个大的周期当中，相互不要距离太远。即历史不要距离现在太远，距离现在越近的事情对现在的影响就越大。

第三：取点的价格要一致，取极值则全部取极值，取收盘价则全部取收盘价。大多数时候我们取点的时候要取极值点，但如果遇到极值点所在K线特别不规则（比如突发事件引起的大幅度高开或低开，或

免疫细胞化学常用试剂介绍 佚名

一、固定剂

大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。

目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。

1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）

试剂：多聚甲醛 40g

0.1mol/L磷酸缓冲液 至1000ml

配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。

免疫组化操作流程

试剂准备

1. PBS缓冲液（pH7.2～7.4）： NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。

2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。即抗原修复液

3.PBST: PBS+吐温-20（1000:1）洗液可全部运用PBST

4. 3% 甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。

5. 封片剂：中性树脂+二甲苯。

操作流程

免疫组织化学染色

SP法：

1. 脱蜡、水化：

脱蜡前，应将切片在60℃恒温箱中烘烤60~120分钟，观察石蜡应溶解。

从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟，更换二甲苯后再浸泡30分钟；

无水乙醇中浸泡3分钟；

95%乙醇中浸泡3分钟；

70%乙醇中浸泡3分钟（我用80%）；

50%乙醇中浸泡3分钟；

自来水中浸泡3分钟；

梯度脱蜡

2. 抗原修复：（用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片）

高压热修复 高压锅里放少许水，用一量杯或容器（大小能容纳玻片架为宜）装抗原修复液放入高压锅里一起煮沸，再放入玻片架，盖上不锈钢高压锅的盖子，将排气阀门套上，待听到阀门冒气时，即可倒计

石蜡切片免疫组化实验步骤

石蜡切片步骤按照晓峰整理的步骤进行（From 徐晓峰、朱老师的“石蜡切片”方案）： 1）材料的准备

在本实验室条件下推荐使用FAA（50% ethanol, 5% acetic acid, 3.7% 甲醛）固定材料。

FAA固定液（100ml），室温保存 ：

无水乙醇 50ml 冰醋酸 5ml 37%甲醛 10ml 水 35ml

第一天：组织固定

用FAA固定，详见“石蜡切片”protocol。 第二天：脱水

Solution 50% ethanol 60% ethanol *70% ethanol time 60 minutes 60 minutes 60 minutes number of changes one one one 以上所有步骤中每换好一步乙醇均置于4℃冰箱等待，并不时轻摇。 * 组织可在70% ethanol 4℃可存放几个月

第三天：进一步脱水和浸蜡

1

以下所有步骤在4℃进行并不时轻摇

Solution time number of changes 85% eth

临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果的意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”的意义打印在报告中，以增加病理报告的使用价值。

1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。

2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。

3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义

多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。

谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。

拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。

雌激素受体（ER）--性激素作用--胞

管理定量分析习题

1. 第一次作业 定量分析方法与公共管理 2. 定量分析的三个基本特征 3. 公共管理中的定量分析程序

4. 如何理解定量分析与定性分析的关系

系统与系统模型 5. 系统模型的定义

6. 为什么要使用系统模型 7. 系统模型的分类 8. 系统分析的定义 9. 系统分析的要素

第二次作业 数据与数据整理

10. 数据计量的三种尺度，以及具体的描述实例

11. 什么是定类数据、定序数据、定居数据、定比数据 12. 什么是数据整理，数据整理的原则 13. 数据整理的步骤

14. 如何进行数据分组，数据分组中的相关概念：频数、频率、组数、组距、组限、组中值、 15. 什么是等距分组、异距分组

16. 试设计一份统计表，并指出哪一部分是表头、列标题、行标题、主栏和宾栏

17. 对下表的数据完成整理，分出组数、确定组距、计算频率与累计频率，并绘制直方图 某车间50名工人日加工零件数分组表 零件数 (个) 107 108 110 112 113 114 115 117 118 频数 (人) 1 2 1 2 1 1 1 3 3 零件数 (个) 119 120 121 122 123 124 125 126 127 频数 (人) 1 2