免疫共沉淀技术原理

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免疫共沉淀

标签:文库时间:2025-02-18
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免疫共沉淀 from WHU SKY

1用细胞刮子收细胞,3000rpm,5min,离心,去上清;或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温,冰上或4度冰箱或4度离心机。

2 PBS清洗,重复步骤1

3选择合适的bufer裂解细胞,现加1000XAL(一般核质均分布的建议使用NP-40,核内分布的建议使用High Salt ,只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer),加入1ml Buffer (106-107个细胞),4℃,30min(在功能旋转仪上旋转裂解)。 4 12000rpm,15min,离心取上清(若上清仍浑浊,可重复离心1-2次)50ul上清作为 Input,其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug(可根据抗体效价酌情增减),4℃,旋转2-4h,

加抗体时要计算使用相同抗体的样品数,取(N+1~2)*1ug,用小量裂解buffer

稀释,再均分到各样品中,以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间,准备Protein G(一个反应20ul纯beads,如果beads原管中液体和beads体积比是1:1,一个样品取总体积40ul,多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物)

免疫共沉淀Co-IP步骤

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免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理:

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正

免疫共沉淀Co-IP步骤

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免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理:

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正

沉淀池、无阀滤池的工作原理

标签:文库时间:2025-02-18
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反应沉淀池、重力无阀滤池构造及原理

一、穿孔旋流反应池、斜管沉淀池

反应沉淀池是由穿孔旋流反应池、斜管沉淀池合建而成。 穿孔旋流反应池分正方形倒角六室,各室之间的隔壁上沿池壁开孔,孔口上下交错布置。水流沿池壁切线方向进入后形成旋流。第一格孔口较小,流速最大,而后孔口尺寸逐渐增大,流速逐格减小。 斜管沉淀池是把与水平面成一定角度(一般为600左右)的管状组件(断面矩形或六角形等)置于沉淀池构成,水流从下向上,颗粒沉于斜管底部,当颗粒累计到一定程度时,便自动滑下,清水在池顶用穿孔集水槽收集,污泥在池底用穿孔排污管收集排出沉淀池。 二、重力式无阀滤池

重力无阀滤池的工作原理是利用水力学原理,通过进出水的压差自动控制虹吸产生和破坏,实现自动运行的滤池。从沉淀池来的水,经进水分配槽,进水管,及配水挡板的消能和分散作用后,比较均匀地分布在滤层上部,水流通过滤料层、承托层与配水系统进入底部空间,然后经连通渠上升到冲洗水箱。随着过滤的进行,冲洗水箱中的水位逐渐上升(虹吸上升管中水位也相应上升)。当水位达到出水管喇叭口的上缘时,便从喇叭口溢流到清水池。

反冲洗的工作原理:当滤室沙层表面的淤泥和沉积物较厚,影响水流通过时,迫使滤室水位通过虹吸下降管逐步

化学反应原理-沉淀溶解平衡专题训练

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沉淀溶解平衡专题训练

1.下列对沉淀溶解平衡的描述正确的是( ) A.反应开始时,溶液中各离子浓度相等。

B.沉淀溶解平衡达到平衡时,沉淀的速率和溶解的速率相等

C.沉淀溶解平衡达到平衡时,溶液中溶质的离子浓度相等,且保持不变。 D.沉淀溶解平衡达到平衡时,如果再加入难溶性的该沉淀物,将促进溶解。 2.下列物质的溶解度随温度的升高而减少的是( )

A.KNO3 B.Ca(OH)2 C.BaSO4 D.CO2 3.下列说法正确的是( )

A.往NaCl饱和溶液中滴加浓盐酸,NaCl的溶解度减小 B.升高温度,物质的溶解度都会增大 C.在饱和NaCl溶液中存在溶解平衡 D.在任何溶液中都存在溶解平衡 4.在饱和的CaSO4溶液中下列哪种物质不存在( )

+-+

A.Ca2 B.SO42 C.H D.H2SO4 5.向含有AgCl(s)的饱和AgCl溶液中加水,下列叙述正确的是( )

A.AgCl的溶解度增大

免疫分析检测技术检测方法

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免疫分析检测技术

原理:

基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析方法,通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素标记等),利用标记物的信号放大作用,与现代测试技术相结合,对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点:

1) 特异性强、灵敏度高

2) 方法便捷、分析容量大、检测成本低

3) 可提供系列化的产品以及技术,产品可以商业化。

1. 免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、荧光免疫分析法(FIA)等,并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中,RIA占了很大比重,但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问题,应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法(ELISA)按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体(抗原)同时与一种抗原(抗体)竞争结合的情况,而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法,而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000,不具备免疫原性,以此制备的抗体,进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。

9免疫学基本原理

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第9讲

免疫学基本原理

天花患儿从1-7天的病症图

天花由天花病毒引 起的急性传染病。 天花病毒繁殖速度 快、传染性强、死 亡率高。潜伏期717天(平均约12天) 。

2-3天内

2周后

3-4周结痂处剥离脱 落。有高烧、 疲劳、头痛与 背痛的症状。 在感染天花病 毒后的15至 20天内致死 率高达30% 。

在脸、手臂与 腿上出现浓密 的圆形疹子, 而后遍布全身 。病变时疹子 转变成脓疱;

开始变干;

1980年

1979年10月26日1796年

爱得华 琴纳发 明了牛痘疫苗 从而保护人不 得天花。

世界卫生组织 宣布天花病毒 已被消灭。

全球消灭天花 证实委员会要 求各国停止预 防天花的免疫 种痘。

基本内容一、关于免疫 二、非特异性免疫和特异性免疫 三、免疫系统的功能和组成 四、抗原 五、抗体 六、抗原抗体反应 七、免疫检测的应用 八、课堂小结 九、作业

一、关于免疫 免疫(Immunity):是人和动物机体识别自身(self)和非自身(nonself), 并清除非自身的大分子物质,从而保持机 体内、外环境平衡的一种生理学反应。

一、关于免疫免疫的基本特性 1 识别自身和非自身 这是免疫应答的基础–免疫细胞膜表面的抗原受体+外来抗原的表位 –识别很精细,包括异种之

免疫分析检测技术检测方法

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免疫分析检测技术

原理:

基于抗原、抗体的特异性识别和结核反应的分析方法,通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素标记等),利用标记物的信号放大作用,与现代测试技术相结合,对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。 特点:

1) 特异性强、灵敏度高

2) 方法便捷、分析容量大、检测成本低

3) 可提供系列化的产品以及技术,产品可以商业化。

1. 免疫检测技术按标记抗原或抗体标记物的不同可区分为放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、荧光免疫分析法(FIA)等,并由这些方法延伸形成了免疫传感器、免疫亲和层析法等。最早残留免疫检测中,RIA占了很大比重,但由于该方法存在放射性防护和废物处理等问题,应用受到较大限制。免疫检测法特别是酶联免疫吸附法(ELISA)按抗原、抗体的特异性结合过程中是否有两种抗体(抗原)同时与一种抗原(抗体)竞争结合的情况,而区分为非竞争性ELISA法和竞争性ELISA法两种类型。一般目标检测物是大分子的常用非竞争性ELISA法,而目标检测物是小分子的则常采用竞争性ELISA法。大部分残留物质分子量小于1000,不具备免疫原性,以此制备的抗体,进行农药残留免疫检测时多用竞争性酶联免疫反应。

化学发光免疫分析技术

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化学发光免疫分析陈仓医院检验科:

一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望

一、化学发光免疫技术的概念化学发光免疫技术:化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与 待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或

定性检测。

化学发光免疫分析 (Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它 具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污

染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者,是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛,已占各种免疫 分析的首位,是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。

是目前世界公认先进的标记免疫测定技术,化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性,成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机

沉淀平衡

标签:文库时间:2025-02-18
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习题 6(沉淀平衡一)

1.解释下列现象。

a. CaF2在 pH=3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大;

b. Ag2CrO4在0.0010 mol·L1AgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L1 K2CrO4溶液中

--

的溶解度小;(参考答案) 答:

a. 这是由于酸效应的影响。因为

,随着[H]的增大,

+

也增大,

也随之增大,即溶解度变大。所以,CaF2在 pH=3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大。

b. Ag2CrO4的pKsp=11.71

Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度s1:

-1

-1

Ag2CrO4在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度s2:

-1

-1

所以, s1< s2,即Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度小。

2.某人计算M(OH)3沉淀在水中的溶解度时,不分析情况,即用公式Ksp==[ M3+][ OH]3计算,

-

已知Ksp=1×1032,求得溶解度为4.4×109 mol·L1。试问这种计算方法有无错误?为什么?

---

(参考答案) 答: 错误。

因为按此方法求得[OH-]=4×10 mol·L,即p