免疫层析实验记录

免疫层析实验

1．原理

金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条 上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被 富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常 迅速。

DICA也是GICA（goldimmunochromatography assay）GICA试剂为试纸条形式。在以塑料条上依次黏贴上以下几种组分，1--吸水纸，2--破璃纤维膜，抹上固定着干燥的金标抗体，3--硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状抗体，4--吸水纸。

因为1，4都是吸水纸，由于吸水作用， 一，使样品液从1端向4端移动

二，当样品液达到2时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应形成复合物 三，样品液继续移动至3 时，金标记的抗体复合物与膜上的抗体结合，呈现红色的线条

四，多余的金条抗体继

荧光免疫层析试剂技术要点及生产工艺流程

定量技术部：张赛

12 3 4

荧光免疫层析技术平台

荧光免疫层析试剂的制备荧光免疫层析技术要点荧光免疫层析试剂生产工艺流程

荧光免疫层析技术平台

荧光免疫层析技术平台 定量试剂开发程序阶段划分开题

工作内容预实验&开发计划书确定工艺和反应体系

备注立项评审

阶段1

实验室研究

预临床实验( 100例)稳定性验证(破坏试验)

转化评审

阶段2阶段3结题

生产转化临床验证

三批试生产(3000人份/批)临床验证( 200例)结项评审

荧光免疫层析技术平台 与金标免疫层析法的区别：标记物金标免疫层析金颗粒荧光素

国内首家荧光免疫层析

显色光信号

荧光免疫层析技术平台 LFIA Lateral Flow Immunochromatographic Assay stripControl line对照线

横向流动的免疫诊断试剂条Test line检测线

Sample prefilter pad样品垫

Conjugate pad结合垫 Plastic backing塑料衬垫

Absorbent pad吸水垫 Cellulose nitrate membrane硝酸纤维素膜

荧光免疫层析技术平台 反应模式检测抗体：间接法双抗原夹心法检测抗原：双抗体夹心法

表面活性剂在快速诊断试纸条中的应用

1. 表面活性剂概述

表面活性剂（surfactant 或amphiphiles）是一种主要的精细化学品，具有优良的润湿、 乳化、去污、分散及渗透等特性。

1.1 表面活性剂的定义与结构

凡是能吸附在溶液的表（界）面上，较低浓度就能极高的降低表（界）面张力的能力和 效率的物质就称为表面活性剂。

表面活性剂分子结构具有一个共同的特点，即可以分为两部份，一部分是亲水

基团，这是表面活性剂的亲水极性部分；另一部分是疏水基团或者亲油基团，这是非极性部分。因此，表面活性剂既可以在极性溶剂（最常用的溶剂是水）中，又可以溶解在

非极性的油相中，具有两亲性质，故油被称为两亲分子。

表面活性剂的亲水基团种类很多，包括极性基团和离子基团。极性基团如聚氧乙烯基和 糖基等，离子基团如羧基、硫酸基、磺酸基、磷酸基和季铵基等。亲油基团主要是长链烷基碳氢链、碳氟链、聚硅氧烷链以及聚氧丙烯等。

1.2 表面活性剂的分类

表面活性剂的性质主要由亲水基团决定，因此，表面活性剂通常按照亲水基团结构和性 质分类，而亲水基团的结构变化多端，所以总体可以分为两大类：溶解与水后能理解成离子的离子表面活性剂和在水中不能溶解的非离子表面活性剂。离子表面活性剂

实验一、免疫细胞的形态观察

一、实验目的

1、掌握微量采血及血涂片的制作方法。 2、在光学显微镜下观察免疫细胞。 二、实验原理

血涂片是临床化验中最常规的技术，也是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏（Wright）染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。 三、实验器材

1、器材：医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片。

2、试剂：瑞氏（Wright）染液，瑞特氏染料0.1克溶于60mL甲醇中，过滤。贮藏褐色瓶中备用。（配制时，要先将瑞特氏染料置研钵内边研磨边滴加甲醇，使染料溶解的更好。） 四、实验步骤 1、采血

采血前用75%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）。

2、涂片

挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以30~40度为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推

实验一 纸层析法分离氨基酸

一、实验目的

1．掌握纸层析的基本技术

2．学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸

二、实验原理

纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法：利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数、经层析而达到分离的目的。在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数，若以K表示分配系数：

层析溶剂(亦称展层剂或推动剂)是选用特定的有机溶剂和水组成的。滤纸纤维素与水有较强的亲和力(葡萄糖基的-OH基能与H2O通过氢键相互作用)，能吸附很多水分(可达22%滤纸重，其中约有6%的水与纤维素结合成复合物)，这部分被吸附的水因扩散作用降低而形成固定相。反之，展层剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可在滤纸的毛细管中自由流动而形成流动相。层析时，点有样品的滤纸一端浸入展层剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其的溶质依据自身的分配系数在这两相间不断进行分配，即随着有机溶剂不断向前移动，溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配，结果使溶质离开原点不断向前移动。由于溶质中各组分的分配系数不同，导致前行中出现移动速率差异，因而通过一定时间的层析，样品中的不同组分即可实现分离。 层析中某物质的移动速率以Rf值表示

JOURNALOFINSPECTIONANDQUARANTINE检验检疫学刊Vol.20No.22010年第2期

快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试

纸条方法的建立

王彦芳

1,2

　姜宝芹　邢福彬　杨鹏飞　张丽萍　平芮巾　咸庆杰

222221,2

　胡孔新　岳启安

21

(1.潍坊医学院　山东潍坊　261053;2.中国检验检疫科学研究院)

摘要　[目的]建立一种能快速区分、简便诊断西尼罗病毒感染的胶体金免疫层析试纸条方法。[方法]

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记西尼罗病毒NS1蛋白,采用双抗原夹心法制备胶体金免疫层析试纸条,对试纸条进行特异性和敏感性评价。[结果]15m;在敏感性上,该试纸条对阳性血清的检测较美国Focus公司商品化的ELI;89份阴性血清进行检测,试纸条检出9份阳性,ELISA试剂盒检出3.52%,特异性为89.89%。[结论],为进一步大规模应用奠

定了基础。

关键词　;;免疫层析法中图分类号.2

EstablishmentoftheRapidDetectionofWestNileViruswithGold-immunochromatography

WangYanfang

1,2

,JiangBaoqin,XingFubin,YangPeng

表面活性剂在快速诊断试纸条中的应用

1. 表面活性剂概述

表面活性剂（surfactant 或amphiphiles）是一种主要的精细化学品，具有优良的润湿、 乳化、去污、分散及渗透等特性。

1.1 表面活性剂的定义与结构

凡是能吸附在溶液的表（界）面上，较低浓度就能极高的降低表（界）面张力的能力和 效率的物质就称为表面活性剂。

表面活性剂分子结构具有一个共同的特点，即可以分为两部份，一部分是亲水

基团，这是表面活性剂的亲水极性部分；另一部分是疏水基团或者亲油基团，这是非极性部分。因此，表面活性剂既可以在极性溶剂（最常用的溶剂是水）中，又可以溶解在

非极性的油相中，具有两亲性质，故油被称为两亲分子。

表面活性剂的亲水基团种类很多，包括极性基团和离子基团。极性基团如聚氧乙烯基和 糖基等，离子基团如羧基、硫酸基、磺酸基、磷酸基和季铵基等。亲油基团主要是长链烷基碳氢链、碳氟链、聚硅氧烷链以及聚氧丙烯等。

1.2 表面活性剂的分类

表面活性剂的性质主要由亲水基团决定，因此，表面活性剂通常按照亲水基团结构和性 质分类，而亲水基团的结构变化多端，所以总体可以分为两大类：溶解与水后能理解成离子的离子表面活性剂和在水中不能溶解的非离子表面活性剂。离子表面活性剂

上海师范大学

硕士学位论文

胶体金免疫层析法对AFP、CEA和FN的快速检测

姓名：韩继美

申请学位级别：硕士

专业：物理化学

指导教师：朱龙章

20090401

上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：胶体金免疫层析法对ＡＦＰ、ＣＥＡ和ＦＮ的快速检测

学科专业：物理化学

学位申请人：韩继美

指导老师：朱龙章

摘要

２０世纪８０年代，纳米科技在多学科交叉的基础上发展成为一门新兴学科，近年来，纳米技术不断向生命科学和医学领域渗透，利用纳米生物技术研究和解决其中的重大问题，推动纳米生物及相关技术的发展，正成为当前一个重要的前沿理论，其中纳米免疫技术在生命科学和医学领域中的应用更是倍受关注。纳米胶体金免疫层析方法（Ｇｏｌｄｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｓｓａｙ，ＧＩＣＡ）是２０世纪９０年代兴起的一种将胶体金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法。本文主要研究了胶体金免疫层析技术在检测甲胎蛋白、癌胚抗原和纤维连接蛋白等肿瘤标志物方面的应用。

（１）采用经典的Ｆｒｅｎｓ方法，用１％的柠檬酸三钠溶液还原氯金酸

溶液制备了２０ｎｍ、４０ｎｍ、７０ｒｉｍ－－－－种不同粒径的胶体金，实验结果表明２０ｎｍ、４０ｎｍ的胶体金比较适合做免疫层析实验。所制备的２０ｎｍ的胶体金，

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

1-1-1正演的速度模型图

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

图1-1-2分块均匀的模型

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

成都理工大学正反演实验报告 严光明

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

1-2正演的后的走时图

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

图1-3 反演前后速度对比图

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

图1-5-a第0炮，第5接收点的数据

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

图1-5-b-1正演第1炮，第8接收点（0为开始的激发点，0开始的接收点）

图1-5-b-2 与1-5-b-2对应的验证图形（附注：由于本人u盘被病毒入侵，导致本人做得CAD图丢失，此图引用廖松杰同学的CAD图像，但是1-5-b-2由本人程序自己得出，特此说明。）

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

图 1-5-c四边放炮，四边接收左方第2激发， 图1-5-b单边接收第0炮，

第25接收的r图像 第5接收点的r数据图

地震层析成像正演 曹俊兴 成都理工大学

成都理工大学正反演实验报告 严光

实验名称：EGFR基因突变的检测 实验标本：D13229、D13230

实验目的：检测样品是否存在EGFR突变

实验试剂：QIAGEN DNA FFPE Tissue Kit、人EGFR基因突变检测试剂盒（Taqman-ARMS

法）（为真，20种突变类型）

实验仪器：Roche LightCycler 480荧光定量PCR、Nanodrop2000分光光度计、生物安全柜、

离心机、恒温金属浴。

实验方法：探针法 实验步骤：一、DNA提取

1、 切取5μm厚度的组织片3片，放入EP管中；

2、 加入1ml二甲苯振荡混匀，充分溶解石蜡，14000rpm离心2min，吸去上清； 3、 加入无水乙醇1ml，14000rpm离心2min，吸尽上清，开盖挥发（约10min）； 4、 加入180μlATL和20μl蛋白酶K，震荡混匀； 5、 56℃1h 6、 90℃1h

7、 短暂离心，加入200μl AL，震荡混匀； 8、 短暂离心，加入200μl无水乙醇，震荡混匀；

9、 短暂离心，将液体移入收集柱中，8000rpm离心1min，更换新的收集管； 10、 加入500μl AW1漂洗液，离心8000 rpm，1min，更换新的收集管； 11、 加入500μ