细胞培养支原体污染表现

AEP对LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型抗炎实验

一、试剂与仪器 （一）细胞系 RAW264.7。 （二）试剂 胎牛血清

DMEM HyClone，美国 10000 U/mL 青霉素/链霉素Gibco，美国

DMSO Sigma，美国 lipopolsaccharide Sigma，美国 甲基四唑蓝(MTT) Sigma，美国 对氨基苯磺酸 Sigma，美国 N-α-萘乙二胺 Sigma，美国 （三）仪器 超净台 酶标仪

CO2恒温细胞培养箱 显微镜 离心机

（四）供试品配置

LPS 溶液配置：称取 LPS 粉末 5 mg，溶于 1 mL DMSO 中，得 5 mg/mL 母液。用时将母液用培养基稀释至 2 μg/mL（DMSO＜0.1%）。

MTT 溶液配置：称取 MTT 50 mg，溶于 10 mL PBS

细胞培养常见污染的判别及应对措施

2011-01-02 10:19:04| 分类： 实验 | 标签：污染 无菌 细胞 培养基 灭菌 |字号大中小 订阅

一、避免细胞培养污染的措施：

污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是

可以避免 的：

1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再

用酒精擦台面，紫外照20分！

2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大

褂）。

5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的

培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

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细胞培养从头学

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常用设备

准备室的设备：

单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：

液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

无菌操作

无菌室的灭菌：

1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射

3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟

4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔

鸡胚培养

第一节 鸡胚接种

一、鸡胚的结构

鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人

类和动物病毒的生长增殖，是常用的病毒分离培养方法之一（衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚）。目前，鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒，尤其在禽类病毒的研究上应用较多。可用于病毒的分离、鉴定，抗原和疫苗制备，以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展，不少病毒已不再用鸡胚来分离培养，但对某些病毒来说，鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。鸡胚培养的优点是，来源充足，价格低廉，操作简单，无需特殊设备或条件，易感病毒谱较广，对接种的病毒不产生抗体等。当然，鸡胚培养也有其缺点，即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外，多需用第二试验系统来测定病毒存在与否；非 SPF 鸡胚，亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。因此，用鸡胚分离培养病毒时，必须考虑这些问题。原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚，最好用 SPF 鸡胚。

一般说来，孵育至 8-14 天的鸡胚最有利于病毒的生长，因为此阶段鸡胚发

育日趋完善，各种脏器均已形成，已能经受接种物的适当刺激，同时胚胎细胞幼嫩，骨胳不健全，还未长出羽毛，很利于

你还在为没有做过细胞培养实验而烦恼吗？你还在为做细胞实验而痛苦吗？看了这个《细胞培养的有关名词及其概念》相信一定会释疑我的烦恼

细胞培养的有关名词及其概念

1．原代培养（primary culture）

直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。这种培养称之为原代培养。

2．传代培养（subculture）

细胞从一个培养皿以1：2或1：2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养，这种培养称之为传代培养。

3． 悬浮培养（suspension culture）

细胞培养的一种类型。培养时通过一特殊的装置，使细胞瓶按一定的速度不断地转动，使细胞始终处于悬浮状态中进行增殖。

4．克隆（clone）

克隆指的是从一个细胞靠有丝分裂获得的一个细胞群体（population）。

5．细胞系（cell line）

在第二届细胞和组织培养专题讨论会上提出细胞系的概念为“原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成。如果不能继续传代或传代数有限，可称有限细胞系（finite cell line），如果可以连续传代，则可称为连续细胞系（continous cell line）。以

植物细胞培养技术的应用及前景

09生物科学 叶跃磷

摘要：植物细胞培养技术是应用生物工程研究成果，在细胞水

平上生产植物生物制品的技术。细胞工程是生物技术的四大领域之一 ,随着社会的不断进步和科学的不断发展,细胞工程在生命科学研究中起着不可估量的作用。植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。本文着重介绍了植物细胞培养技术的应用及其发展前景。

关键词：植物细胞培养、次生代谢产物、技术、生物转化、植物、人工种子、植物细胞培养、应用

前言：植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。植物细胞离体培养包括细胞、组织和细胞融合。[2]植物细胞的大量培养是利用植物细胞体系、通过现代生物工程手段,进行工业规模生产,以获得各种产品的一门新兴的跨学科技术。十九世纪九十年代, Haberlandt首先进行了植物细胞的培养; 1939 年, White, Nobecourt, Gau theret分别发表论文, 提出非分化的植物细胞可以无限期地进行培养, 为植物细胞培养的发展奠定了基础 。1942 年,Gau the

【专题讨论】各种细胞传代的方法＆操作

我们实验室饲养层细胞STO的传代

1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液，10mLPBS洗一遍

2.0.25%胰酶（预热20分钟左右）2ml消化，轻轻摇晃，直至肉眼见单层细胞呈块状脱落（或在显微镜下观察细胞之间分离），立刻加5ml(DMEM+10?S)终止消化，轻柔吹打8-10次成单细胞。

3.离心1000rpm*5min,弃上清，加DMEM+10?S轻柔吹打。 4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中，每个皿加10ml(DMEM+10?S)培养液，正常情况下2-3天就可以长满，期间不用换液。 小鼠ES-R1细胞系传代。

因为我们用饲养层细胞铺皿而不是明胶包被，所以传代之前必须处理饲养层细胞。 1.饲养层细胞STO处理：当STO铺满平皿后，向培养液中加入100ul 1mg/mlmitomycinC(toxic, 操作时不要接触，作用是抑制STO增殖)，轻轻摇晃平皿，保证丝裂霉素分布均匀，放置于培养箱中处理2h后，吸弃培养液，10mlPBS洗两遍（目的是把mitomycinC洗净），0.25%胰酶消化，5ml(DMEM+10?S)终止，离心1000rpm*5min弃上清，加DMEM+

细胞冷冻保存方法、注意事项

1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。

2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。

3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，

如Sigma D-2650)，以5~10 ml 小体积分装，4 oC 避光保存，勿作多次解冻。Glycerol 亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。 4、冷冻保存之细胞浓度：

（1）normal human fibroblast: 1~3 x 106 cells/ml 。

（2）hybridoma: 1~3 x 106 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma 会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后死去。

（3）adherent tumor lines: 5~7 x 106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 106 cell

一．物品准备

培养室的灭菌：

1. 定期打扫培养室：每周打扫一次，先用自来水拖地，擦桌面，超净工作台等，然后用3‰

的来苏或新洁尔灭擦拭。

2. 二氧化碳培养箱的灭菌：先用3‰的新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精或0.5%过氧乙酸擦

拭，用紫外灯照射。

3. 实验前打开紫外灯照射30分钟。

4. 试验后用75%酒精3‰的新洁尔灭擦拭超净工作台，边台，倒置显微镜的载物台，打开

紫外灯照射30分钟。

5. 实验人员的实验准备：肥皂洗手，穿上隔离衣，戴好帽子，口罩，换上入室拖鞋。戴上

手套，用75%酒精棉球擦拭双手。 无菌操作演示：

1. 凡带入超净工作台的酒精，PBS，培养基，胰蛋白酶的瓶子均要用75%的酒精擦拭瓶子

外面。

2. 靠近酒精灯火焰操作。 3. 器皿使用前必须过火灭菌。

4. 继续使用的器皿（如瓶盖，滴管）要放在高处，使用时仍要过火。 5. 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻，准确，如吸管不能碰到废液缸。 6. 吸取两种以上的液体时，要注意更换吸管，防止交叉污染。 常用物品准备：

1. 玻璃吸管：实验室常用的玻璃吸管，粗的一端要用棉花盖上，防止吸液时液体进入吸头

而造成污染。再将其装入吸管筒。

2. 培养皿：要用专用的器皿装好或用牛皮纸包好再进行消毒。

植物细胞培养技术的应用及前景

09生物科学 叶跃磷

摘要：植物细胞培养技术是应用生物工程研究成果，在细胞水

平上生产植物生物制品的技术。细胞工程是生物技术的四大领域之一 ,随着社会的不断进步和科学的不断发展,细胞工程在生命科学研究中起着不可估量的作用。植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。本文着重介绍了植物细胞培养技术的应用及其发展前景。

关键词：植物细胞培养、次生代谢产物、技术、生物转化、植物、人工种子、植物细胞培养、应用

前言：植物细胞培养技术作为细胞工程中的重要技术现已广泛应用于生命科学的各个研究领域,是生物技术最新发展的重要组成部分。植物细胞离体培养包括细胞、组织和细胞融合。[2]植物细胞的大量培养是利用植物细胞体系、通过现代生物工程手段,进行工业规模生产,以获得各种产品的一门新兴的跨学科技术。十九世纪九十年代, Haberlandt首先进行了植物细胞的培养; 1939 年, White, Nobecourt, Gau theret分别发表论文, 提出非分化的植物细胞可以无限期地进行培养, 为植物细胞培养的发展奠定了基础 。1942 年,Gau the