trizol法提取rna三层
“trizol法提取rna三层”相关的资料有哪些?“trizol法提取rna三层”相关的范文有哪些?怎么写?下面是小编为您精心整理的“trizol法提取rna三层”相关范文大全或资料大全,欢迎大家分享。
TRIzol法提取RNA
总RNA提取(TRIzol法)
仪器和材料:氯仿、异丙醇、无水乙醇、无RNA酶枪头(1000μL,200μL,
10μL)、移液枪、无RNA酶EP管(有1.5mL、2mL、15mL、50mL等不同规格)、75%乙醇(尽量现配现用,配制好后置于4℃冰箱待用)、滤纸、DEPC水、计时器记号笔等
注:上述材料标记好提RNA专用,自己保管好!
操作步骤:
1.细胞悬液按照每5×105~106个细胞加1mL TRIzol,贴壁细胞直接加TRIzol裂解,(1个T25cm2细胞培养瓶可加1~2mL TRIzol,可根据需求来添加),裂解数分钟(5~10分钟,可在倒置显微镜下观察细胞脱落情况),反复用枪吹打或持续振荡以裂解细胞。
2.将上述TRIzol裂解液转移至1.5mL EP管中,每个EP管做好标记,按照每1mL TRIzol加200μL氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,用力振荡(手动)15秒,在室温下放置10~15分钟(观察到明显分层即可);然后4℃离心机12000rpm离心15分钟。
3.将离心后EP管内上层液体转入新的EP管内(离心后分为3层,注意吸取第一层水相时不要吸到第二层,一般可吸到500μL左右),按照每1mL TRIzol加500μL异丙
Trizol法提取总RNA(细胞和组织)
Trizol法提取总RNA
1、①提取组织RNA时,研钵高温高压灭菌,每50-100mg组织液氮研磨后,将粉末用液氮预冷的药匙转移至预先装有1ml Trizol的EP管中,充分混匀(粉末总体积不能超过Trizol体积的10%)用1ml Trizol试剂裂解;
②提取细胞RNA时,每5-10×106个细胞用1ml Trizol裂解,反复吹打或剧烈振荡;
2、将上述裂解液,室温15-30℃静置5min;
3、每1ml Trizol加入0.2ml氯仿,在手中用力振荡15s,室温放置2-3min后,12000r离心15min(2-8℃);
4、取上层水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加入0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,室温放置10min,12000r离心10min(2-8℃),弃上清;
5、向沉淀中按每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇(4℃),涡旋混合,进行洗涤,7500r离心5min(2-8℃),弃上清; 6、将RNA沉淀在室温下自然干燥(5-10min); 7、用30μl RNase-free water溶解RNA沉淀; 8、取出1μl,稀释10倍,测定RNA浓度并记录; 9、进行反转录或分装保存于-80℃
Trizol法提取RNA-电子版
Trizol法提取RNA步骤
1. 胰酶消化六孔板细胞(每孔相当于3.5cm皿),每孔细胞收于EP管中,PBS洗一遍(或
弃旧培养基,1ml PBSA洗2遍,直接向孔中加入600ul Trizol,吹打细胞,并吸入EP管中即可,无需胰酶消化);
2. 向细胞沉淀中加入600ul Trizol裂解细胞5min;
3. 加入三氯甲烷(氯仿)120ul(V三氯甲烷:VTrizol=1:5)提取核酸; 4. 振荡10s至粉红色出现时停止,室温静置2~3min后分层; 5. 4℃,12000×g,离心15min,离心后,底部为细胞碎片,中间为DNA,上层为RNA产
物;
6. 吸取上层液相RNA提取液,置另一个EP管中(小心勿吸到沉淀,约为250~300ul); 7. 每管加入异丙醇300ul(V异丙醇:VTRIZOL=1:2)(异丙醇为有机溶剂,根据相似相溶原理,
RNA不溶于其中,其他杂质溶于其中); 8. 上下颠倒,轻轻混匀,室温下静置10分钟; 9. 4℃,12000×g,离心10分钟,弃上清; 10. 用800ul 75%乙醇(用1‰DEPC处理水配制)洗沉淀,振荡器振荡15秒钟; 11. 4℃,12000×g,离心5分钟,弃上清(挥发乙醇2分钟)
TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质
TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\\DNA\\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中间层可回收DNA;用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。
TRIzol试剂可用于小量样品(50-100mg组织、5×106细胞)也适用于大量样品(≥1g组织、>107细胞)。对人,动物,植物组织,细菌均适用,可同时处理大量不同样品,整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染,可用于Northern Blot,dot blot,ployA筛选,体外翻译,RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内,建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品,避免出现假阳性。共纯化的DNA可用作标准,比较不同样品RNA的得率,也可用于PCR和酶切
三层搭建过程
三层搭建过程
第一步打开vs,然后点击新建—---项目—----其它项目类型-------空白解决方案。如下图! (备注右上角是你建立的版本是3.5 的还是2.0的,这里选择的是3.5的)
注意1:名称可以重命名,这个地方我命名的是Test_Example。 注意2:存放位置自己选择一个新路径,便于以后的查找。
然后点击确认按钮提交:
这样出现一个下图的空白解决方案。
第二步:我们建立一个数据访问层:首先如上图中选中空白解决方案,然后右键----添加-----
然后选择新建项目-----选择类库。(备注下右上角是你建立的版本是3.5 的还是2.0的)
同理重命名Test_Dal,路径不需要修改。 点击确认 如下图
空白处多了一个Test_Dal
第三步:建立一个Test_Bll 业务逻辑层同理上面的Test_Dal的建立。如下图
然后确认提交:这样就建立了数据层 和 业务逻辑层。
第三步:我们这个地方以新建一个web网站为例子讲解说明,至于windows窗体应用程序的例子是一样得。
(1) 右键解决方案---添加----新建项目---选择Web---Asp.net web 应用程序如下图:
(2) 确认提交然后出现下图
三层搭建过程
三层搭建过程
第一步打开vs,然后点击新建—---项目—----其它项目类型-------空白解决方案。如下图! (备注右上角是你建立的版本是3.5 的还是2.0的,这里选择的是3.5的)
注意1:名称可以重命名,这个地方我命名的是Test_Example。 注意2:存放位置自己选择一个新路径,便于以后的查找。
然后点击确认按钮提交:
这样出现一个下图的空白解决方案。
第二步:我们建立一个数据访问层:首先如上图中选中空白解决方案,然后右键----添加-----
然后选择新建项目-----选择类库。(备注下右上角是你建立的版本是3.5 的还是2.0的)
同理重命名Test_Dal,路径不需要修改。 点击确认 如下图
空白处多了一个Test_Dal
第三步:建立一个Test_Bll 业务逻辑层同理上面的Test_Dal的建立。如下图
然后确认提交:这样就建立了数据层 和 业务逻辑层。
第三步:我们这个地方以新建一个web网站为例子讲解说明,至于windows窗体应用程序的例子是一样得。
(1) 右键解决方案---添加----新建项目---选择Web---Asp.net web 应用程序如下图:
(2) 确认提交然后出现下图
三层结构练习试题
1) 2) 3)
在使用.NET开发应用程序过程中,如果需要提供在多种数据库上无缝移植的功能时,我们应当采用 ( c ) 设计模式(选择一项) a) b) c) d)
面向对象 面向过程 抽象工厂 实体工厂
在.NET开发环境下开发一个学籍管理系统,当搭建三层结构的表示层时,需要创建的项目类型是 ( a ) (选择一项) a) b) c) d)
Windows应用程序 类库
控制台应用程序 Windows控件库
4)
在NET框架下开发三层结构应用程序时,以下代码最有可能出现在( a ) (选择一项) switch(cboLogInType){
case “学员”:
StudentForm studentForm = new StudentFomr(); studentForm.Show(); break;
case “管理员”:
AdminForm adminForm = new AdminForm(); adminForm.Show(); break; }
a) 表示层 b) 业务逻辑层 c) 数据访问层
组织RNA提取
哺乳动物组织样品RNA的抽提
哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解,以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。
关键词:抽提 样品 哺乳动物组织 样品RNA
哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解,以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。 一、实验材料:
Trizol试剂(Invitrogen公司)
研钵,匀浆器,镊子,铝箔都高温灭菌即可; 二、具体过程:
1、样品在离体后应迅速冷冻在液氮中,若是比较大块的组织,要尽量把组织剪切成黄豆大小的块,使液氮迅速渗透到组织内部而防止组织内部的RNA降解。组织用铝箔包好或放入冻存管中,并做好记号,注意不要把记号写在纸上,以防纸被组织的血水渗透而导致记号模糊。可以把铝箔放入纱布袋并储存在液氮中。
2、在抽提RNA前,先把研钵预冷,往研钵内反复加入液氮,至少4-5次,使研钵充分预冷。从液氮罐中取出样本后,把组织块放入已预冷的研钵中进行研磨,边研磨边加液氮,整个过程都不要使液氮挥干。一次研磨的组织块重量不要超过300mg。
3、研磨到组织样品成粉末状后
RNA提取步骤
1. 组织样品:称取 20mg-50mg 样品,使用液氮研磨或者匀浆器匀浆,加入 RNA-Solv ? Reagent裂解
2. 室温静置 2-3 分钟。
3. 加入 200μl 氯仿(氯仿的使用量为 1/5 RNA-Solv ? Reagent 的使用量) ,涡旋混匀 15 秒,冰浴 10 分钟。
4. 4℃,12,000×g 离心 15min。
5. 小心转移不大于 80%的水相层至新的离心管,加入 1/3 倍体积的无水乙醇,涡旋混匀 15 秒。
6. 将 HiBind RNA 结合柱套在 2ml 离心管中, 转移不大于 700μl 混合液至 HiBind RNA 结合柱中。
室温下 10,000×g 离心 1 分钟,弃滤液。
7. 重复步骤六,直至所有的混合液全部离心,结合到 HiBind RNA 结合柱上。
8. 将 HiBind RNA 结合柱套在新的 2ml 离心管中, 加300μl RNA Wash Buffer I 至 HiBind RNA 结合柱中,10,000×g 离心 1 分钟,弃滤液; 9. (选做)DNase I 消化:
a. 配制 DNase I(Digestion Buffer, 73.5μl; RNase-Fr
组态模拟三层电梯
文章乃我们班曹。。著作
目录
摘要 .................................................................................................................................................. 1 第一章 绪论 ..................................................................................................................................... 3
1.1.组态的概念 ....................................................................................................................... 3 1.2.组态软件的构成 ..............................................................................