超氧化物歧化酶活性的测定及其应用研究

植物组织中超氧化物歧化酶和平测定方法

【实验目的】

1. 了解还原法测定抗氧化酶活性测定的原理方法。 2. 熟悉植物叶片中ROS去除机制。 【实验原理】

超氧化物歧化酶（SOD）普遍存在于动植物与微生物体内。SOD是含金属辅基的酶。高等植物有两种类型的SOD：Mn-SOD和Cu/Zn-SOD。SOD能够清除超氧阴离子自由基 （O2—），它与CAT、POD等酶协同作用来防御活性氧或其他过氧化物自由基对细胞膜系统的伤害，从而减少自由基对机体的毒害。

超氧阴离子自由基（O2—）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物。SOD能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧阴离子自由基，生成H2O2和O2。生成的H2O2可被过氧化氢酶分解为O2和H2O：

2 O2—+ 2H+ H2O2+O2 2 H2O2 CAT O2+H2O

SOD

超氧自由基非常不稳定，寿命极短，一般用间接方法测定SOD活性。本实验依据SOD抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性的大小。有氧化物质存在时，核黄素可在光照条件下还原。被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2—。当加入NBT后，在光照条件下O2—又可将NBT还原为蓝色的甲腙，后者在5

SOD

超氧化物歧化酶（ 超氧化物歧化酶（SOD） ）

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全球瞩目的生物奇葩 现代生命科学的新宠

超氧化物歧化酶（SOD） 超氧化物歧化酶（SOD）

英文Superoxide Dismutase的缩写，其化学性 英文 的缩写， 的缩写 质为蛋白质（金属类）源自生命体的活性物质， 质为蛋白质（金属类）源自生命体的活性物质，是体 内对抗自由基的第一道防线。是由含109个和 个和119个 内对抗自由基的第一道防线。是由含 个和 个 氨基酸的两个肽链组成。 氨基酸的两个肽链组成。主要作用是清除氧自由基和 体内垃圾。当我们身体吸入氧气进行新陈代谢， 体内垃圾。当我们身体吸入氧气进行新陈代谢，就会 产生超氧阴离子自由基，若不予以消除， 产生超氧阴离子自由基，若不予以消除，会在体内产 生连锁反应，破坏我们的细胞， 生连锁反应，破坏我们的细胞，是人体老化及疾病的 元凶。 元凶。

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SOD-不老物质 震惊世界的发现！ 不老物质—震惊世界的发现 不老物质 震惊世界的发现！

30年代keilie（凯林） 和Mann（盖尔曼） 剑桥大学 1998年 罗伯、费瑞和洛伊格纳洛 诺贝尔生理医学奖 1969年Mc

超氧化物歧化酶SOD的分离纯化技术

证明SOD提取过程工艺不同浓度的硫酸铵对纯化SOD蛋白酶的效果

的综合影响

一、摘要：

通过对绿豆的研磨破碎获得SOD粗酶，经过(NH4)2SO4分级分离、透析除盐和浓缩等过程，除去粗酶中的杂质及干扰蛋白。

二、关键词：

SOD 连苯三酚自氧化法 SOD酶活性测量 透析除盐

三、前言：

超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase），简称SOD，是一种新型酶制剂，属金属酶.它是一种源于生命体的活性物质，SOD是机体内危害最大的氧自由基专一清除剂，亦是其他自由基最有效的清除剂，它与体内的谷胱甘肽过氧酶、过氧化氢酶联手，把自由基转化为水和氧分子。能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。本实验以绿豆为原料提取SOD，通过各步的分离提纯，应测得酶总活力逐渐减小，比活逐渐升高.通过本实验掌握物质分离纯化的实验设计过程，以及硫酸铵分离、透析除盐、浓缩和葡聚糖凝胶层析等物质分离技术。

四、实验技术路线：

我们的这次试验主要的路线是通过测定经过不同浓度的硫酸铵分离出来的不同的SOD蛋白的上清和沉淀，以此来确定硫酸铵沉淀SOD酶和其他杂蛋白的一个大致区间

大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶的分离纯化

维普资讯

菱

食品与发酵工业

F o n emett n Id sr s o da dF r nai n ut e o i

Vo.9 N . 12 o 2

大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶的分离纯化艘蠲

谢岩黎，

李元瑞

l西北农林科技大学食品科学与工程学院，凌， 1 1 0 (杨 720 ) 2河南职业技术师范学院食品科学与工程系，乡，5 0 3 (新 4 30 )

摘

要

采用热变性、乙二醇 ( E 60聚 P G)0 0沉淀作用和 D AE纤维素柱层析 3种方法对大 E一

蒜细胞溶质中的超氧化物歧化酶进行分离纯化。经过 3步分离纯化， 5 0大蒜中得到从 0g 1 . mg产品，活为 31 5 5 rg酶的类型是 C nS 56比 4 . a。 U/ u Z -OD,紫外区的最大吸收峰是 2 8在 5nm o

关键词

大蒜细胞溶质，超氧化物歧化酶，分离纯化

超氧化物歧化酶 (u eo ieds ts, sp rxd i muae S oD)一种具有清除体内超氧自由基 ( -是 02

1 3试验设备 .

uv一 1 0紫外一见分光光度计、速冷 10可高冻离心机 ( u o tRC 5 )恒温水浴锅、 D P n 一C、核酸蛋

第2期无 机 化 学 学 报Vol.16,No.

2综 述

纳米金属氧化物的制备及应用研究的若干进展

汪 信 陆路德

(南京理工大学材料化学研究室,南京 210094)

综述了氧化物及复合氧化物纳米晶的各种制备方法及特点,重点介绍了有机配合物前驱体法-聚乙二醇法、明胶法和硬脂酸法制备氧化物纳米晶的原理、特点以及在磁性材料、电磁波吸收材料、催化剂和塑料改性方面的若干应用。

关键词: 纳米材料 氧化物 软化学

分类号: O611.12

一九七八年十月我们有幸作为文革后第一批研究生来到南京大学配位化学研究所学习。开学不久,戴安邦教授为全体研究生作了题为/无机化学的进展0的学术报告,把我们带入了内容极为丰富的科学领域。虽然我们离开南京大学已有多年,虽然戴先生今年已离我们而去,但他的学术思想、治学态度和为人品格无时无刻都在影响着我们,是我们进步的一种动力。十多年来我们一直把从南京大学学到的知识和理工科大学的教学、科研结合起来,取得了一些成果,下面主要介绍一些无机纳米材料的研究工作。

1 复合氧化物纳米晶的制备方法

传统的复合氧化物的制备通常是以固态的氧化物或金属碳酸盐为原料,球磨后经高温固相反应,再粉碎得到复合氧化物的粉体。由于是高温反应,不仅制备的

叶绿体的提取

一、试剂配置

1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl（0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO（0.0005=0.1g）；4200×使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）; 2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）； 3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；

实际配制：

PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),

悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;

80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）

二、提取步骤

1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10

2009级化学第一轮复习材料·必修1 第一章 认识化学科学 09.9.1

班级 姓名 学号 第一节 认识化学科学·研究物质性质的方法和程序·钠及其氧化物 NO.1

编写：王敏 审定：王爱珍

【考纲要求】

1.了解化学的主要特点是在原子、分子水平上认识物质；化学可以识别、改变和创造分子。

2.了解科学探究的基本过程，学习运用以实验推理为基础的科学探究法。 3.了解钠的重要物理性质，化学性质。 4.Na2O，Na2O2的重要性质及典型计算。 【知识梳理】 一、认识化学科学

（一）化学科学的任务和特点：

1、任务：化学是在原子、分子水平上研究物质的组成、结构、性质、变化、制备和利用的自然科学。

2、特点：化学科学具有创造性和实用性。化学科学的特征就是认识分子和制

造分子的科学。现在科学家们发现和创造的化合物已经超过几千万种。 （二）化学科学的形成和发展：

1、近代化学科学形成和发展：（年代、人物、重大发现或发明创造、作用）（主要从17世纪中叶到19世纪末）；

（1）1661年，英国化学家、物理学家__

准确称取天山云杉种子0.1 g，先加入 1 ml 预冷的50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含1 mmol/ L EDTA)，研磨成匀浆，然后用 4.5 ml 分两次冲洗研钵至试管中，4 ℃，10000 r/min 离心 20 min，上清液即为酶提取液，4 ℃保存用于ROS系统酶活性分析。 3 酶活性的测定

3.1 过氧化物酶 (POD，EC 1.11.1.7) 活性的测定。

按照 Chance 和 Maehly[6]的方法，并作如下修改:反应混合液为50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含 0.1 mmol/ L EDTA) 2.9 mL，2 % H2O2 1.0 mL，50 mmol/ L 愈创木酚1.0 mL。测定时，反应混合液先在 25 ℃ 水浴中预热，立即加入0.1 mL酶液以启动反应，以缓冲液调零，测定OD470值，每隔 30 s读数一次。取 0 — 60 s 时间段，即 1 min 反应时间来计算酶活性。以每分钟OD470增加0.01的酶量为一个酶活单位，U·g-1。

计算公式: POD活性 = ΔA470 × Vt × (0.01× t × FW × V1) -1 注: ΔA470:反应时间内

过氧化物酶活性的测定POD

一、原理：

过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类的反应，产物为醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，在此酶存在下，H2O2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚红棕色的物质可用分光光度计在470nm处测定其消光值，即可求出该酶的活性。，

二、实验准备

仪器：分光光度计、离心机、秒表、天平、研钵、磁力搅拌器 试剂：

愈创木酚、30%H2O2、0.2mol/L磷酸缓冲液（7.8）、0.1mol/L磷酸缓冲溶液（PH6.0，见附录） 反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲溶液（PH6.0）50ml，加入愈创木酚28μl，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解、待溶液冷却后，加入（待溶液冷却后再加入，否则引起分解）30%H2O2 19μl，混合均匀，保存于冰箱中。]

三、步骤：

1、粗酶液的提取：称取植物材料0.4-0.5g，加磷酸缓冲液（7.8）5ml（分几次加入），于研钵中研磨成匀浆，以8000r/min离心10min，收集上清液于冷处（冰箱4度保存）。

2、酶活性的测定：一个试管入反应混合液3ml，磷酸缓冲液（7.8） 1ml，

高三化学第一轮复习

学案20氮气及其氧化物

本节高考重点考查： (1)氮及其重要氧化物的性质； (2)NOx对环境的影响

题型以探究实验为主，难度为中档题。预测高考将会以NO、NO2、NH3、HNO3、铵盐为载体结合生产生活实际， 在其化合物主要性质应用如NH3的制法NH的检验及相关计算方面进行命题。

一．氮气及氮的氧化物

1．N2是 色， 味，密度比空气略 ， 溶于水气体，约占空气体积 的 ，工业上利用液态空气中液态氮的沸点比液态氧的沸点低通过分馏方法制得氮气。电子式 ，结构式 。由此可以得出 N2分子的结构很 ,化学性质 活泼。 2. N2的化学性质 还原性： N2 + O2 ——

氧化性： N2 + H2 ——— (工业上制氨气方法)

N2 + Mg ——— （此产物只能存在于干态，写 出

它与水反应的化学方程式（