黑曲霉拉丁学名

实验四 黑曲霉发酵生产柠檬酸

【目的要求】

1. 掌握实验室菌种种子生产方法。

2. 掌握柠檬酸发酵原理及过程，掌握柠檬酸液体发酵及中间分析方法。 3. 熟悉并记录黑曲霉培养过程中培养基中基质的变化与产物的形成情况； 4. 掌握钙盐法提取柠檬酸的原理与方法。

【基本原理】

黑曲霉发酵生产柠檬酸实验中需要大量活化的孢子，其制备是采用麸皮培养基中保藏的黑曲霉孢子，在新的麸皮培养基上于适当的温度下活化并大量繁殖，从而产生大量活化孢子。

黑曲霉发酵法生产柠檬酸的代谢途径被认为是：黑曲霉生长繁殖时产生的淀粉酶、糖化酶首先将薯干粉或玉米粉中的淀粉转变为葡萄糖；葡萄糖经过酵解途径（EMP）转变为丙酮酸；丙酮酸氧化脱羧形成乙酰辅酶 A，然后在柠檬合成酶的作用下生成柠檬酸。黑曲霉在限制氮源和锰等金属离子条件下，同时在高浓度葡萄糖和充分供氧的条件下，TCA 循环中的酮戊二酸脱氢酶受阻遏，TCA 循环不能充分进行，使柠檬酸大量积累并排出菌体外。其理论反应式为： C6H12O6+1.5O2 → C6H8O7+2H2O

以薯干粉或玉米粉为原料的黑曲霉柠檬酸发酵液，除了含有大量柠檬酸外，还有大量的菌体，少量没有被黑曲霉利用的残糖、蛋白质、脂肪、胶体化合物以及无机盐

常见病虫害拉丁学名

拉丁学名：Anoplophora chinensis (Foster) 异 名：

英文名称：The Invasion and Destruction of Fall Webworm 中文名称：美国白蛾 中文异名：网幕毛虫

分类地位：昆虫纲鳞翅目灯蛾科

分 布：

国内 天津（宝坻、蓟县），河北（保定、大厂、易县）；日本，韩国，朝鲜，土耳其，匈牙利，捷克，斯洛伐克，前南斯拉夫，罗马尼亚，奥地利，美国，加拿大。

寄 主：

特别喜食的植物有：糖槭、桑树、白蜡、柳、杨、花曲柳、水曲柳、梧桐、泡桐、臭椿、杏树、枫杨、山楂、榆树、法桐等。一般喜食植物有：樱花、樱桃、海棠、赤杨、李、桃、板栗、核桃、核桃楸、刺槐、丁香、山定子、苹果、梨、葡萄及多种农作物、蔬菜、杂草等。偶尔危害的植物有：国槐、椴树、柞树等。

形态特征：简写

成虫 美国白蛾成虫体白色，体型中等大小，体长9～17mm，翅展25～45mm。雄蛾触角呈双栉齿状，雌蛾触角锯齿状。越冬代雄蛾前翅多有暗色斑点，当年第1代雄蛾前翅只少数个体具暗色斑点。前足基节及腿节端部橘黄色，胫节和跗节大部分为黑色。

幼虫 美国白蛾幼虫有两种类型。一种类型幼虫的头和背部毛瘤为黑色，另一类

目录

1前言 ................................................................................................................................ 2

1.1 葡萄糖酸钠概述 .............................................................................................. 2 1.2 葡萄糖酸钠的制备工艺 .................................................................................. 4 1.3 制备方法的比较 .............................................................................................. 6 1.4 葡萄糖酸钠的发展史 .......................................................

苏铁 Cycas revolute 东京樱花 P. yedoensis 旱柳 Salix matsudana 银杏 Ginkgo biloba 冷杉属 Abies 云杉属 Picea 落叶松属 Larix 金钱松 Pseudolarix amabilis 雪松 Cedrus deodara 马尾松 Pinus massoniana 油松 P. tabulaeformis 白皮松 P. bungeana 华山松 P. armandii 日本五针松 parviflora 杉木 Cunninghamia lanceolata 柳杉 Cryptomeria fortunei 水杉 Metasequoia glyptostroboides

侧柏 Platycladus orientalis 扁柏属 Chamaecyparis 园柏 Sabina chinensis 罗汉松Podocarpus ma

万方资料

第27卷第3期2005年6月江西农业大学学报

ActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensis

Vol.27,No.3June,2005

文章编号:1000-2286(2005)03-0466-03

黑曲霉LH2446产纤维素酶液体

发酵条件的研究

汪世华

1,2

,胡开辉,黄碧芳,余文英,彭利民

2223

　　(1.福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室,福建福州350002;2.福建农林大学生命科学院开放实验室,福建福州350002;3.武汉隆华生物股份有限公司技术中心,湖北武汉430000)

摘要:采用诱变后的黑曲霉LH2446液体发酵生产纤维素酶。确立了产酶最佳条件:5%稻草粉为碳源,1%的黄豆粉为氮源,培养基起始pH值为pH6.5,250mL三角瓶中装培养基75mL,培养时间为h,温度为30℃。在最适条件下产纤维素酶的最高产量为23600U/g。关键词:纤维素酶;液态发酵;产酶条件中图分类号:Q55　　文献标识码:A

StudiesonsforSubmergedFermentation

ofnigerLH2446toProduceCellulase

WANGShi-hua

2

1,2

,HUKai-hui

2

2

3

HU

新疆农业大学

《酶与酶工程》

目:

名: 院: 级: 号: 绩 专题讨论综述

黑曲霉纤维素酶酶学性质的研究及其分离纯化

2013 年4月

题姓学 班学成

黑曲霉纤维素酶酶学性质的研究及其分离纯化

摘要：

从我院保藏菌株中，分离纯化出一株较纯的产酶相对较高的菌株。通过在单因素实验基础上进行正交实验，对其液态产酶的发酵条件进行研究，结果显示：氮源为1%的NH4NO3，无机盐为1%的NaCl,表面活性剂为0.05%的tween-80，接种量为3.6%，水量为1:1.5，pH6.0,发酵温度28℃，复合碳源为麸皮：酵母粉：蛋白胨=4:1:1，装料量为75g(250ml三

北京huagong大学

生命科学与技术学院生物工程系

课程设计

题目： 黑曲霉深层发酵法生产2000t/a食品工业用

糖化酶车间工艺设计

说明书 30 页 图纸 5 张

教研室主任

指导教师 lnc老师 学生 xxx

20xx年 6月 11日于北京

0

目录

目录……………………………………………………………………………………1 设计任务书……………………………………………………………………………5 1 工艺条件的确定和工艺流程说明…………………………………………………6 1.1概述 ……………………………………………………………………………6 1.1.1糖化酶 …………………………………………………………………… 6 1.1.2黑曲霉 …………………………………………………………………… 6 1.2 工艺原理……………………………………………………………………… 7 1.2.1 生化分离工程 ……………………………………………………………7 1.2.2 发酵原理 ………………………………………………………

生物工程学报Chin J Biotech2009, March 25; 25(3): 381-387 7c2f7c7101f69e314332942c Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061

cjb@7c2f7c7101f69e314332942c? 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved

二步法黑曲霉脂肪酶基因lip A的全基因合成及其在毕赤酵母中的高效表达

杨江科, 严翔翔, 张正平, 江雪青, 闫云君

华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室, 武汉 430074

摘要:黑曲霉脂肪酶是重要的工业用酶, 在食品、制药等领域具有广泛的用途。获得黑曲霉脂肪酶高效表达的基因工

程菌是该脂肪酶规模化应用的前提。通过全基因合成对目的基因进行分子改造和人工组建是实现基因高效表达和体外

分子进化的有效手段。本研究主要针对一步法长片段基因合成中复杂结构的非特异性配对和过多的PCR引入碱基错配

等问题, 采用二步法(组装PCR和酶切-酶连)合成了黑曲霉脂肪酶基因lip A。首先在DNA2.0和Gene2Oli

1.1.4 黄曲霉毒素的解毒措施

黄曲霉毒素危害严重，分析每一批家禽饲料中霉菌毒素的含量是不可能的，当慢性霉菌毒素中毒发生时，除了轻微的生产性能下降外，没有任何明确的临床症状。在发展中国家中，每年黄曲霉毒素都会给饲料业及畜牧业带来巨大经济损失。在过去很长的一段时间里，为尽量减少霉菌毒素的危害所做的努力已经取得长足的进步，避免饲料中黄曲霉毒素的含量超过规定允许的浓度是预防和治疗毒素中毒的方法之一。为减少黄曲霉毒素及其代谢物残留在动物性食品中以及减轻毒性反应，适当的方法包括物理分离，化学方法和毒素粘合剂是必须要使用的

[42]

，如沸石化合物，活性炭，珍珠岩，膨润土，硅藻土等已经被使用。

1.1.4.1 物理去毒方法

传统用于霉菌毒素的物理去毒方法主要有混合稀释法、水洗法、热处理、脱壳、磨粉、放射、萃取、吸附等。混合稀释法是将简单地将霉变饲料与未霉变饲料进行混合，以降低饲料中霉菌毒素的浓度，此法成本低，工作量大，不能从根本上解决饲料中毒素的问题。水洗法可显著减少毒素，但只用于湿磨或发酵的前处理，否则干燥成本太高。霉菌素素在谷物表面含量高，脱壳可有效降低霉菌毒素水平，但工作量大。黄曲霉毒素耐热，一些试验表明热处理似乎能降低一些毒素水平，然而实际

黄曲霉毒素有毒性和致癌性，主要作用于肝脏

黄曲霉毒素基本结构由一个二呋喃环和一个氧杂萘邻酮组成，前者为其毒性结构，后者可能与其致癌作用有关。黄曲霉毒素进入人或动物体内后，除抑制DNA、RNA合成外, 也抑制肝脏蛋白质合成，导致人体中毒。台湾省有3家农民因食用黄曲霉毒素含量高(225.9μg/kg)的发霉大米, 导致39人中有25人中毒, 其中有3名儿童死亡。1974年印度两个邦中有200个村庄暴发黄曲霉中毒性肝炎，397人发病, 死亡106人，中毒患者都食用过霉变的玉米(黄曲霉毒素含量高达6.25~15.6 mg/kg)。2004年初肯尼亚东部地区因食用被黄曲霉污染的玉米而引起317人肝脏衰竭，125人死亡。黄曲霉毒素还可引起人或动物胆管上皮细胞增生及脾、肾、睾丸、大脑、神经系统病变，以及抑制免疫。

生理学致癌机制的研究表明：黄曲霉毒素可以与人或动物体内DNA嘌呤残基共价结合，从而造成DNA的某些损伤，引起DNA结构和功能的改变，产生癌变。它是目前公认致癌性最强物质之一。

黄曲霉毒素广泛存在，无法杜绝，采用转基因技术防治是方向 无论是农作物还是加工食品，无论是生长环节还是存储环节，都容易受到黄曲霉菌等真菌的感染。在潮湿和高温环境下这类真菌生