原发性肝癌免疫组化常用指标

常用免疫组化指标的意义

Ki-67为细胞增殖的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增殖细胞核抗原)。多数腺癌表达CEA

Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。

E-Ca E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。 PS2 （雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。

CK18 低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。

CK19 分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应

Hep par 肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。

CK20 用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。

CK7 卵巢、肺和

免疫细胞化学常用试剂介绍 佚名

一、固定剂

大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。

目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。

1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）

试剂：多聚甲醛 40g

0.1mol/L磷酸缓冲液 至1000ml

配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。

免疫组织化学 第一节 概 述

1、概念：免疫组织化学(IHC)又称免疫细胞化学。它是组织化学的分支，是应用免疫学及组织化学的原理，对组织切片中的某些化学成分进行原位显示的技术。

采用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测，检测相应的目的抗原（或抗体）,并进行定位、定性和定量分析。

实际上该法是以免疫学方法取代化学方法的一种特殊的组织化学染色技术。 免疫组织化学技术的出现和发展给传统病理学带来了一场革命，使纯形态的病理学发展成为了形态与免疫信号相结合的现代病理学。其技术应用20多年来对临床病理诊断产生了深刻的影响，目前已成为了病理诊断中不可缺少的、最重要的辅助手段。 2、发展史

3、免疫组织化学的临床应用

适用于蛋白水平上组织的抗原或抗体检测。凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。 主要用于常规石蜡切片难以完成的疑难肿瘤的诊断

（1）对肿瘤的组织起源进行鉴别诊断，确定转移性恶性肿瘤的原发部位 （2）对肿瘤的良恶性进行综合判断

（3）对肿瘤进行进一步的病理分

原发性肝癌

一 名词解释 1、小肝癌 2、原发性肝癌伴癌综合征

二 填空题： 1 、 肝癌高危人群概念是_____ 史5年以上，_____ 和______病毒标记阳性， _____ 岁以上。 2 、 AFP 诊断原发性肝癌的标准是： _____，______ ，______ 。 3、 原发性肝癌按大体形态分型可分为：______ ，______ ，______ ，______ 。

三、是非改错题： 1、原发性肝癌的并发症有：肝性脑病、上消化道出血、肝癌结节破裂出血、伴癌综合征、继发感染。 2、AFP诊断原发性肝癌的标准是：＞400μg/ml 持续4周，＞250μg/ml的中等水平持续8周。

四、简答题： AFP诊断原发性肝癌的标准是什么？亚临床肝癌如何与慢性活动性肝炎鉴别？ 五 选择题

A 型题：1 、原发性肝癌下列临床表现哪项最重要： A. 食欲减退、消瘦 B. 黄疸进行性加重 C. 肝区持续性疼痛 D. 肝硬化表现 E. 肝脏进行性增大

2 、 下列各项中对原发性肝癌的诊断最有价值的是： A.放射性核素扫描 B. AFP 动态观察 C. A 型超声波检查 D. 肝血管造影 E. 酶学检

免疫组化步骤

1、 烤片：放于60℃烘箱内，20-25min； 2、 脱蜡：二甲苯I、II、III，3次，5min/次；

注：从烘箱中拿出迅速放入二甲苯中，防止蜡凝；

3、 复水：100%酒精---100%酒精---95%酒精---90%酒精---80%酒精

---70%酒精---50%酒精，5min/次； 4、 ddH2O洗2次，5min/次；

5、 抗原修复：柠檬酸盐抗原修复液1x（迈新MVS-0100），125℃，

5min；

注：1x修复液：198ml ddH2O + 2ml抗原修复液100x,混匀；

抗原修复高压锅的使用：确定垫圈和导热片的放入，加入700ml ddH2O，放入铁架固定切片盒，注意不要压到导热片，盖上锅盖检查排气嘴是否可以自由旋转，锅盖上的“close”对准白点，“open”所指处与边缘无缝隙，设置程序，开始；结束后等到排气口的红色指示消失即可打开锅盖；

6、 修复结束后冷却至室温（30min），1xPBS洗2次，5min/次； 7、 去除 H202酶：3%H202，15min；注意遮光；

注：用1xPBS稀释30% H202至3% H20（如5ml 30% H202+45ml 2PBS 50ml 3%H202）

原发性肝癌

诊疗规范

(2011年版)

中华人民共和国卫生部

2011.10

原发性肝癌诊疗规范(2011年版)

一、概述

原发性肝癌(Primary liver cancer，PLC,以下简称肝癌) 是常见恶性肿瘤。由于起病隐匿，早期没有症状或症状不明显，进展迅速，确诊时大多数患者已经达到局部晚期或发生远处转移，治疗困难，预后很差，如果仅采取支持对症治疗，自然生存时间很短，严重地威胁人民群众的身体健康和生命安全。

原发性肝癌主要包括肝细胞癌（HCC）、肝内胆管细胞癌(ICC)和肝细胞癌-肝内胆管细胞癌混合型等不同病理类型，在其发病机制、生物学行为、组织学形态、临床表现、治疗方法以及预后等方面均有明显的不同；由于其中HCC占到90%以上，故本文所指的“肝癌”主要是指HCC。

二、诊断技术和应用

（一） 高危人群的监测筛查。

我国肝癌的病因因素，主要有肝炎病毒感染、食物黄曲霉毒素污染、长期酗酒以及农村饮水蓝绿藻类毒素污染等，其他肝脏代谢疾病、自身免疫性疾病以及隐原性肝病或隐原性肝硬化。由于肝癌的早期诊断对于有效治疗和长期生存至关重要,因此,十分强调肝癌的早期筛查和早期监测。常规监测筛查指标主要包括血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotei

生物治疗

国际消化病杂志２，Ａ０１１年８月第３１卷第４期ＩｎｔＪＤｉｉｓｕｕｓｔ２５，２０１１，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．４Ｄ·２２３·

·综述·

ＣＩＫ细胞免疫治疗原发性肝癌的研究进展

王惠成　冯　毅　戴国华

摘要：细胞因子诱导的杀伤细胞（是人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子刺激后获得的异ＣＩＫ）兼有Ｔ淋巴细胞的强大抗瘤活性和自然杀伤细胞（及主要组织相容性复合体（限制杀瘤质细胞，ＮＫ）ＭＨＣ）特点，被认为是一类杀瘤活性强和抗瘤谱广的新型抗肿瘤效应细胞。目前，ＣＩＫ细胞免疫治疗已成为继手术、放射治疗、化学治疗之后的第四种治疗原发性肝癌的手段，在肝癌的综合治疗方案中，ＣＩＫ细胞免疫治改善患者生活质量、延长生存期方面起重要作用，显示出良好的应用前景。此文从细疗在提高患者治愈率、

扩增培养、杀瘤机制、实验研究及临床应用的最新进展进行综述。胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性、

关键词：细胞因子；诱导；杀伤细胞；肝癌；细胞免疫：／ＤＯＩ１０．３９６９．ｉｓｓｎ．１６７３５３４Ｘ．２０１１．０４．０１２ｊ以下简称肝癌）是世界范围内最　　原发性肝癌（

每年大约有６常见的恶性肿瘤之一，３万的新发病而且近年来发病率有上升趋势。肝癌患者的病

免疫组化操作流程

试剂准备

1. PBS缓冲液（pH7.2～7.4）： NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。

2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。即抗原修复液

3.PBST: PBS+吐温-20（1000:1）洗液可全部运用PBST

4. 3% 甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。

5. 封片剂：中性树脂+二甲苯。

操作流程

免疫组织化学染色

SP法：

1. 脱蜡、水化：

脱蜡前，应将切片在60℃恒温箱中烘烤60~120分钟，观察石蜡应溶解。

从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟，更换二甲苯后再浸泡30分钟；

无水乙醇中浸泡3分钟；

95%乙醇中浸泡3分钟；

70%乙醇中浸泡3分钟（我用80%）；

50%乙醇中浸泡3分钟；

自来水中浸泡3分钟；

梯度脱蜡

2. 抗原修复：（用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片）

高压热修复 高压锅里放少许水，用一量杯或容器（大小能容纳玻片架为宜）装抗原修复液放入高压锅里一起煮沸，再放入玻片架，盖上不锈钢高压锅的盖子，将排气阀门套上，待听到阀门冒气时，即可倒计

石蜡切片免疫组化实验步骤

石蜡切片步骤按照晓峰整理的步骤进行（From 徐晓峰、朱老师的“石蜡切片”方案）： 1）材料的准备

在本实验室条件下推荐使用FAA（50% ethanol, 5% acetic acid, 3.7% 甲醛）固定材料。

FAA固定液（100ml），室温保存 ：

无水乙醇 50ml 冰醋酸 5ml 37%甲醛 10ml 水 35ml

第一天：组织固定

用FAA固定，详见“石蜡切片”protocol。 第二天：脱水

Solution 50% ethanol 60% ethanol *70% ethanol time 60 minutes 60 minutes 60 minutes number of changes one one one 以上所有步骤中每换好一步乙醇均置于4℃冰箱等待，并不时轻摇。 * 组织可在70% ethanol 4℃可存放几个月

第三天：进一步脱水和浸蜡

1

以下所有步骤在4℃进行并不时轻摇

Solution time number of changes 85% eth

临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果的意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”的意义打印在报告中，以增加病理报告的使用价值。

1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。

2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。

3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义

多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。

谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。

拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。

雌激素受体（ER）--性激素作用--胞