抗体偶联药物缺点

抗体-药物偶联物时代来临

□ 本报记者 白 毅

今年2月，美国FDA批准抗体-药物偶联物（ADC）Kadcyla上市，用于治疗her2阳性的转移性乳腺癌。今年6月，我国浙江医药集团也宣布将从Ambrx公司引进技术，共同开发靶点为her2的ADC药物。自1997年以来，抗体药物Rituxan、Herceptin在美国相继获准用于临床肿瘤治疗后，有人称“抗体药物的时代来临”；而今，又有人称，“ADC药物的时代来临了”！什么是ADC药物？它有着什么优势？当前的研发重点是什么？产业化开发面临什么难题？带着这些问题，记者日前采访了有关专家和业内人士。

抗肿瘤药物研发的新趋势

中国医学科学院医药生物技术研究所甄永苏院士介绍说，20世纪以来，抗体药物用于肿瘤治疗取得了突破性的进展，1986年后已批准为治疗药物的抗体及其衍生物已超过40种。然而，治疗性抗体虽然靶向性强，但是由于其分子量大，对于实体瘤的疗效有限。而小分子药物虽然具备对癌细胞的高度杀伤效力，却靶向性不足，常常误伤正常细胞，引起严重的副作用。那么，能否利用抗体对靶细胞的特异性结合能力，将药物特异性地输送到肿瘤部位，从而降低药物的毒副作用并增强抗体药物的疗效及对实体瘤的穿透性？在此想

免疫胶乳偶联试验方案一

试剂准备：

MES缓冲液 500mM，pH5-6，4℃储存；

EDAC 配置浓度为52μmol/mL（称取10mg EDAC，加入1mL去离子水）；

NHS 配制浓度为50mg/mL水溶液；

蛋白质溶液 缓冲液稀释至浓度为1－10mg/mL。 二步偶联法：

1. 将配好的溶液按以下顺序滴加入离心管 ① 100μL 500mM MES 缓冲液； ② 加水稀释至1mL； ③ 200μL 5％微球； ④ 230uL NHS 溶液 ⑤ EDAC 水溶液（计算量）

2. 放置在恒温摇床上，37℃，120rpm，30min；

3. 13000rpm离心30min，沉降后，弃上清，收集离心沉淀；用50mM MES 缓冲液洗涤2次；离心沉降后，弃上清。 4. 将配好的溶液按以下顺序加入离心管中，混匀 ① 100ul 500mM MES 缓冲液； ② 加水稀释至1mL； ③ 蛋白质溶液。

5. 放置在恒温摇床上，37℃，120rpm，2h；

1mL 6. 13000rpm离心20min沉降后，弃上清，收集离心沉淀；用1mL 50mM MES 缓冲液（或者调节pH至8.0左右），同时加入BSA溶液至其终浓度为1%，洗涤3 次；离心沉降后

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抗体药物现状与产业发展前景

志南

国家“863”计划生物工程主题专家组

抗体系指机体在抗原性物质的刺激下所产生的一种免疫球蛋白(主要由淋巴细胞所产生)，因其能与细菌、病毒或毒素等异源性物质结合而发挥预防、治疗疾病作用。近年，抗体类药物以其高特异性、有效性和安全性正在发展成为国际药品市场上一大类新型诊断和治疗剂。

1. 抗体药物的发展历程

抗体作为药物用于人类疾病的治疗拥有很长历史。但整个抗体药物的发展却并非一帆风顺，而是在曲折中前进（图1）。第一代抗体药物源于动物多价抗血清，主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动免疫治疗。虽然具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较强的人体免疫反应限制了这类药物的应用，因而逐渐被抗生素类药物所代替。

第二代抗体药物是利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物。单克隆抗体由于具有良好的均一性和高度的特异性，因而在实验研究和疾病诊断中得到了广泛应用。单抗最早被用于疾病治疗是在1982年，美国斯坦福医学中心Levy等人利用制备的抗独特型单抗治疗B细胞淋巴瘤，治疗后患者病情缓解，瘤体消失，这使人们对抗体药物产生了极大的期望。1986年，美国FDA批准了世界上第一个单抗治疗性药物——抗CD3单抗OKT3进入市场，用于器官移植时的抗排

1. Dissolve the protein to be modi?ed at a concentration of 1–10 mg/ml in 0.1 M sodium phosphate, pH 7.4. NaCl may be added to this buffer if desired. For the modi? cation of keyhole limpet hemocyanin (KLH; Thermo Fisher) as described by Staros et al., 1986, include 0.9 M NaCl to maintain the solubility of this high-molecular-weight protein.If lower or higher concentrations of the protein are used, adjust the amounts of the other reactants as necessary to maintain the correct molar ratios.

2. Dissolve the molecule

金属钯催化Sonogashira偶联反应

（芳基炔与芳基卤偶联）

一、实验题目：

金属钯催化Sonogashira偶联反应（芳基炔与芳基卤偶联）

二、实验日期:

实验地点： 实验指导老师：

三、实验目的

1. 学习金属催化的有机偶联反应 2. 掌握Sonogashira偶联的反应机理。

3. 熟练氮气保护、金属催化、回流反应等有机基本操作。

四、实验原理

Sonogashira偶联反应现代有机合成中一种非常重要的形成碳碳键的偶合技术。用于在不饱和碳原子之间形成碳碳单键。

反应是碘代乙烯或芳香烃与端炔之间经催化生成炔烯化合物的 反应。反应催化剂为钯和氯化亚铜。反应需要碱性条件下进行。

反应催化循环如下：

钯与碘乙烯发生氧化加成反应，生成乙烯基碘化钯；氯化亚铜在碱性条件下与炔生产炔化铜，后者与乙烯基碘化钯发生金属交换反应，生成乙烯基炔化钯，然后发生还原消除反应生成零价钯和烯炔，完成一个催化循环。

同大多数钯介导的偶合反应一样，该反应一般只适用于不饱和碳原子之间的偶合。在传统有机合成中，乙烯基卤素都是惰性化合物，很难发生取代反应，但在现代有机合成中这种观念发生了彻底的变化。在钯催化下乙烯基卤素化合物变得相当活泼，能发生一系列取代反应。

2017-2022年中国抗体工程药物市场深度调

查研究与发展前景分析报告

报告编号：2061630

中国产业调研网 www.cir.cn

抗体工程药物 2017-2022年中国抗体工程药物市场深度调查研究与发展前景分析报告

行业市场研究属于企业战略研究范畴，作为当前应用最为广泛的咨询服务，其研究成果以报告形式呈现，通常包含以下内容：

投资机会分析 市场规模分析 市场供需状况 产业竞争格局 行业发展现状 行业研究报告 发展前景趋势 行业政策法规 重点企业分析 行业宏观背景

一份专业的抗体工程药物行业研究报告（2017年抗体工程药物研究分析及发展趋势预测），注重指导企业或投资者了解抗体工程药物行业整体发展态势及经济运行状况，旨在为企业或投资者提供方向性的思路和参考。

一份有价值的抗体工程药物行业研究报告，可以完成对抗体工程药物行业系统、完整的调研分析工作，使决策者在阅读完行业研究报告后，能够清楚地了解抗体工程药物行业市场现状和发展前景趋势，确保了决策方向的正确性和科学性。

中国产业调研网Cir.cn基于多年来对客户需求的深入了解，全面系统地研究了抗体工程药物行业市场现状及发展前景，注重信息的时效性，从而更

有机合成中钯的催化交叉偶联反应

20102401046吴健华

摘要：2010年诺贝尔化学奖授予给美国化学家理查德·赫克、日本化学家根岸英

一和铃木章，以表彰其发现的钯催化交叉偶联反应，更有效的连接碳原子以构建复杂分子。钯催化交叉偶联反应，用于碳碳键形成的重要化学反应，因其反应条件温和，化学选择性高，副产品少，在有机合成领域中应用广泛。本文综合概述了钯催化交叉偶联反应机理与发展，并对其应用领域及发展前景作简单介绍。

关键词：钯催化；交叉偶联反应；反应机理；碳碳键；有机合成；

引言:碳是构成生命体的重要组成物质，而这些物质是以C-C单键或双键为基础，

形成各种形式的碳胳化合物，组成生命体的各个部分。而经过多年来的探究与改进，美国化学家理查德·赫克、日本化学家根岸英一及铃木章在有机合成中取得重大贡献与研究进展，发现钯催化交叉偶联反应，有效地连接碳原子，为构造更复杂的分子提供反应方法。因此于2010年，诺贝尔化学奖颁发给他们三位在有机合成中杰出并取得重大贡献的有机化学家，以表彰他们在有机合成领域中所取得的卓越成就。钯催化交叉偶联反应，作为五个被授予诺贝尔化学奖反应之一，其重要性则不言而喻。前四个反应分别是Grignard反应(格氏反应，1912年)，Di

偶联反应[编辑]

偶联反应，也写作偶合反应或耦联反应，是两个化学实体（或单位）结合生成一个分子的有机化学反应。狭义的偶联反应是涉及有机金属催化剂的碳-碳键形成反应，根据类型的不同，又可分为交叉偶联和自身偶联反应。 在偶联反应中有一类重要的反应，RM（R = 有机片段, M = 主基团中心）与R'X的有机卤素化合物反应，形成具有新碳-碳键的产物R-R'。[1] 由于在偶联反应的突出贡献，根岸英一、铃木章与理查德·赫克共同被授予了2010年度诺贝尔化学奖。 [2] 偶联反应大体可分为两种类型：

? ?

交叉偶联反应：两种不同的片段连接成一个分子，如：溴苯 (PhBr)与氯乙烯形成苯乙烯(PhCH=CH2)。

自身偶联反应：相同的两个片段形成一个分子，如：碘苯 (PhI)自身形成 联苯 (Ph-Ph)。

反应机理[编辑]

偶联反应的反应机理通常起始于有机卤代烃和催化剂的氧化加成。第二步则是另一分子与其发生金属交换，即将两个待偶联的分子接于同一金属中心上。最后一步是还原消除，即两个待偶联的分子结合在一起形成新分子并再生催化剂。不饱和的有机基团通常易于发生偶联，这是由于它们在加合一步速度更快。中间体通常不倾向发生β-氢消除反应。[3]

在一项计算化学研

金属催化的偶联反应

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Preface

In 1972, a very powerful catalytic cycle for carbon-carbon bond formation wasfirst

discovered by the coupling reaction of Grignard reagents at the sp2-carbon.Over the past 30 years, the protocol has been substantially improved andexpanded to other coupling reactions of Li, B, N , O,Al,Si, P, S, Cu,Mn, Zn, In, Sn,and Hg compounds. These reactions provided an indispensable and simplemethodology for preparative organic chemists. Due to the simplicity and reliabilityin the car

抗体ProteinA纯化

一． ProteinA柱子的制备

1. 配制溶液；

结合／洗涤缓冲液：NaCl，0.5M ；Na2HPO4 ，20mM ；PH8.0。

配制500ml的方法：

称取NaCl 4.383g，Na2HPO4 3.5814g溶解于450ml的双蒸水中。调节PH为8.0,补加双蒸水至总体积500ml。

2. 制备空柱子

（1）先打开用过的PD-10上盖，拿掉上面的盖膜。盖上盖子，摇晃，倒去里面的填料，用PBS清洗3次。

（2）用胶带固定好PD-10空柱子，要求垂直放置。

（3）在PD-10空柱子里加入2ml的Binding Wash buffer.结合缓冲液。

（4）ProteinA填料混匀，（10ml包装一小瓶）。

（5）加入5ml的ProteinA到柱子中。

（6）

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二．纯化步骤

1.

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3.

4.

5. 样品准备；将兔血清与结合缓冲液1：1混合，过滤（防止堵塞柱子）。 平衡柱子：用5-10倍体积的结合缓冲液过Protein A柱。 上样：将准备好的血清样品上样，根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。 洗脱杂蛋白：用结合缓冲液冲洗柱子，直至结合液中不含蛋白。 收集抗体：用洗脱液过柱，同时收集漏出液（约3-4ml/管），直至漏出液中不含蛋白。