N端氨基酸分析法
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氨基酸含量分析法
新增附录
附录XX 氨基酸分析法
氨基酸分析法是指用于测定蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的方法。
根据氨基酸组成分析可以对蛋白质及肽进行鉴别，氨基酸分析法可用于确定蛋白质、肽及氨基酸的含量，及测定可能存在于蛋白质及肽中的非典型氨基酸。进行氨基酸分析前，必须将蛋白质及肽水解成单个氨基酸，具体水解方法由各品种项下规定。蛋白质及肽水解后，其氨基酸分析过程与用于其他药物制剂中游离氨基酸的分析过程相同。
本法包括四种柱前衍生法，分别为异硫氰酸苯酯（PITC）法、6-氨基喹啉－N－羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）法、邻苯二醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC）法、2，4-二硝基氟苯（DNFB）法，以及一种茚三酮柱后衍生法。不同的品种应针对自身所含的氨基酸种类及各氨基酸的含量选择适宜的氨基酸分析方法并做相应的方法学验证。
由于本法衍生过程中衍生溶液量较少，且容易挥发，外标法极易出现较大的误差，建议采用内标法进行测定，内标的确定由各品种项下规定。在本法中，由于半胱氨酸或胱氨酸的衍生产物不稳定，因此对于含半胱氨酸或胱氨酸的样品衍生后应尽快测定，或者在衍生前对半胱氨酸或胱氨酸进行适当的处理，使其转化为稳定地产物（如磺基丙氨酸或半胱氨
氨基酸代谢
蛋白质的酶促降解及氨基酸代谢
一.选择题
1．生物体内大多数氨基酸脱去氨基生成α-酮酸是通过下面作用完成的。( ) A.氧化脱氨基 B.还原脱氨基 C.联合脱氨基 D.转氨基 2．下列氨基酸中( )可以通过转氨作用生成α－酮戊二酸。 A.Glu B.Ala C.Asp D.Ser 3．转氨酶的辅酶是( )
A.TPP B.磷酸吡哆醛 C.生物素 D.核黄素 4．以下对L－谷氨酸脱氢酶的描述( )是错误的。 A.它催化的是氧化脱氨反应 B.它的辅酶是NAD或NADP
C.它和相应的转氨酶共同催化联合脱氨基作用 D.它在生物体内活力不强
5．鸟氨酸循环中，尿素生成的氨基来源有( )
A.鸟氨酸 B.精氨酸 C.天冬氨酸 D.瓜氨酸 6．磷酸吡哆醛可参与下面氨基酸的( )反应？
A.脱羧反应 B.消旋反应 C.氧化
18种天然氨基酸分析
18种天然氨基酸分析
迪马科技
摘要
氨基酸组成测定是蛋白质组学、食品质量检测以及药品质量检测中的重要分析项目。本文分别以异硫氰酸苯酯、2,4-二硝基氟苯作为衍生剂对蛋白质水解液和游离氨基酸注射液进行衍生，使用Diamonsil AAA柱 250×4.6 mm，5 μm，梯度洗脱进行分离，能够满足19种天然氨基酸的分析，各组分分离度较高、定量结果准确而稳定。
Abstract
The amino acid determination is an important analysis project in proteomics, food and drug quality testing. The method determination of 19 nature amino acid in protein hydrolyzed solution and free amino acid injection, the derived reagent is phenyl isothiocyanate (PITC) and 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene. The column is Diamonsil AAA (250 ×
18种天然氨基酸分析
18种天然氨基酸分析
迪马科技
摘要
氨基酸组成测定是蛋白质组学、食品质量检测以及药品质量检测中的重要分析项目。本文分别以异硫氰酸苯酯、2,4-二硝基氟苯作为衍生剂对蛋白质水解液和游离氨基酸注射液进行衍生，使用Diamonsil AAA柱 250×4.6 mm，5 μm，梯度洗脱进行分离，能够满足19种天然氨基酸的分析，各组分分离度较高、定量结果准确而稳定。
Abstract
The amino acid determination is an important analysis project in proteomics, food and drug quality testing. The method determination of 19 nature amino acid in protein hydrolyzed solution and free amino acid injection, the derived reagent is phenyl isothiocyanate (PITC) and 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene. The column is Diamonsil AAA (250 ×
氨基酸代谢习题
蛋白质分解代谢
A型题：
1．生物体内氨基酸脱氨基的主要方式为： A．氧化脱氨基
B．还原脱氨基 C．直接脱氨基 D．转氨基 E．联合脱氨基
2．人体内氨的最主要代谢去路为： A．合成非必需氨基酸 B．合成必需氨基酸 C．合成NH4+随尿排出
D．合成尿素随尿排出 E．合成嘌呤、嘧啶、核苷酸等
3．转氨酶的辅酶组分含有：
A．泛酸 B．吡哆醛 C．尼克酸 D．核黄素 E．硫胺素
4．可经脱氨基作用直接生成α-酮戊二酸的氨基酸是：
A
20种氨基酸
非极性R基
Glycine Alanine Gly(G)
Ala(A)
Leucine Leu(L)
Methionine Met(M)
极性不带电荷R基
Serine Threonine Ser（S)
Thr(T)
Proline Asparagine Pro(P)
Asn(N)
Valine Val(V)
Isoleucine Ile(I)
Cysteine Cys(C)
Glutamine Gln(Q)
芳香R基
Phenylalanine Tyrosine Phe(F) Tyr(Y)
Tryptophan Trp(W)
带正电荷R基
Lysine
Arginine Lys (K)
Arg (R)
带负电荷R基
Histidine His (H)
Aspartic acid Asp (D)
Glutamic acid Glu (E)
实验一 纸层析法分离氨基酸
实验一 纸层析法分离氨基酸
一、实验目的
1．掌握纸层析的基本技术
2．学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸
二、实验原理
纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法：利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数、经层析而达到分离的目的。在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数，若以K表示分配系数：
层析溶剂(亦称展层剂或推动剂)是选用特定的有机溶剂和水组成的。滤纸纤维素与水有较强的亲和力(葡萄糖基的-OH基能与H2O通过氢键相互作用)，能吸附很多水分(可达22%滤纸重，其中约有6%的水与纤维素结合成复合物)，这部分被吸附的水因扩散作用降低而形成固定相。反之，展层剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可在滤纸的毛细管中自由流动而形成流动相。层析时，点有样品的滤纸一端浸入展层剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其的溶质依据自身的分配系数在这两相间不断进行分配，即随着有机溶剂不断向前移动，溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配，结果使溶质离开原点不断向前移动。由于溶质中各组分的分配系数不同，导致前行中出现移动速率差异，因而通过一定时间的层析，样品中的不同组分即可实现分离。 层析中某物质的移动速率以Rf值表示
氨基酸测定方法
4.1 光度分析法[5] [6]
β-氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸的条件下可以生成蓝紫色物质[7]，其颜色深浅主要与β-氨基丙酸的浓度有关。因此可利用此显色反应采用比色法定量测量β-氨基丙酸。我在实验中发现很多因素如浓度、pH值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大的影响。如忽视这些因素会使实验产生很大的误差。就此显色反应的最佳条件我做了初步的探究。 4.1.1试剂的配制：
缓冲液的配制：配制pH= 6.00的NaAc－HAc缓冲溶液 β-氨基丙酸标准溶液的配制：
用电子天平准确称取1.020 gβ-氨基丙酸(生化纯)，溶于250ml pH=6.00缓冲溶液中，得到C = 4.080 g/L标准溶液。
茚三酮试剂的配制：称取0.5g茚三酮溶于100ml蒸馏水中，得到5g/L的茚三酮水溶液。
4.1.2标准曲线的确定
分别准确移取0.30ml、0.40ml、0.50ml、0.60ml、0.70ml、0.80ml、0.90ml、1.00ml标准液于8个比色管中，用pH=6.00的缓冲溶液稀释到5.00ml再加入1ml茚三酮水溶液充分摇匀，将其放在沸水浴中加热10min。冷却到室温，用7230型分光光度计在569nm下测其吸光度。以吸光
氨基酸代谢习题
蛋白质分解代谢
A型题：
1．生物体内氨基酸脱氨基的主要方式为： A．氧化脱氨基 B．还原脱氨基 C．直接脱氨基 D．转氨基 E．联合脱氨基
2．人体内氨的最主要代谢去路为： A．合成非必需氨基酸 B．合成必需氨基酸
+
C．合成NH4随尿排出 D．合成尿素随尿排出 E．合成嘌呤、嘧啶、核苷酸等
3．转氨酶的辅酶组分含有：
A．泛酸 B．吡哆醛 C．尼克酸 D．核黄素 E．硫胺素
4．可经脱氨基作用直接生成α-酮戊二酸的氨基酸是： A．谷氨酸