免疫沉淀反应的应用

第四节 沉淀溶解平衡（2） 沉淀反应的应用 教案设计

杜艳艳

[教学目标]

知识与技能：

1．使学生能够运用平衡移动的观点对沉淀的溶解、生成与转化过程进行分析， 2．知道沉淀转化的本质

3．能够对相关实验的现象以及生活中的一些相关问题进行解释。

过程与方法：初步建立解决沉淀溶解平衡问题的一般思路，尝试运用微粒观、

动态观、定量观分析沉淀溶解平衡的相关问题。

情感态度与价值观：通过对生产、生活中与沉淀溶解平衡有关的某些现象的

讨论，使学生体会到化学对于提高人类生活质量、促进社会发展的作用，激发学生学习化学的热情。

[教学重点与难点]

重点：沉淀的转化的基本原理；

难点： 解决沉淀溶解平衡相关问题的基本思路；

[教学过程]

教学环节 复 习 引 入 1．溶解平衡概念： 2．特征 3．影响因素 共同回顾 填写学案 复习沉淀溶解平衡的基础知识，为沉淀反应的应用作铺垫。 教师活动 学生活动 设计意图 沉 淀 的 生 成 [情景1] \硬水\是指水中所溶的矿物质成分多，尤其是Ca、Mg。硬水并不对健康造成直接危害，但是会给生活带来好多麻烦，比如用水器具上结水垢、肥皂和清洁剂的洗涤效率减低2+2+2+ 的知识分析解决硬水中Ca、Mg与沉淀反应的

免疫共沉淀 from WHU SKY

1用细胞刮子收细胞，3000rpm，5min，离心，去上清；或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温，冰上或4度冰箱或4度离心机。

2 PBS清洗，重复步骤1

3选择合适的bufer裂解细胞，现加1000XAL（一般核质均分布的建议使用NP-40，核内分布的建议使用High Salt ，只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer），加入1ml Buffer (106-107个细胞)，4℃,30min（在功能旋转仪上旋转裂解）。 4 12000rpm，15min，离心取上清（若上清仍浑浊，可重复离心1-2次）50ul上清作为 Input，其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug（可根据抗体效价酌情增减），4℃,旋转2-4h，

加抗体时要计算使用相同抗体的样品数，取（N+1~2）*1ug，用小量裂解buffer

稀释，再均分到各样品中，以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间，准备Protein G（一个反应20ul纯beads，如果beads原管中液体和beads体积比是1:1，一个样品取总体积40ul，多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物）

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

蛋白质的沉淀反应

一、目的和要求

1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识 2、掌握几种沉淀蛋白质的方法 3、了解蛋白质变性与沉淀的关系 二、沉淀反应 （一）原理

在水溶液中，蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用，所以成为稳定的胶体颗粒。但这种稳定的状态是有条件的。在某些理化因素的作用下，蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性，则会以固态形式从溶液中析出，这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型：

1、可逆沉淀反应

沉淀反应发生后，蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显著变化。在沉淀因素去除后，又可恢复其亲水性，这种沉淀反应就是可逆沉淀反应，也叫做不变性沉淀反应。属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。

2、不可逆沉淀反应

蛋白质在沉淀的同时，其空间结构发生大的改变，许多副键发生断裂，即使除去沉淀因素，蛋白质也不会恢复其亲水性，并丧失生物活性，这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。

（二）盐析 1、材料与试剂

（1）10%的卵清蛋白溶液（要求新鲜配制）、浓蛋白溶液（2）饱和硫酸铵

免疫反应疾病（过敏性疾病）免疫功能和环境因素的关系

摘要：变态反应性疾病的“变态”是指机体免疫功能的变态、不正常，此病的病因有遗传因素、接触过敏物质，但最关键的是免疫功能不正常。变态反应疾病的特点为地区性、季节性，它的发病还与环境气候有明显的关系。由于地区地理气候不同，花粉、霉菌、螨、昆虫、污染等的分布一而不同，不同的季节、气候、环境有不同的花粉、霉菌、动植物、化学、物理的影响。许多原来机制不明，防治右困难的疾病，经研究发现与机体免疫功能有关，经从免疫入手治疗取得以前得不到的可喜治疗。调节免疫功能将成为一类重要的新型疗法。免疫调节对于过敏性疾病及免疫功能低下的愈后有很重要的作用。抗过敏益生菌台敏乐平衡免疫抗过敏解决传统过敏性疾病的治疗，台敏乐抗过敏益生菌所含五种专利菌株具有现有技术中未知的可用于增进抗过敏的能力，并可通过增进TH1型免疫反应来调控因过敏而反应过度的TH2型免疫反应的方法。并含有多种益生元成分可增加免疫力，减少呼吸道反复感染的优势。

关键词：变态反应疾病 免疫功能 环境因素 抗过敏益生菌

一、 变态反应疾病与环境、气象、地理的关系

变态反应性疾病也称过敏性疾病。变态是指机体免疫功能的变态、不正常。病因有遗传因素、接触过敏物质，但最关键的

实验7 蛋白质的等 电点测定和沉淀反 应

I. 蛋白质等电点测定 一、目的： 目的： 了解蛋白质的两性解离性质 学习测定蛋白质等电点的一种方法

二、原理： 原理：蛋白质是两性电解质，在溶液中存在如下平衡： 蛋白质是两性电解质，在溶液中存在如下平衡：+ OH+ H+ NH3+ COO+ OH+ H+ NH2 COO-

Pr

NH3

+

Pr

Pr

COOH

pH< pI净电荷为正

pH = pI净电荷=0 净电荷

pH > pI净电荷为负

蛋白质等电点：当蛋白质颗粒上正负电荷 蛋白质等电点： 数目相等时溶液的pH值 数目相等时溶液的 值。 处于等电点时的蛋白质在电场中不发生移 动；处于等电点时的蛋白质溶解度最低。 处于等电点时的蛋白质溶解度最低。 用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶 用醋酸与醋酸钠( 液中)配制成各种不同 值的缓冲液 值的缓冲液。 液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。向缓 冲液溶液中加入酪蛋白后， 冲液溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓 冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。 冲液的 值即为酪蛋白的等电点。 值即为酪蛋白的等电点

三、器材1.水浴锅 2.温度计 3.200毫升锥型瓶 4.100毫升容量瓶 4.100 5.吸管 6.试管 7.试管

在参加MMT 后的第20～30天是个“心理危险期”,此时,吸毒患者往往可能偷吸海洛因。若缺乏引导、支持,吸毒患者极有可能偷吸并重新对海洛因产生依赖,退出MMT 。因此,在心理危险期给予相关健康知识讲解和心理辅导显得尤为重要。

经对2006年12月—2009年11月接受美沙酮维持治疗的1663例海洛因成瘾患者的情况作出的分析[2]

显示:男1446例(86.95%),女217例(13.05%),男性显然高于女性。有临床观察分析认为,可能与女性患者治疗期间的心理压力和经济压力相关。因此,在实际的治疗过程中,加强对患者(尤其是女性患者)的心理疏导显得更为重要。2　临床对策

2.1　针对维持治疗量　在对海洛因有依赖性的病人

治疗过程中,美沙酮的服用剂量要进行严格的控制。

大剂量虽然疗效显著,却会产生一些毒副作用[3]

。因此,临床只有根据个体差异选择合适的治疗剂量(一般将替代剂量控制在20mg/d ～40mg/d ),才能达到良好疗效。

2.2　针对维持治疗时间　怎样维持替代治疗,如何减

少病人的复吸率,成为影响美沙酮维持治疗效果的关

键。首先,尽量延长海洛因依赖患者治疗时间,逐渐降

低美沙酮替代治疗浓度,使病人最终能够远离毒品。其次,对已经停药的患者进行跟踪监控,一旦

沉淀溶解平衡专题训练

1．下列对沉淀溶解平衡的描述正确的是( ) A．反应开始时，溶液中各离子浓度相等。

B．沉淀溶解平衡达到平衡时，沉淀的速率和溶解的速率相等

C．沉淀溶解平衡达到平衡时，溶液中溶质的离子浓度相等，且保持不变。 D．沉淀溶解平衡达到平衡时，如果再加入难溶性的该沉淀物，将促进溶解。 2．下列物质的溶解度随温度的升高而减少的是( )

A．KNO3 B．Ca(OH)2 C．BaSO4 D．CO2 3．下列说法正确的是( )

A．往NaCl饱和溶液中滴加浓盐酸，NaCl的溶解度减小 B．升高温度，物质的溶解度都会增大 C．在饱和NaCl溶液中存在溶解平衡 D．在任何溶液中都存在溶解平衡 4．在饱和的CaSO4溶液中下列哪种物质不存在( )

＋－＋

A．Ca2 B．SO42 C．H D．H2SO4 5．向含有AgCl(s)的饱和AgCl溶液中加水，下列叙述正确的是( )

A．AgCl的溶解度增大

　1998年第6期　　　　　　　　　　　　中国非金属矿工业导刊　　　　　　　　　　　总第6期　·矿产加工利用·沉淀硫酸钡的原料、生产工艺及应用前景

吉化公司石井沟联合化工厂　汪多仁

摘　要　本文概述了沉淀硫酸钡的资源、性能、用途、合成方法和市场需求。关键词　硫酸钡　生产　应用

Abstract　Throughtheanalysisofresources,properties,uses,syntheticwayandproductiontechnologyoftheprecipitatedbariumsulfate,thispaperindicateditsmarketdemandandapplicationprospect.

KeyWords　Production　Application　Precipitatedbariumsulfate

　　硫酸钡有两种类型,一种为沉淀型,另一种为水洗型。天然产出的是重晶石,工业产品有重晶石粉碎而成的重晶石粉和以重晶石为原料经化学反应而制成的沉淀硫酸钡。重晶石粉为白色结晶性粉未(斜方晶系,加热到1149℃则变成单斜晶系),相对密度为

3

4.499g/cm,熔点1580℃(分解),不溶于水,溶于碳酸碱金属盐中则变成碳酸钡