长规药敏定量实验

定量实验

1.制一配定物质的量 浓度的液溶

配

定量实验

2m制ol ·-110m0NlaCl液溶 L实验用——品器仪

1

定量实验

、算选计仪器①N择alC体固托盘天→ 具平 体0②.1olm/L aCl→N托 盘方法天 平 ③01ml0→100ml量瓶

容计算maNCl=n =CMM =V20.×1×5.58=11 .(7)

g计算①,时溶液的体积应该等所于选用的量容 注意瓶的体积 事 项计算出②的据应数该与所使的用称量器仪准确的 一致度

2、

定量实验

量称⑴体称固 量~托 天平 ①准盘备作工：选规取格→平→调零 放体具 称②工作：量称量烧杯→加1.7g砝码1游码 或法 方→加aNC至天l平平 ③结束工衡：作码回盒→取码拨回→放盘一零 ⑵液侧体量 取 ~量筒或定管或移液管(滴此)略① 所用的托盘天平的量程≥选maCN 注l ②意Nal不C直能接在放盘上进托行称 事量 项③只能镊用子夹砝码取或动拨游码

定量实验

3溶、取解04m l →烧在杯→ 拌加搅 蒸馏水 中解 速溶溶

具解 方体法

注 意项事

①V 溶≤解2 /(5) V配制 ② 溶 应解充分

定量实验

4移液、冷 具却体方 法液 移洗 移涤液振

注意 事荡项

溶解①后溶液一的要冷却

RT-qPCR比较不同样本中miR-21的相对表达差异

一、实验目的

1、掌握实时荧光定量PCR的实验原理。

2、掌握实时荧光定量PCR相对定量的分析方法。

二、实验原理

实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。荧光定量PCR 最常用的方法是DNA 结合染料SYBR Green Ⅰ的非特异性方法和Taqman 水解

探针的特异性方法。本实验中采用非特异性SYBR Green I 染料法，SYBR Green I 是一种结合于所有ds DNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，在游离状态下会发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA 结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I 的荧光信号强度与双链DNA 的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA 数量。

三、实验仪器、材料和试剂

实验仪器：PCR仪、荧光定量PCR仪

实验材料：MCF7细胞

实验试剂：逆转录试剂盒、SYBR GREEN试剂盒

四、实验步骤

MCF7细胞RNA提取（RNAiso Plu

药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。

一. 药敏纸片的制备

1.材料

抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等

2．方法

PBS的配制

A.制备L储备液

LNa2HPO4 ： +1000 mL蒸馏水

或 +1000 mL蒸馏水

L NaH2PO4 : +1000 mL蒸馏水

或 +1000 mL蒸馏水

B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用

L磷酸缓冲液的配制

抗菌药物原液的配制和保存期限

抗菌药物配制溶剂和保存期限

抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃

青霉素 PBS 1280 3个月1周

半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周

头孢菌素类 PBS 1280

实时荧光定量PCR原理和实验 所属分类: 基因检测 更多见 www.infobio.org 无论是对遗传病(如地中海贫血和血友病)、传染病(如肝炎和艾滋病)或肿瘤进行基因诊断，还是研究药物对基因表达水平的影响，或者监控药物和疗法的治疗效果，定量PCR技术都可以发挥很大作用。定量PCR技术的最新进展是实时荧光定量。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物，一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA拷贝数，做到了真正意义上的DNA定量。这是DNA定量技术的一次飞跃。 根据最终得到的数据不同，定量PCR可以分为相对定量和绝对定量两种。典型的相对定量如比较经过不同方式处理的两个样本中基因表达水平的高低变化，得到的结果是百分比；绝对定量则需要使用标准曲线确定样本中基因的拷贝数或浓度。根据所使用的技术不同，荧光定量PCR又可以分为TaqMan探针和SYBR Green I荧光染料两种方法。比较而言，探针杂交技术在原理上更为严格，所得数据更为精确；荧光染料技术则成本更为低廉，实验设计更为简便。在选择实验方案时要根据实验目的和对数据精度的要求来决定。

地理信息科学专业

定量遥感

实验指导书

2016 年 3 月

目

录

实验一 遥感辐射信息获取与大气校正

实验二 地物识别与定量反演

实验三 Erdas 遥感反演建模-植被指数反演

实验四 Erdas 遥感反演建模-地表温度反演

实验一 遥感辐射信息获取与大气校正

1．实验目的

（1）初步了解目前主流的遥感图象处理软件 ERDAS，ENVI 的主要功

能模块；

（2）掌握 Landsat ETM 遥感影像数据，数据获取手段。掌握 Erdas 遥

感影像辐射信息获取；

（3）加深对遥感理论知识理解，掌握遥感大气校正方法。

2．实验内容

掌握遥感辐射定标方法，理解并独立完成三种 ENVI 大气校正（黑

暗象元法大气校正、 QUAC 快速大气校正 、Flaash 大气校正）

3．实验主要过程

（1）遥感影像辐射定标

（2）数据预处理

（3）QUAC 快速大气校正

（4）简化黑暗象元法大气校正

（5）Flaash 大气校正

4．实验重点、难点

（1）理解遥感辐射校正基本原理；

（2）掌握常用的三种大气校正方法，能够熟练使用 ENVI 完成；

（3）Flaash 大气校正

CSCR-2012-00003

长沙市人民政府

关于印发《〈长沙市城市规划管理技术规定〉

补充规定》的通知

长政发〔2012〕3号

各区、县（市）人民政府，市直机关各单位：

现将《〈长沙市城市规划管理技术规定〉补充规定》印发给你们，请遵照执行。

二○一二年二月六日

《长沙市城市规划管理技术规定》补充规定

为进一步规范统一规划许可标准，增强《长沙市城市规划管理技术规定》的操作性，根据国家和省市相关法律、法

规，结合本市实际情况，对《长沙市城市规划管理技术规定》（以下称《技术规定》）作出如下补充。

第一条 城市建设应按规划成片实施，一般应以街坊为单位，以规划道路为界限，规划蓝线原则上应划至用地周边规划道路中心线。无单独建设条件或规划部门认为不适合单独建设的，必须按规划要求与周边用地整合。

第二条 同一建设项目，相毗邻的两个或多个地块（控规）规划指标，经规划行政主管部门核准，可在建设基地范围内总量平衡，但不同建筑性质的容量指标不得相互转换。商住用地其住宅建筑面积原则上不得突破规划设计条件对应的上限值，在不突破规定的总建筑面积容量的前提下可浮动1%。控规中的规划指标可按审定的修建性详细规划或规划设计总图备案。规划修改项目

ＰＣＲ 技术 业精于勤而荒于嬉 行成于思而毁于随

定量PCR技术

①传统终点定量法：为终点定量，重现性差、误差较大，只能作半定量、粗略定量

缺点：1、传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差，

无法直接从终点产物量推算出起始模板量。加入内标后，可部分消除终产物定量所造成的不准确性。

2、在待测样品中加入内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著，由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。

方法：以看家基因为内参，通过目的基因与看家基因扩增产物的电泳条带的灰度、宽窄、光密度比值来确定待测目的基因的表达量。

内参基因（看家基因）：在细胞中的表达量或在基因组中拷贝数恒定，受环境因素影响较小，用于对样本初始浓度差异进行均一化校正，常用的有β-actin、GAPDH、18sRNA等。

1）内参照法：在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同

实验四 交叉列表与等级相关分析（Crosstabs）

主要知识点与功能

交叉列表分析是对两个变量之间关系的分析方法。被分析的变量可以是定类变量也可以

2

是定序变量。系统对两个变量进行交叉列表分析后生产交叉表和输出χ检验结果。

调用此过程可进行计数资料和某些等级资料的列联表分析，在分析中，可对二维至n

2

维列联表（RC表）资料进行统计描述和χ检验，并计算相应的百分数指标。此外，还可计算四格表确切概率（Fisher’s Exact Test）且有单双侧（ One-Tail、 Two-Tail），对数

2

似然比检验（Likelihood Ratio）以及线性关系的Mantel-Haenszelχ检验。

一、 交叉列表分析（Crosstabs）

（一） 、执行命令：Analyze——Descriptive Statistics——Crosstabs，打开如下对话

框

（二）、确定交叉列表分析的变量

从左侧窗口选择两个名义变量或顺序变量分别进入Row(s)（行）框和Column(s)（列）框。Display clustered bar charts是在输出结果中显示聚类条形图。Suppress tables是隐藏表格，如果选择此项，将

摘要:药敏试验能够快速的确定病原菌以及药物敏感结果，加强耐药监测，减少用药的盲目性，合理使用抗生素有效控制感染，避免耐药菌的产生，提升治愈率。临床微生物实验室应选择先进、方便的方法进行常规的抗菌药物敏感实验。

关键词:临床,常用,细菌,药敏,试验,方法，药敏,试验,能够,快速

药敏试验能够快速的确定病原菌以及药物敏感结果，加强耐药监测，减少用药的盲目性，合理使用抗生素有效控制感染，避免耐药菌的产生，提升治愈率。临床微生物实验室应选择先进、方便的方法进行常规的抗菌药物敏感实验。

一、国内常用常用的四种方法:

第一种纸片扩散法

原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，在纸片周围抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长K的透明圈即抑菌圈。其大小反映测试菌对测定药物的敏感性，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度呈负相关。

优点:药敏试验具有重复性好、操作简便、试验成本相对较低、结果直观、容易判读、便于基层开展等。

缺点:其虽是一一种传统、经典的药敏试验方法，但随着全自动微生物分析仪的推广和应用，K-B 纸片扩散法出现药敏试验假耐药、受人为因素影响较大、试验耗时长的缺点也渐渐体现出来，同时快速性、准确性方面存在不足[1]。

应用:应用于兼性厌氧

微量肉汤稀释法药敏检测

以下实验方法主要适用于需氧菌及部分兼性厌氧菌（以大肠杆菌为例），微需养菌和厌氧菌的培养条件亟待摸索。本实验方法，虽然操作较为繁琐，但是能够确切的得到细菌临床分离株对某种抗菌药物的MIC值，以此作为临床用药指导的部分依据。 菌悬液的制备：

① 菌液培养：取待测菌保存液10μL加入1mLMH肉汤（可根据实际需要做调整），置37℃温箱过夜静止培养12小时左右；

② OD600值测定：利用紫外分光光度仪测定OD值，MH肉汤调整菌液浓度使其OD600值落在0.08-0.1之间，此时菌液浓度约10cfu/mL（大约需将培养菌液稀释7-10倍左右）； ③ 上样菌液稀释：将待测菌液在步骤②所得稀释倍数的基础上再稀释1000倍，此时菌液浓度约10cfu/mL（即7000-10,000倍），此时的菌液即为上样菌悬液； 注意：测定OD值所需菌液应在超净台中无菌取样，剩余菌液还需实验。 抗菌药物的制备：

抗生素母液配制：参照NCCLS标准上抗菌药物相应的R（抗药）值制备待测抗菌药物（母液浓度要远远大于R值，至少160倍），分装于无菌小管置-20℃备用（附件一.常用抗生素溶液的配制）。

5

8

注意：无菌操作，抗菌药物的稀释液均需灭菌，溶解后