生物必修一探究酵母菌细胞呼吸的方式

综合目前常用的几种方案,比较适合中学生日常做实验用

探究酵母菌呼吸方式的改进实验方案

方案一：探究酵母菌的发酵现象（第1至2组的方案） 1、 准备2个相同矿泉水瓶，并分别标注为ＡＢ，

2、 先在杯子倒入半瓶温开水，再加入葡萄糖搅拌，使葡萄糖溶解。然后倒入Ａ矿泉水中，在瓶口封上保鲜膜，并拧紧盖子；

3、 在杯子中倒入半瓶温开水，再加入葡萄糖搅拌溶解于水中。压碎酒饼（即酵母菌），倒入杯中进行搅拌，混合均匀后，倒入B矿泉水瓶中，在瓶口封上保鲜膜，并拧紧盖子。

4、 安放1天或2天，观察现象

现象：B瓶子变得很硬，保鲜膜上有水珠出现

注意事项：1、要用温开水，瓶盖一定要拧紧，一旦盖上瓶盖，就不能拧开，否则实验失败

2、静置在课室内，不要经常摇动。

方案二：探究酵母菌的发酵现象（第3至4组的方案）

1、 准备2个相同矿泉水瓶，并分别标注为C D，

2、 先在杯子倒入半瓶温开水，再加入葡萄糖搅拌，使葡萄糖溶解。然后倒入C矿泉水中，在瓶口用橡皮筋绑紧一个气球；

3、 在杯子中倒入半瓶温开水，再加入葡萄糖搅拌溶解于水中。压碎酒饼（即酵母菌），倒入杯中进行搅拌，混合均匀后，倒入D矿泉水瓶中，在瓶口用橡皮筋绑紧一个气球。

4、 安放1天或2天，观察现象

现象：D瓶上的气球被吹胀了

注意

采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/\基因组DNA的提取

一：仪器：同方法一

二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前

三：操作

1.5ml 对数生长期细菌细胞

离心，12000rpm,1-2min

沉淀

溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr

离心，12000rpm,8-10min

沉淀

溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr

加入1.2ml的CTAB

酵母DNA提取方法

方法一：

石英砂法

1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于 200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入 3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡 13min，每隔 4min 将离心管取出用力甩几下，然后 65℃水浴 10min。 2、加入 200μL 5mol/L KAc，冰浴 8min； 3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；

4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇 200μL混匀后冰浴 8min，12000rpm×5min收集沉淀；

5、200μL TE 溶解，加入 RNase10μL，65℃水浴 10min； 6、加入 200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；

7、温柔地取上清 150μL ，加入 20μL 3 mol/L NaAc 及 375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集 DNA；

8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后 TE 溶解，-20℃保藏。

方法二：

蜗牛酶法

1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在

微生物实验报告

酵母菌的培养及观察实验

刘欣怡201100140057

生物科学基地班

组别：周一下午三组

同组者：曹平平，周楠，

刘艺，刘希伟

实验完成时间：2012年11月19号

一、实验目的

1、了解酵母菌的形态及出芽方式 2、学习区分酵母菌的死细胞和活细胞 3、掌握酵母菌子囊孢子的观察方法 4、巩固显微镜操作技术和无菌操作技术

二、实验器材

1．菌种 ：

酿酒酵母7d麦氏培琼脂（产孢培养基）斜面培养物，酿酒酵母2d YPD（酵母合成培养基）液体培养物。 2. 培养基 ：

酵母合成培养基，麦氏琼脂斜面 3、试剂：

0.01%美蓝水溶液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇，蒸馏水、香柏油、去离子水等。 4. 仪器

试管，锥形瓶，酒精灯，显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶，接种环，滴管，滤纸，镊子、培养皿等。

三、实验原理

1、培养基：

酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用

实验四 酵母菌与霉菌的形态观察

一. 实验目的

1. 2. 3. 4.

观察酵母菌的形态与结构并掌握其特征。

观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。 观察并掌握各种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。 进一步熟悉显微镜的使用。

二. 实验原理

酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。

酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。

霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。

霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，

《生命科学文献与论文写作》课程论文

利用酵母菌生产蛋白质

摘要：蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着十分重要的作用，是生命机体几乎所有重要活动的承担者。酵母菌应用于生物领域由来以久。6000年来人们用这种微小的真菌制作面包、啤酒和酒。现今用于直接治疗疾病的人类蛋白质的生产，已经成为一个每年有着190亿美元产值的产业。但是这种生物大分子目前却不能大批量的生产。它们大都是费时费力的从培养皿中培养的动物（如中国仓鼠）细胞分泌提取的。基因工程研究人员发现了一种用低等的酵母菌来生产人类蛋白质的新技术。这种技术开辟了一条大量生产生物药品的新途径。酵母菌能够用来生产复杂的人类糖蛋白，这种技术对于治疗用人类蛋白的生产有着革命性的意义。更好、更便宜、更快、更安全，并提供了一个对产品的最终质量进行控制的手段。作为宿主的酵母最常用的是毕赤氏酵母和酿酒酵母。 关键词：酵母菌;生产;蛋白质

Production of proteins using the yeast

Abstract: Protein in cells and organisms of biological processes, play an important role in almost

探究：培养液中酵母菌种群数量的变化

目的要求 1、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法 2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化 3、注意样方法的应用 4、体会影响种群数量变化的因素

回顾思考:1、酵母菌的繁殖方式主要是: 出芽生殖 2、酵母菌的呼吸方式是: 兼性厌氧(可进行有氧呼吸和无氧呼吸)

探究：培养液中酵母菌种群数量的变化

例如：酵母菌的种群数量在营养条件有限 的情况下呈S型增长。

介绍:血球计数板的构造

1、血球计数板：是显微镜上的外挂物件,可用来测量 细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量, 如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块比普通 载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽, 构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽 隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.

2、方格网的构成：25×16

A D G

B E H

C F I16×25

化

放大后的方格网计数室 方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为 计数室, 计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16 中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25 中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种 构造;它们都有一个共同的特点,即

实验一 酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

预习内容：

1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页） 2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页） 预习思考题：

1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？

2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？

3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？

4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它? 一、实验目的与要求

1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法； 2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、实验原理

1. 酵母菌

酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖

利用重组酵母菌生产人胰岛素

摘要：利用重组酵母菌生成人胰岛素为以下流程：获得目的基因→构建重组质粒→构建基因工程菌→工程菌发酵→产物分离纯化→产品检验。其中前三个流程为产人胰岛素酵母工程菌的构建，根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码子， 采用基因半合成技术合成人胰岛素基因。将合成的胰岛素基因克隆到pPIC9质粒，构建了毕赤(Pichia)酵母重组表达载体pPINS319，用BglII线性化后用电转化法导入毕赤酵母GSll5菌株，经过营养筛选和PCR 复筛，得到含人胰岛素基因的毕赤酵母工程菌株。后三个流程为胰岛素的大规模发酵生产，通过补料-分批发酵获得发酵液，分离纯化后获得人胰岛素。纯化后的重组人胰岛素产品经SDS-PAGE检测，氨基酸组成分析及小鼠惊厥实验证明制得产品为有生物活性的人胰岛素。

关键词：重组酵母；人胰岛素；发酵；纯化；鉴定

Using recombinant yeast to produce human insulin

HuSheng 1142043040

Abstract：The proceedings of produce human insulin by recombinant yeast show as foll

山东大学实验报告2017年11月20日

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科目：微生物学实验题目：酵母菌死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：丁志康

一、 目的要求

1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 3、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。

二、 基本原理

1、酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍。大多数酵

母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方法。

2、美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化形成蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化性变为无色的还原性。因此。具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

3、子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中