荧光光度法测定维生素b2实验报告

实验六 荧光光度法测定样品中维生素B2的含量

一、目的与要求

1． 掌握用荧光光度法测定维生素B2的原理; 2． 加深对荧光光度法原理的理解; 3． 巩固荧光光度计的基本操作。 二、方法原理

维生素B2又称核黄素，溶于水，在ω为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。维生素B2在一定波长光照射下产生荧光。在稀溶液中，其荧光强度与浓度成正比，即：

F = Kc

故可采用标准曲线法测定维生素B2的含量。 三、仪器与试剂

1．930型荧光光度计及其附件。 2．容量瓶：25 mL。

3．维生素B2标准贮备液（100 mg·L）：准确称取25mg维生素B2，用ω为0.05的乙酸溶解，转移至250 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，保存于冰箱中。

4．维生素B2标准工作液（0.5mg·L-l）：吸取上述贮备液0.50mL于100 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，随用随配。

5．含维生素B2的水样（自行制备）：取VB2片剂一片，用ω为0.05的乙酸溶液溶解（若有不溶杂质，过滤即可），稀释适当倍数后测量。

四、内容与步骤 1．标准系列溶液的配制

吸取维生素B2

荧光光度分析法测定维生素B2的含量

引言

荧光分光光度法简介

有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。

由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g／m1，线性范围宽。现在主要应用的是荧光分光光度计。 【实验目的】

1. 学习荧光光度法测定维生素B2的含量的基本原理和方法。 2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。 【实验原理】

在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c有以下关系：

IF?2.303?I0?bc

当实验条

上海大学生命科学实验中心

课 程： 学 号：

生化分析实验 09123364

实 验 报 告

姓 名： 吴梦楠 同组者： 温 度：

日 期： 2011.09.21 指导老师： 戴小峰 湿 度：

实验时间： 2011.09.19

实 验 名 称：紫外可见分光光度法测定维生素B2 实 验 目 的：1、维生素B2的紫外可见光谱图的测绘

2、根据E1M444nm文献值323求取样品中VB2的含量 3、用标准曲线法求取样品中VB2的含量 4、比较两种方法的误差来源

实 验 原 理：维生素B2，通常指核黄素。维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一

般取444nm的波峰为定量吸收峰，除了用一般的工作曲线法外，还可按C17H20N4O6 的吸收系数（E1M444nm）为323计算，求取样品中维生素B2的含量。

实 验 器 材：Cary100UV-Vis分光光度计、冰醋酸（AR）、氢氧化钠1mol/L（AR）、维生素B2标

准试剂（0.3mg/ml）、药片（含维生素B2片）。

实 验 步 骤：1、取待测片剂20 片，精密称定、研细，精密称取适量（约相当于维生素B210mg），

1、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理2、掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

补充实验 荧光法测定维生素B2片剂中核黄素含量

一、实验目的

1、 了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理

2、 掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

二、实验原理

某些物质被某种波长的光（如紫外光）照射后，会在极短时间内，发射出较入射光波长为长的光，这种光称为荧光。吸收什么波长范围的光和发射什么波长范围的光，这与被照射的物质有关。而所发射的荧光的强度与该物质的浓度有如下关系：

-alc If=KфI0（1-e）

式中：If为荧光强度；K为仪器常数；ф为荧光物质的荧光量子产率；I0为入射光

-1强度；l为样品池厚度；c为荧光物质的浓度（mol l）；a为荧光物质的摩尔吸光系数。

当溶液浓度较稀时，则If=KфI0alc

可见，在稀溶液中，当入射光强度、样品池厚度、仪器工作条件不变时，测得的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。

维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为

核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。

核黄素B2在230～490nm范围波长的光照射下，激发出峰值在526nm

紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量

一、实验目的

1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法； 2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。

二、实验原理

维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变 ,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H+,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。

具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达104-106数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 5～ 6之间稳定）中，在245 nm 波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。

三、实验仪器及试剂

实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5

实验一 紫外分光光度法测定维生素C片中的VC含量

一、实验目的

1、了解紫外分光光度计的主要结构及工作原理。

2、掌握紫外分光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法

3．掌握紫外分光光度法测定水中维生素C含量的原理与分析条件的选择。

二 、实验原理

维生素C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化-还原反应,并且有解毒作用。人体不能自身制造Vc，所以人体必须不断地从食物中摄入Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的Vc。缺乏时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。

维生素C属水溶性维生素，分子式C6H8O6。分子结构中具有二烯醇结构，其结构如下：

它易溶于水，微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。分子中的二烯醇基具极强的还原性，性质活泼，易被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。维生素 C分子结构中有共轭双键，固在紫外光区有较强的吸收。

根据维生素C 在稀盐酸溶液中，Vc吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处，其吸收值A的大小与维生素C的浓度c的大小成正比，符合郎伯—比尔定律：

1

A=εbc

其中A为吸收度；c为试样中维生素C的浓度，mol·L-1；b为吸收池厚度，cm；ε为摩尔吸收系数，L·mol-1·cm-1。若在最大吸收波长下，首先绘制出

实 验 报 告

姓名： 班级： 同组人： 自评成绩：

项目： 直接碘量法测定维生素C的含量 课程： 学号：

一、实验目的

1. 熟悉直接碘量法的操作步骤及注意事项。 2. 了解维生素C的测定原理及条件。 二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸，其分子中的烯二醇基具有较强的还原性，能被I2定量氧化成二酮基，所以可用直接碘量法测定其含量。反应方程式如下：

OHOOOHCCH2OH+ I2HOHOOOHOCCH2OH+ 2HIHO

在中性或碱性条件下，维生素C易被空气中的O2氧化而产生误差，尤其在碱性条件下，误差更大。故该滴定反应在酸性溶液中进行，以减慢副反应的速度。

注意事项：

1. I2具有挥发性，取完后应立即盖好瓶塞。

2. 维生素C易被空气氧化而引入误差，所以不要3份同时移取。 3. 滴定近终点时应充分振摇，并放慢滴定速度。 三、仪器和药品

仪器：分析天平，酸式滴定管(25mL，棕色)，吸量管(2mL)，量筒(15mL、5mL)，碘量瓶(250mL)。

试剂：维生素C注射液(20mL : 2.5g)，

紫外分光光度法测定未知物

1.仪器

1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂

2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。

2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作

3.1比色皿配套性检查

石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析

将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。 五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图

HPLC法测定果蔬中维生素C

摘要通过高效液相色谱法和国标法2种方法测定了果蔬中的维生素C，通过精密度、准确度、回收率等方法对比结果表明：液相色谱法是一种高效、快速、准确、高灵敏度的分离分析方法。

AbstractIn this paper，high performance liquid chromatography and national standard method were used to determine VC in fruits and vegetables. Through the precision， accuracy，recovery methods，etc.，such as comparative results showed that liquid chromatography was an efficient，fast，accurate and high sensitivity separation analysis method.

Key wordsHPLC method；fruits and vegetables；vitamin C；determination

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它能

实验十九 分光光度法测定微量铁

一.实验目的

1.了解分光光度计的构造和使用方法。

2.了解邻二氮菲光度法测定铁的实验条件，掌握和了解实验条件的一般研究方法

3.学习邻二氮菲分光光度法测铁的方法。

二.实验原理

吸光光度法是根据溶液中物质对光选择性的吸收而进行分析的方法。它具有较高的灵敏度和一定的准确度，特别适宜于微量组分的测定。吸光光度法可以分为比色法和分光光度法两大类。本实验采用分光光度法。

分光光度法测定物质含量时应注意的主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时间、显色时溶液的温度、干扰物质的消除方法等。测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。

光度法测定微量铁的显色剂有邻二氮菲(phen)、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。目前大都采用邻二氮菲为显色剂测定微量铁。在pH=2～9的条件下，Fe2+离子与邻二氮菲生成稳定的橘红色络合物，反应如下：

Fe2??phen?Fe(phen)32?(橘红色)

4此络合物lgK稳=21.3，摩尔吸光系数?510?1.1?10。

显色前，要用盐酸羟胺把Fe3+离子还原为Fe2+离子，反应如下：

2Fe3??2NH2OH?HCl?2Fe