DNA操作技术

基因组DNA提取

基因组DNA提取试剂盒简介

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等试验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。 一、基因组DNA提取的原则

1、保证核酸一级结构的完整性(因为遗传信息全部储存在核酸一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基层)。

2、排除其它分子(如蛋白质、多糖,、脂类、有机溶剂等)的污染，使下游试验顺利进行。

二、基因组DNA提取的原理和方法

DNA与组蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色丝，染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。 1、样品预处理

从各种不同来源的样品(如细菌、酵母、血液、动植物组织细胞等)中提取高纯度的基因组DNA，因细胞结构及所成分不同，样品预处理方式也不同，以下简单介绍常用提取材料的预处理方式，若需详细了解，请参考本公司各基因组DNA提取

基因组DNA提取

基因组DNA提取试剂盒简介

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等试验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。 一、基因组DNA提取的原则

1、保证核酸一级结构的完整性(因为遗传信息全部储存在核酸一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基层)。

2、排除其它分子(如蛋白质、多糖,、脂类、有机溶剂等)的污染，使下游试验顺利进行。

二、基因组DNA提取的原理和方法

DNA与组蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色丝，染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。 1、样品预处理

从各种不同来源的样品(如细菌、酵母、血液、动植物组织细胞等)中提取高纯度的基因组DNA，因细胞结构及所成分不同，样品预处理方式也不同，以下简单介绍常用提取材料的预处理方式，若需详细了解，请参考本公司各基因组DNA提取

专题1 基因工程基因工程是指按照人 们的愿望，进行严格 的设计，并通过体外 DNA重组和转基因等技 术，赋予生物以新的 遗传特性，从而创造 出更符合人们需要的 新的生物类型和生物 产品。由于基因工程 是在 DNA 分子水平上进 行设计和施工的，因 此又叫做DNA重组技术。

能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢？

胰岛素是治疗糖尿病的特效药,长期以来只 能从猪、牛等动物的胰腺中提取，产量低 成本高。 而微生物生长迅速，容易控制。于是科学 家设想，若能将人的胰岛素基因导入微生 物体内，并得以表达，就不仅能解决产量 问题，还能大大降低生产成本，使药品价 格大幅下降。 能否让微生物产生出人的 胰岛素等珍贵药物？

这些定向改造生物的设想能 实现么？ 经过多年的努力，科学家 终于在20世纪70年代创立了 可以定向改造生物的新技术

——基因工程

一、基因工程的概念：优点： 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通 俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物 定向地改造生物的遗传性状； 的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后 实现基因在不同物种之间的转移，迅速培育 放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物 出生物新品种 的遗传性状。原理 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程

一、试剂盒打开后需要准备的工作

1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解

①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解

②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100ul～200ul

③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月 2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配

加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 3、洗液（wash buffer）的调配

加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩

二、组织DNA提取（试剂盒）

1、组织样品处理与消化

①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。

②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3

个小时使其充分消化。

2、DNA提取

①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴

锅中10分钟。

②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。 ③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor

一、重组DNA技术相关概念 重组 技术相关概念DNA克隆： 应用酶学的方法， DNA 克隆：应用酶学的方法 ， 在体外将各种来源的 克隆 遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、 遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天 然的或人工的DNA 与载体DNA DNA) DNA接合成一具有自我复 然的或人工的DNA)与载体DNA接合成一具有自我复 制能力的DNA 分子—— 复制子(replicon) DNA分子 ——复制子 (replicon), 制能力的 DNA 分子 —— 复制子 (replicon) , 继而通 过转化或转染宿主细胞， 过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转 化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子， DNA分子 化子细胞 ， 再进行扩增提取获得大量同一 DNA 分子 ， 也称基因克隆或重组DNA 也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。

基因工程(genetic engineering) —— 基因工程 实现基因克隆所用的方法及相关的工作 称基因工程，又称重组 工艺学。 称基因工程，又称重组DNA工艺学。 工艺学

(二)工具酶限制性核酸内切酶 DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅰ 聚合酶 逆转

DNA重组技术的基本工具

一、选择题

1．关于限制酶的说法中，正确的是( ) A．限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B．EcoRI切割的是G—A之间的氢键

C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中

2．限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。

下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？( )

A．BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT— B．BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC— C．EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT— D．BamHI和BglII；末端互补序列—GATC—

3．下列关于DNA连接酶的叙述中，正确的是( ) A．DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键

B．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖 C．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和核糖 D．同一种DN

DNA分子标记技术

维普资讯

安徽农业科学。 u aoAhi g. c2O, ( ) 42 72 J r lf nuA, Si 073 2: 2— 44 on i . 547

责任编辑

孙红忠

责任校对

李洪

D NA分子标记技术及其应用白玉 (都范学命科学院北 o3首师大生学，京l0) 07摘要对R L、A D A L、S、 S FP R P、FP SR I R等常用的D A分子标记技术以及其他几种新兴的标记技术( N、S等) S N S PE F的原理、特点进行了综

述，认为利用 D A分子标记技术来鉴定品种具有客观、 N准确、快速的特点，可鉴定形态上很难或者根本无法鉴别的品种。分子标记技且术已成为品种鉴定技术领域的主流和发展趋势。

关键词 D A分子标记；n R P; PSR I R品种鉴定 N R;A D;; S; 6 L S S中图分类号 Q 0文献标识码 A 5 3 文章编号 01— 6120)4 042 0 57 61(072— 72— 3

遗传标记 ( eec a e是指可追踪染色体、 G n im r r t k )染色体某一

的遗传信息。⑥D A分子标记技术简单、 N快速、易于自动化。⑦提取的 D A样品， N在适宜条件下可长期保存，这

DNA重组技术的基本工具

一、选择题

1．关于限制酶的说法中，正确的是( ) A．限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B．EcoRI切割的是G—A之间的氢键

C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中

2．限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。

下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？( )

A．BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT— B．BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC— C．EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT— D．BamHI和BglII；末端互补序列—GATC—

3．下列关于DNA连接酶的叙述中，正确的是( ) A．DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键

B．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖 C．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和核糖 D．同一种DN

DNA甲基化检测技术应用与技术比较

DNA甲基化作为表观遗传学研究的重要范畴，已经越来越受到研究者的关注。近些年来，随着DNA甲基化与组蛋白甲基化的联合作用机制、RNA干扰机制及去

甲基化机制的发现，使得DNA甲基化研究受到广泛关注，从医学领域扩展到动植物研究当中，同时在研究方法上也取得了很大的突破。现在用于DNA甲基化检测

的方法大概有十多种，从应用上来分，大致可以分成两类：全基因组甲基化分析及特异位点甲基化检测。下面，我们就这两大类检测技术进行分析比较，以便于在实际的科研工作中进行选择。

一、全基因组甲基化检测技术

1. 基于芯片平台的全基因组甲基化筛选

芯片平台作为目前比较成熟的筛选工具，已经在很多领域有了相应的应用。多家芯片公司在DNA甲基化这块儿有了相应的产品提供，其中应用最为广泛的就

Agilent平台和Illumina平台，相应的产品包括Agilent

Human CpG Island Microarray

Kit，Infinium HumanMethylation27 BeadChip和Infinium HumanMethylation450K

BeadChip。另外Roche NimbleGen和A

关于徕卡DNA03数字水准仪简易操作

徕卡DNA数字水准仪 简易操作手册

DNA03数字水准仪简易操作手册

一、 基本操作 1、 仪器基本性能、仪器保养

DNA03/10是徕卡新一代的数字水准仪，它具有以下性能特点：

l 中文界面，操作更容易，水准测量程序完全符合我国的国家标准,电子气泡照明;

l 超大显示屏，显示的内容更丰富，并有专门的字母数字输入键和面板加热功能；

l 采用新式标准磁阻尼补偿器 l ，测量精度达到0.3mm/Km；

l 可使用徕卡编码标尺进行自动测量，也可以使用普通水准尺按照光学原理测量；

l 数据记录在内存中或PC卡上，内存可以记录8000个数据； l 采用流线型和白色外表设计，可减少风阻和太阳辐射，并具有双侧无限位水位微动；

l 数据输出方式灵活，用户可以自己定制数据输出格式； l 可以使用5#干电池????等等。 仪器的保养：

仪器必须装箱运输，防止受剧烈振动；仪器不宜受潮；避免在强磁场内作业，影响精度；放置温度在-40℃~+70℃；保持目镜和物镜的清洁