磷脂酶a2和磷酸二酯酶的区别

磷酸二酯酶5抑制剂的发现和治疗用途

朱晓伟 金义光编译 王林审校

（军事医学科学院放射研究所，北京 100850）

摘要：磷酸二酯酶5抑制剂可选择性阻断cGMP的酶水解作用。最终引起血管平滑肌的松弛，这一作用靶标目前主要用于人类勃起障碍的治疗。本文综述了其作用机理，磷酸二酯酶的生物学与生物化学特点，新的磷酸二酯酶5抑制剂的构效关系以及其它药理学活性。

关键词：磷酸二酯酶5；抑制剂；构效关系 中图分类号：

磷酸二酯酶5（PDE5）是环核苷酸水解酶超家族的成员之一，能特异性地裂解一种关键的细胞内第二信使环鸟苷单磷酸酯（cGMP）。PDE5最初是治疗心绞痛和高血压的靶标，后来由于西地那非成功地用于治疗勃起功能障碍（ED）而重新引起关注。

1 PDE5抑制剂治疗勃起功能障碍的作用机理

PDE5是在人阴茎海绵体组织中发现的，主要具有水解cGMP活性。cGMP是调节平滑肌舒张的重要的第二信使之一。由于勃起是血液动力学作用的结果，血管平滑肌的状态是控制该过程的显著要点。勃起产生于身心或直接作用于阴茎的性刺激之后。这些刺激引起受神经控制的海绵体非肾上腺素神经元及非胆碱能神经元释放神经递质一氧化氮（NO）。NO扩散于组织中，引起可溶性鸟苷酰

火腿中肌肉磷脂酶的纯化其性质研究

国外一些研究者认为，在干腌火腿生产过程中，中性脂肪变化很小，而磷脂是脂肪水解的主要底物。我们对发酵干火腿加工过程中的脂肪水解状况进行了分析，也证实了这一观点，因此磷脂水解酶成为了研究干腌火腿脂肪水解机理的关键。

本研究利用阴、阳离子交换、亲和层析等多种纯化手段相结合获得了2种电泳纯的磷脂水解酶。由于某些脂酶也具有水解磷脂的能力，我们首先需要弄清楚本研究中以磷脂为底物获得的磷脂水解酶是属于脂酶还是磷脂酶？如果是磷脂酶，和已从其它组织中纯化出来的磷脂酶有什么关系？另外，腌制剂、加工工艺条件等对该酶活有什么影响？为此，本研究对已纯化的磷脂水解酶的基本性质进行了鉴定，旨在为发酵干火腿生产过程中与脂肪水解氧化等有关的风味化合物的产生机理及其控制提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 磷脂水解酶的分离

按汪家政等（2002）方法进行。 1.2 磷脂水解酶活性的测定

用同位素标记底物法对纯化的酶活进行测定 具体操作流程：

0.2 ml 粗酶液 + 5 μl磷脂底物

反应（37℃, 20分钟）

冰浴并向反应体系中加入2 ml甲苯、三氯甲烷和甲醇的混合物

（1:0.5:1.2

具有抗炎、抗过敏活性磷脂酶

抑制剂的研究进展*

王 寅 朱再明

(辽宁师范大学化学系 大连 116029)

刘 彦

(大连医科大学生化教研室 大连 116027)

摘 要 磷脂酶参与细胞跨膜信息传递，磷脂酶A2还是机体炎症、过敏介质产生的关键酶。因此，磷脂酶抑制剂的合成研究对研究细胞表达某种功能的信息传递机制及与磷脂酶A2激活相关的疾病治疗机制和药物研究具有重要意义。本文主要综述了近期有关磷脂酶A2抑制剂的合成、结构、抑效性能、构效关系及应用前景等,对磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂作了简要介绍。

关键词 磷脂酶A2 磷脂酶C 磷脂酶D 磷脂酶抑制剂

Recent Advances in Phospholipase Inhibitors

Wang Yin Zhu Zaiming

(Department of Chemistry, Liaoning Normal University, Dalian 116029,

China) Liu Yan

（Department of Biochemistry， Dalian Medical University, Dalian 116027,

China) Abstract Phospholipase A2,

4.磷酸酶测定(磷酸苯二钠比色法)： 1、试剂配制 （1）甲苯

（2）磷酸笨二钠：称取6.75g磷酸笨二钠（C6H5PO4Na2.2H2O）溶于水，并稀释至1L（1毫升含25mg酚） （3）缓冲液

（4）pＨ9.0硼酸盐缓冲液： 硼酸盐缓冲液（pH9.0）

A：0.05M硼砂溶液：19.07g硼砂（Na2B4O710H2O）溶于1000mL蒸馏水中 B：0.2M硼酸溶液：12.37g硼酸（H3BO3）溶于1000mL蒸馏水中 硼酸盐缓冲液（pH9.0）：80mLA+20mLB混匀即得

缓冲溶液配制：

(1)酸性磷酸酶:醋酸盐缓冲液(pH=5.0)

A：0.2M醋酸钠溶液：16.4g 无水醋酸钠（C2H3O2Na）溶于1000mL蒸馏水中，或是27.2g三水醋酸钠（C2H3O2Na.3H2O）溶于1000mL水中。 B：0.2M醋酸溶液：11.55mL醋酸定容于1000mL 醋酸盐缓冲液(pH=5.0)：7mLA＋3mLB混合即得 （2）碱性磷酸酶：硼酸盐缓冲液（pH10.0） 硼砂－氢氧化钠缓冲液（pH10.0）：

A：硼砂液：19.072g硼砂溶于1000mL蒸馏水中

B：氢氧化钠溶液：4g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中

50mLA＋4

UDG酶，即Uracil - DNA Glycocasylase，尿嘧啶-DNA糖基化酶。 UDG酶简介

碱基对，是形成DNA、RNA单体以及编码遗传信息的化学结构。如果有某一对碱基对的排列错误而导致基因编码异常，就很有可能引发癌症等疾病。可是，很多动物的DNA分子链中有数以亿计的碱基对，想从中找到错误的一条就无异于大海捞针。但美国的研究人员发现，有一种细胞酶可自动检验碱基对排列的对错。这就是UDG酶。美国约翰斯·霍普金斯大学医学院的研究人员报告说，他们通过实验发现，动物细胞中的一种UDG酶可以抓取DNA分子链中的基对并用特定形状的“口袋”来进行检查，如果碱基对排列形状正确则将其放回原处，如果形状有误则将其清除，DNA分子链中留下的空白会由其他修复机制来修补。 uracil-N-glycosylase

尿嘧啶-N- 糖基化酶(UNG)酶

原理：UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除.UNG酶的最佳活性温度为50℃，95℃灭活。

作用：为保证PCR结果的准确性，要预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG

UDG酶，即Uracil - DNA Glycocasylase，尿嘧啶-DNA糖基化酶。 UDG酶简介

碱基对，是形成DNA、RNA单体以及编码遗传信息的化学结构。如果有某一对碱基对的排列错误而导致基因编码异常，就很有可能引发癌症等疾病。可是，很多动物的DNA分子链中有数以亿计的碱基对，想从中找到错误的一条就无异于大海捞针。但美国的研究人员发现，有一种细胞酶可自动检验碱基对排列的对错。这就是UDG酶。美国约翰斯·霍普金斯大学医学院的研究人员报告说，他们通过实验发现，动物细胞中的一种UDG酶可以抓取DNA分子链中的基对并用特定形状的“口袋”来进行检查，如果碱基对排列形状正确则将其放回原处，如果形状有误则将其清除，DNA分子链中留下的空白会由其他修复机制来修补。 uracil-N-glycosylase

尿嘧啶-N- 糖基化酶(UNG)酶

原理：UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除.UNG酶的最佳活性温度为50℃，95℃灭活。

作用：为保证PCR结果的准确性，要预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG

UDG酶，即Uracil - DNA Glycocasylase，尿嘧啶-DNA糖基化酶。 UDG酶简介

碱基对，是形成DNA、RNA单体以及编码遗传信息的化学结构。如果有某一对碱基对的排列错误而导致基因编码异常，就很有可能引发癌症等疾病。可是，很多动物的DNA分子链中有数以亿计的碱基对，想从中找到错误的一条就无异于大海捞针。但美国的研究人员发现，有一种细胞酶可自动检验碱基对排列的对错。这就是UDG酶。美国约翰斯·霍普金斯大学医学院的研究人员报告说，他们通过实验发现，动物细胞中的一种UDG酶可以抓取DNA分子链中的基对并用特定形状的“口袋”来进行检查，如果碱基对排列形状正确则将其放回原处，如果形状有误则将其清除，DNA分子链中留下的空白会由其他修复机制来修补。 uracil-N-glycosylase

尿嘧啶-N- 糖基化酶(UNG)酶

原理：UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除.UNG酶的最佳活性温度为50℃，95℃灭活。

作用：为保证PCR结果的准确性，要预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG

第二章 酶

教学基本要求

1.掌握酶的概念及酶催化的机理。 2.掌握影响酶促反应速度的各种因素。 3.了解酶的分类、酶催化的特导性。 4.熟悉酶的组成和结构。

第一节 概述

一、酶的概念

1878年Kühne提出Enzyme。

人们在日常生活中发现酵母能使果汁和谷类加速转化成酒，这种转化过程叫作发酵。公元前两千多年，我国已经有酿酒记载。

1680年，荷兰人Leeuwenhoek首先用显微镜发现了酵母细胞。1833年法国人Payen和Persoz从麦芽中抽提出一种对热敏感的物质，这种物质能将淀粉水解成可溶性糖，被称为淀粉糖化酶(diastase)，意思是“分离”，所以后人命名酶时常加词尾-ase。由于他们用乙醇沉淀等方法提纯得到了无细胞的酶制剂，并发现了酶的催化特性和热不稳定性，所以一般认为他们首先发现了酶。1850年法国人Pasteur提出“酵素(ferment)”一词，认为只有活的酵母细胞才能进行发酵。1878年德国人Kuhne首次提出“酶(enzyme)”一词，意为“在酵母中”。1897年德国人Buchner兄弟用石英砂磨碎酵母细胞，得到了能催化发酵的无细胞滤液，证明发酵是一种化学反应，与细胞的活力无关。

1913年德国人Micha

钙调磷酸酶抑制剂

（一）器官移植排斥反应

1、移植排斥反应

人体的免疫系统对各种致病因子有着非常完善的防御机制，能够对细菌、病毒、异物、异体组织、人造材料等“异己成分”进行攻击、破坏、清除，这种复杂的免疫学反应是人体非常重要的一种保护机制。受者进行同种异体组织或器官移植后，外来的组织或器官等移植物作为一种“异己成分”被受者免疫系统识别，后者发起针对移植物的攻击、破坏和清除，这种免疫学反应就是移植排斥反应（transplant rejection）。移植排斥反应是影响移植物存活的主要因素之一。

移植排斥反应是非常复杂的免疫学现象，涉及细胞和抗体介导的多种免疫损伤机制，发生原因主要是受体和移植物的人类白细胞抗原HLA（human leucocyte antigen）不同。因此，供者与受者HLA的差异程度决定了排异反应的轻或重。除同卵双生外，二个个体具有完全相同的HLA 系统的组织配型几乎是不存在的，因此在供受者进行配型时，选择HLA配型尽可能地接近的供者，是减少异体组织、器官移植后移植排斥反应的关键

2、发病机制

排斥反应的发生机制主要包括细胞免疫和体液免疫两个方面。临床最常见的急性排斥反应主要由细胞免疫介导，而超急性排斥反应和慢性排斥反应主要由

酶和细胞的固定化

Chapter 5 Immobilized Enzyme and Cell

固定化酶和细胞

酶和细胞的固定化

Contents of chapter 51、什么是固定化技术和固定化酶 2、固定化酶的研究历史 3、酶的固定化技术(重点) 4、固定化酶的特点(重点) 5、固定化酶的应用 6、细胞、原生质体的固定化

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？水溶性酶 水不溶性载体

水不溶性酶 水不溶性酶 (固定化酶) 固定化酶)

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？酶的固定化技术和固定化酶 酶 可溶 间歇 吸附 包埋 间歇 交联 化学偶联 连续 固定化

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？来源固定化酶： 固定化酶：经提取和分离纯化后的酶 固定化菌体(死细胞 死细胞): 固定化菌体(死细胞):含酶菌体或菌体 碎片

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？特点优点——不溶于水，易于与产物分离； 不溶于水，易于与产物分离； 优点 不溶于水 可反复使用； 可反复使用； 可连续化生产； 可连续化生产； 稳定性好。 稳定性好。 缺点——固定化过程中往往会引起酶的失活。 固定化过程中往