环境微生物多样性调查实验报告

环境微生物多样性观察

徐萍

（南京师范大学，教师教育学院）

摘要：本文着重于环境微生物的观察。主要从以下四步来完成：环境微生物的采集与分离、不同微生物类群菌落的比较及细菌多样性的观察与鉴定、放线菌、真菌、霉菌高等真菌形态观察、自然界中噬菌体的分离。通过以上阶段性的研究学习微生物采集、分离、菌落鉴定等基本实验室操作方法；树立无菌意识。 前言

微生物在自然界中可以说是无处不在。不管我们生活的周围环境，还是我们体内都有大量微生物的存在，微生物不光分布广，而且种类繁多，数目庞大，让我们无法想象。我们每时每刻都在与微生物打交道，所以微生物与人类的关系非常密切。到底微生物与人类有着怎样的关系?实际上微生物与人类的关系有两个方面：有对人类有益的一面，也有对人类有害的一面。 一、 微生物与人类日常生物

人类要生存，就必须有食物。我们每天吃的很多的食品的制作都离不开微生物。比如：我们每天吃的馒头、面包、泡菜等食品。我们喝的营养丰富的酸奶；各种酒类-调味品中的醋、酱油它们都是经过微生物的发酵制作出来的。还有我们吃的营养丰富的菌类，如各种蘑菇、木耳，银耳。还有药用价值的灵芝，冬虫夏草也微生物。 二、 微生物与人类健康

在人体肠道中有很多微生物，其中要有大肠杆菌，乳

环境微生物多样性观察

徐萍

（南京师范大学，教师教育学院）

摘要：本文着重于环境微生物的观察。主要从以下四步来完成：环境微生物的采集与分离、不同微生物类群菌落的比较及细菌多样性的观察与鉴定、放线菌、真菌、霉菌高等真菌形态观察、自然界中噬菌体的分离。通过以上阶段性的研究学习微生物采集、分离、菌落鉴定等基本实验室操作方法；树立无菌意识。 前言

微生物在自然界中可以说是无处不在。不管我们生活的周围环境，还是我们体内都有大量微生物的存在，微生物不光分布广，而且种类繁多，数目庞大，让我们无法想象。我们每时每刻都在与微生物打交道，所以微生物与人类的关系非常密切。到底微生物与人类有着怎样的关系?实际上微生物与人类的关系有两个方面：有对人类有益的一面，也有对人类有害的一面。 一、 微生物与人类日常生物

人类要生存，就必须有食物。我们每天吃的很多的食品的制作都离不开微生物。比如：我们每天吃的馒头、面包、泡菜等食品。我们喝的营养丰富的酸奶；各种酒类-调味品中的醋、酱油它们都是经过微生物的发酵制作出来的。还有我们吃的营养丰富的菌类，如各种蘑菇、木耳，银耳。还有药用价值的灵芝，冬虫夏草也微生物。 二、 微生物与人类健康

在人体肠道中有很多微生物，其中要有大肠杆菌，乳

猪场生病,微生物鉴定

动物微生物及免疫学实验报告

一、实验目的

（一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一

般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。

（二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰

氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。

（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。

二、实验用品

（一）器材

量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜

（二）试剂及材料

肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏

三、实验步骤

（一）培养基的制备

猪场生病,微生物鉴定

（所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内）

1、麦康凯培养基

（1） 组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5

微生物实验报告

微生物大小和显微计数

刘欣怡201100140057

生物科学基地班

组别：周一下午三组

同组者：曹平平，周楠，

刘艺，刘希伟

实验完成时间：2012年11月26号

一、实验目的

1、明确显微镜下用测微尺测定微生物大小与血球计数板计数的原理 2、增强对细胞大小的感性认识

3、学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术

4、了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板测定微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算 5、巩固无菌操作技术和显微观察技术

二、实验器材

1.菌种 ： 酿酒酵母 2.培养基：

酵母合成培养基（配方见后附） 3.溶液和试剂：

蒸馏水，孔雀绿染液，番红染液，95%乙醇，香柏油，二甲苯等

4.仪器及其他用具：

载玻片，盖玻片，镊子，酒精灯，显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板，计数器，滴管，擦镜纸，玻片夹，电子秤，称量纸，双层瓶，

实验报告

微生物综合实验

报告

姓名：杨延景

班级：食品1101

学号：2011040632

指导老师：郭永

黄河水利职业技术学院

实验报告

目录

项目一食品中菌落总数的测定

（一）前言 (3)

（二）实验目的 (3)

（三）实验原理 (3)

（四）实验器材 (3)

（五）实验步骤 (4)

（六）实验结果以及分析 (7)

（七）国标中微生物菌落总数标注 (7)

项目二大肠菌群的测定

（八）实验目的 (9)

（九）实验原理 (9)

（十）实验器材 (9)

（十一）实验步骤 (10)

（十二）实验结果以及分析 (15)

项目三革兰氏染色

（一）实验器材 (18)

（二）实验步骤 (18)

（三）实验结果 (18)

四实验感想

黄河水利职业技术学院 2

实验报告

项目一食品中菌落总数的测定

前言

随着生活人们生活水平的提高，和社会的发展与进步食品安全问题越来越受到人们的关注，然而食品方面的问题这几年也越来越突出，食品安全问题屡见不鲜。由前几年的“苏丹红红心鸭蛋”再到这几年的“三聚氰胺奶粉事件”和“瘦肉精事件”还有“地沟油”等等一系列的事件都不得不让人们对食品安全问题高度关注。然而食品中微生物的菌落总数是用来判定食品被细菌污染的程度即清洁状态及其安全质量，它反映食品在生产过程中是否符合国家食品安全标准要求，以便

基于二代高通量测序的环境微生物多样性分析

一般认为土壤、海洋、肠道等生态系统中的微生物数量繁多、种类多样。传统的培养方法只限于对环境样品中极少部分（0.1%-1%）可培养的微生物类群的研究，而变性梯度凝胶电泳（DGGE）、克隆文库等常规的分子生物学方法也因操作复杂、成本高、痕量菌发现困难等因素无法达到深入分析环境微生物多样性的目的。高通量测序技术的出现，极大的促进了对环境中不可培养微生物以及痕量菌的研究，为环境微生物多样性的研究开启了新的研究热潮。

微生物群落中物种的多样性依然是目前研究的重点。对群落结构的研究，将有助于了解种群结构的稳定性，进而了解种群内物种间的相互依赖、相互制约的内在联系，为将来构建功能性种群服务。鉴于微生物群落是一个多物种的集合体，其中高达 95%以上的微生物物种无法分离也不能独立培养，拼装出每个独立个体的基因组现在也无法实现，细菌16S 或真菌ITS测序分析依然是现阶段微生物群落多样性和多态性分析的基石。

一、高通量测序背景介绍

高通量测序技术，可以一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，使得对PCR扩增产物直接进行序列测定成为可能。极大的促进了对环境中不可培养微生物以及痕量菌的研究，为环境微生物多样性的研究开启

基于二代高通量测序的环境微生物多样性分析

一般认为土壤、海洋、肠道等生态系统中的微生物数量繁多、

种类多样。传统的培养方法只限于对环境样品中极少部分

（0.1%-1%）可培养的微生物类群的研究，而变性梯度凝胶电泳（DGGE、克隆文库等常规的分子生物学方法也因操作复杂、成本高、痕量菌发现困难等因素无法达到深入分析环境微生物多样性的目的。高通量测序技术的出现，极大的促进了对环境中不可培养微生物以及痕量菌的研究，为环境微生物多样性的研究开启了新的研究热潮。

微生物群落中物种的多样性依然是目前研究的重点。对群

落结构的研究，将有助于了解种群结构的稳定性，进而了解种群

内物种间的相互依赖、相互制约的内在联系，为将来构建功能性种群服务。鉴于微生物群落是一个多物种的集合体，其中高达95% 以上的微生物物种无法分离也不能独立培养，拼装出每个独立个

体的基因组现在也无法实现，细菌16S或真菌ITS测序分析依

然是现阶段微生物群落多样性和多态性分析的基石。

一、高通量测序背景介绍

高通量测序技术，可以一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，使得对PCR扩增产物直接进行序列测定成为可能。极大的促进了对环境中不可培养微生物以及痕量菌的研究，为环境微

基于二代高通量测序的环境微生物多

(5)高通量测序：环境微生物群落多样性分析

微生物群落多样性的基本概念

环境中微生物的群落结构及多样性和微生物的功能及代谢机理是微生物生态学的研究热点。长期以来，由于受到技术限制，对微生物群落结构和多样性的认识还不全面，对微生物功能及代谢机理方面了解的也很少。但随着高通量测序、基因芯片等新技术的不断更新，微生物分子生态学的研究方法和研究途径也在不断变化。第二代高通量测序技术（尤其是Roche

454高通量测序技术）的成熟和普及，使我们能够对环境微生物进行深度测序，灵敏地探测出环境微生物群落结构随外界环境的改变而发生的极其微弱的变化，对于我们研究微生物与环境的关系、环境治理和微生物资源的利用以及人类医疗健康有着重要的理论和现实意义。

在国内，微生物多样性的研究涉及农业、土壤、林业、海洋、矿井、人体医学等诸多领域。以在医疗领域的应用为例，通过比较正常和疾病状态下或疾病不同进程中人体微生物群落的结构和功能变化，可以对正常人群与某些疾病患者体内的微生物群体多样性进行比较分析，研究获得人体微生物群

落变化同疾病之间的关系；通过深度测序还可以快速地发现和检测常见病原及新发传染病病原微生物。研究方法进展

环境微生物多样性的研究方法很多，从国内外

实验目的、原理、材料、内容、结果、分析讨论

实验目的

嗜热链球菌的筛选、分离鉴定及发育树鉴定

实验原理

乳酸菌是一类能利用可发酵的糖产生大量乳酸的细菌通称。这类细菌广泛分布在土壤 植物根、茎、湖泊及动物的体内。乳酸菌从形态上可以分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性。在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧菌或厌氧性细菌。

嗜热链球菌来源于乳制品。它是一种耗氧的革兰氏阳性菌，以两个卵圆型为一对的球菌连成约0.7到0.9微米的长链。在选择性培养基，嗜热链球菌会长成米色的菌落。嗜热链球菌也可在含有下列任一种糖类的培养基上生长。这些糖类包括半乳糖、葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖。 乳糖的降解需要一种特殊的酶，叫β-半乳糖苷酶。乳糖不耐受的人身体内就是缺乏了这一种酶。嗜热链球菌是一种能产生β-半乳糖苷酶的细菌，所以可以帮助乳糖的消化。 嗜热链球菌个体中多有2球体连接、3、4球体连接、5、6球体连接的，8球体以上连接的和单球体的少见。所以个体大小差距较大。多在0.4-0.7×1.0-6um范围内。

利用是嗜热链球菌的选择性培养基——改良型M17培养基，可以筛选出酸奶中的嗜热链球菌，然后进行筛选并分离纯培养。

传统的微生物分类主要依靠形态学特征以及

实验1 培养基的配制和灭菌

一、目的要求

1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。

2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。 4.每2人一组，每人一份实验报告。 二、实验材料

1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、1N HCl、1N NaOH

2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。

3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。 三、实验内容 (一) 培养基的配制 1．培养基的配制方法和步骤

1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。 2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。 4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。 5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。 6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。

7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。 2．培养基的配制 A.