植物组织培养实验心得体会

植物组织培养实验指导

2012.3

附录 培养基母液的配制

一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。

二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。 三、实验器具与药品：

电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。

配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。

四、培养基母液的配制过程

首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。 母液种类 成分 规定用扩大 称取量母液定配1LMS量ml/L 倍数 m

T

植物细胞组织培养技术

实验指导书

中国计量学院生命科学学院

二零零六年七月

《植物细胞组织培养》实验指导

目 录

实验一、植物组织培养培养基母液的配制 实验二、植物组织培养的培养基配制 实验三、康乃馨的离体快繁 实验四、胡萝卜愈伤组织的建立 实验五、组织培养物的继代培养

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实验一 组织培养基母液的配制

一、 仪器及药品

冰箱、天平（0.0001g）

容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺

标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品 蒸馏水

二、方法和步骤：

按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下：

大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用

植物组织培养实验报告

实验小组成员：

姓名 班级

2013 年4 月 20 日

绿豆的植物组织培养

学号

一、实验目的

1．通过诱导绿豆根、茎、芽形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法。

2．熟悉植物组织培养各阶段的过程，初步掌握无菌操作的植物组织培养方法。

3．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。 二、实验原理

1. 植物细胞的全能性：

一切植物，都是由细胞构成的，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植株的潜能。 2. 植物组织培养技术：

把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。 3. 组织的分化与器官建成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。 4. 培养基的组成

培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源

《植物组织培养实验指导》

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《植物组织培养实验指导》的相关说明

一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。 二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。其中15个课时的内容调整如下： 实验一、二、五 3学时 实验六 3学时 实验七 3学时 实验九、实验十二 3学时 实验十三 3学时

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实验一 实验室基本设备及其用途的识别

一、

目的

认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。 二、

实验室的基本结构

（一） 化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。

设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。

安装水、电、排气等装置。 （二）接种室 ①无菌操作室 ②接种箱 ③超净工作台 （三）培养室

（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。 （

《植物组织培养实验指导》

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《植物组织培养实验指导》的相关说明

一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。 二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。其中15个课时的内容调整如下： 实验一、二、五 3学时 实验六 3学时 实验七 3学时 实验九、实验十二 3学时 实验十三 3学时

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实验一 实验室基本设备及其用途的识别

一、

目的

认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。 二、

实验室的基本结构

（一） 化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。

设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。

安装水、电、排气等装置。 （二）接种室 ①无菌操作室 ②接种箱 ③超净工作台 （三）培养室

（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。 （

植物组织培养试题

一、名词解释

1. 外植体

2. 愈伤组织培养

3. 单倍体育种

4. 液体悬浮培养

5. 玻璃化现象

1、外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子

等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。

2、热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。

3、平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

4、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

5、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。

1、脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

2、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。 4、纸桥培养：将培

拟南芥组织培养

一、种子消毒：

方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。

方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。

消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。

方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。 二、选用的培养基

选用1/2MS培养基对种子进行培养。（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。

MS培养基

植物组织培养试卷

植物组织培养试卷

一、名词解释：（每小题3分，共15分）

1．初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。

2．脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。

3．液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。

4．细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。

5．再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。

二、填空（每空1分，共40分）

1． 植物组织培养过程中，最常用的培养基是 ，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用 和 调节pH，大多数植物的pH要求调节在 范围内。 2． 可以通过 、 、 、 、 等措施预防褐变的发生。 3． 植物组织培养时，外植体可以是 、

实验11 植物组织培养

1．植物组织培养的原理是植物细胞的全能性。

2．植物组织培养的各个步骤应严格执行无菌操作技术，所以在生产时为了防止污染，植物组织一般要先进行消毒，先用70%的酒精浸泡，再用5%的次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗。各种器皿和培养基等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。

3．与培养微生物的LB培养基相比，植物组织培养的MS培养基中要添加生长素和细胞分裂素类似物。4．在菊花的组织培养过程中，首先将消毒后的菊花茎的切段接种在加有适当配比生长调节剂的MS培养基上，给予一定的温度和光照，使其先脱分化形成愈伤组织，再将其转移至含有较多细胞分裂素类似物——苄基腺嘌呤（简称BA，需用HCl溶解）的培养基上，诱导其长出丛状苗。将它分株后，再移入含有较多生长素类似物——萘乙酸（简称NAA，需用NaOH溶解）的培养基上，使其生根。

5．通过植物组织培养产生的幼苗需要移栽至草炭土或蛭石中，给予适宜的光照、温度和80%以上的湿度等条件，锻炼一段时间，最后再定植到土壤中。

植物的克隆

（1）植物克隆的理论基础是植物细胞的全能性，技术基础是植物组织培养。

（2）在植物组织培养过程中，将离体的植物组织或细胞放在加有适当配比生长调节剂的培养基上进行培养，它会先发生脱

生菜组织培养技术论文

学院：生命科学学院

专业:

学号:

姓名:

2013级生物科学

201312200501003

方来

前言：生菜（Romaine Lettuce）属菊科莴苣属，为一年生或二年生草本作物，因其生长快、栽培容易、产量高、鲜食口感好而广受欢迎。生菜中含有丰富的营养成分，其中富含B族维生素和维生素C、E等，含水量很高，而且最突出的特点就是超级低脂。生菜此外富含膳食纤维以及多种矿物质生菜，对于人的消化系统大有裨益。它也可以促进胃肠道的血液循环，对于脂肪、蛋白质等大分子物质，能够起到帮助消化的作用。另外对于胆汁的形成也有促进作用，并且可以为血液消毒。生菜的子叶、叶片离体培养容易，再生率和转化率较高，我们选择生菜作为研究植物组织培养技术的材料，为进一步研究生菜的生理效应做基础。

1. 材料与方法

实验材料：生菜种子

试剂：MS培养基 2,4-D 6-BA NAA 实验方法

生菜种子的消毒→种子在MS培养基上培养生芽→外植体→诱导愈伤组织→分化成完整植株 种子的消毒 培养

75 %的酒精表面消毒30s，无菌水冲洗2次，再用0.1%升汞消毒8min，无菌水冲洗4~6次[1]。将消过毒的种