elisa实验材料

E L I S A试剂配制及实验流程

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。以双抗体夹心法举例说明。

试剂配制：

(1) 包被缓冲液 + 碳酸盐缓冲液)：

Na

2CO

3

NaHCO

3

加蒸馏水至1000ml。（用时稀释成1x，加%BSA）(2) 洗涤缓冲液 0.15M PBST)：

%Tween-20

加在PBS缓冲液1000ml中。

PBS缓冲液：

KH

2PO

4

0.27g

Na

2HPO

4

·12H

2

O 3.58g

NaCl 8g

KCl

加蒸馏水至1000ml。

(3) 封闭缓冲液：

牛血清白蛋白(BSA) 2% 2g

（或5%脱脂奶粉）加洗涤缓冲液100ml。

(4) 稀释液：

牛血清白蛋白 %

加PBS 缓冲液100ml。

(5) 底物缓冲液：

Na

2HPO

4

(无水L，带12结晶水L) 取

柠檬酸(无水L，带1结晶水L) 取加蒸馏水至100ml。

(或Na

2HPO

4

·12H

2

O 1.84g

柠檬酸·H

2

O 0.51g

加蒸馏水至100ml)

(6) TMB(四甲基联苯胺)显色液（显蓝色）：HRP-

TMB(2mg/ml水)

底物缓冲液

30% H

2O 2

ELISA的操作要点

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。 1. 加样

在ELISA检测中一般有3次加样，即加样本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的抗体，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。

2 .温育

在ELISA检测中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。 ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗

ELISA基础知识

ELISA原理与分类 1. ELISA的原理

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

2. ELISA的类型

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即\免疫吸附剂\（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为\结合物\（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几

血液学检验

血小板相关抗体的检验 PAIgA、PAIgG、PAIgM D-二聚体的测定 D-Dimer

血清纤维蛋白降解产物的测定 FDP

三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸测定 T3、T4 免疫学检验

C反应蛋白的测定 CRP 免疫球蛋白的测定 IgD、IgE 循环免疫复合物的测定 CIC

类风湿因子的测定 IgG、IgA、IgM类RF

抗甲状腺球蛋白抗体、微粒体抗体的测定 TG、TM 肿癌免疫学检测 甲胎蛋白的测定 AFP 癌胚抗原的测定 CEA

前列腺特异抗原的测定 PSA

胰癌、胆道癌、胃癌的测定 CA19-9 卵巢癌的测定 CA125 乳腺癌的测定 CA15-3 宫颈鳞癌的测定 SCC 多发性骨髓癌的测定 甲状腺癌的测定 hTG

传染病免疫学检验

甲肝血清学的检测 抗HAV-IgM 乙肝血清学的检测 两对半

丙肝血清学的检测 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM 丁肝血清学的检测 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM 戊肝血清学的检测 抗HEV-IgG

肾综合征出血热类抗体的检测 HFRS-IgG 乙型脑炎病毒抗体的检测 IgM

人类免疫缺

血液学检验

血小板相关抗体的检验 PAIgA、PAIgG、PAIgM D-二聚体的测定 D-Dimer

血清纤维蛋白降解产物的测定 FDP

三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸测定 T3、T4 免疫学检验

C反应蛋白的测定 CRP 免疫球蛋白的测定 IgD、IgE 循环免疫复合物的测定 CIC

类风湿因子的测定 IgG、IgA、IgM类RF

抗甲状腺球蛋白抗体、微粒体抗体的测定 TG、TM 肿癌免疫学检测 甲胎蛋白的测定 AFP 癌胚抗原的测定 CEA

前列腺特异抗原的测定 PSA

胰癌、胆道癌、胃癌的测定 CA19-9 卵巢癌的测定 CA125 乳腺癌的测定 CA15-3 宫颈鳞癌的测定 SCC 多发性骨髓癌的测定 甲状腺癌的测定 hTG

传染病免疫学检验

甲肝血清学的检测 抗HAV-IgM 乙肝血清学的检测 两对半

丙肝血清学的检测 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM 丁肝血清学的检测 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM 戊肝血清学的检测 抗HEV-IgG

肾综合征出血热类抗体的检测 HFRS-IgG 乙型脑炎病毒抗体的检测 IgM

人类免疫缺

间接ELISA检测抗血清效价

姓名：王贤臣 学号：1125400080 （成都医学院 医学检验 成都610500）

【摘要】目的：通过实验掌握间接酶联免疫吸附测定技术（ELISA）的原理及

操作过程及间接ELISA检测抗血清效价的实验条件优化及效价的确定。方法：间接ELISA双抗体夹心法对包被抗原及酶标抗体工作浓度进行探索。结果：经过预实验初步确定抗人白蛋白血清包被浓度和一二抗的浓度，然后在正式实验确定其浓度，从而再进行研究。讨论：间接ELISA检测抗血清效价的影响因素。并将预实验方法的结果与确定实验的结果进行对比，和分析在实验过程中的注意事项。

【关键词】抗人白蛋白ABL ELISA

前言：1971年Engvall和Perlmann 发表了酶联免疫吸附测定用于IgG 定量测 定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展为体液标本中微量物质的测定方法。之一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持器免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原后抗体即保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不

实验一 铁碳合金平衡组织观察

实验目的 概述 实验内容 实验方法 实验报告 思考题

一、实验目的

1. 观察和识别铁碳合金(碳钢和白口铸铁)在平衡状态下的显微组织特征； 2. 认识铁碳合金中成分、组织和性能之间的变化规律； 3. 应用杠杆定律计算碳钢中的含碳量； 4. 了解金相显微镜的原理及其使用方法； 5. 了解金相试样的制作过程。

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二、概述

1. 铁碳合金的平衡组织

合金在极缓慢冷却条件(如退火状态)下得到的组织为平衡组织。铁碳合金的平衡组织可 以根据Fe-Fe3C状态图来分析。从状态图可知，所有碳钢和白口铸铁在室温时的组织均由铁素

体相和渗碳体相组成。但由于含碳量的不同，结晶条件的差异，铁素体和渗碳体的相对数量、形态、分布和混合情况不一样，因而将组成各种不同特征的组织。

图1-1 Fe-Fe3C合金状态图

2. 各种基本组织特征

① 铁素体(F) 是碳溶入a-Fe中的间隙固溶体，有良好的塑性，硬度低(HB80～100)，经3%～5%硝酸酒精溶液浸蚀后，在显微镜下呈白色大颗粒状或块状(如图1-2)。随着钢中含碳量的增加，铁素

材料化学基础实验报告

指导教师： 刘 飞 实验名称：基于拟薄水铝石法的γ-Al2O3的制备与表征 试验方法： 液相沉淀法 表征手段： SEM电子扫描分析 实验小组： 第二组 组 长： 饶 刚 1108110413

组 员： 李 虎 1108110409 郑 航 1108110410 罗 轶 1108110411 王晓庆 1108110412 何 孝 1108110414 罗 旭 1108110415 冷 洋 1108110416 田

产品详细说明书

小鼠IL-2定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有疑问请与北京博凌科为生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。

如您有其它需求，请登录北京博凌科为生物科技有限公司网站或致电本公司。

IL-2简介：

IL-2是一种主要由T淋巴细胞产生的多效性的细胞因子，成熟的鼠IL-2是149个氨基酸的糖蛋白，由169个氨基酸的前体蛋白通过剪切而成为成熟的蛋白。

IL-2在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞，自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2还可调节γ干扰素、主要组织相容性抗原的表达，刺激活化的B细胞的增殖和分化，提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的的增殖。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-2的浓度。小鼠IL-2捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-2会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-2抗体后，抗小鼠IL-2抗体与小鼠IL-2接合，形成夹心的免

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目 录

一 仪器功能与构成 二 运行前准备 三 运行实验 四 结果判读 五 方法编辑

－液体管理 －洗板程序 －实验方法 －作业管理 六 仪器维护 七 错误处理 八 技术指标

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ELISA-STAR酶免之星用户手册

一 仪器功能与构成

ELISA-STAR（酶免