微生物显微直接计数法

实验10 微生物的显微计数

实验十 微生物的显微计数

一、实验目的

1、明确血细胞计数板计数的原理。

2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、基本原理

显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液（菌悬液）置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，在显微镜下通过直接计数，测定菌悬液中微生物细胞或孢子浓度的一种方法。常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，而且基本原理相同。但后两种计菌器由于盖上盖玻片后，盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。除用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，如此法用于牛乳的细菌学检查。显微镜直接计数法直观、快速、操作简单的优点，但此法存在着测得的结果系死菌体和活菌体的总和的缺点。

本实验以血球计数板进行微生物的显微直接计数，这是显微直接计数采用

61 非无菌产品的微生物检验：微生物计数检测

简介

后面所提到的检测都是用于在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

设计这个实验旨在确定药物或制剂是否符合已建立的微生物质量要求规范。当用作上述目的时，可参考下面的说明，包括所取样品的量及以结果的解释。

该方法不适用于将微生物作为有效成分的产品。

可以运用包括自动化方法在内的替代微生物方法。但要求已被证明其等价于药典方法。

通用方法

在拟定的条件下进行试验，拟定的条件旨在避免待测产品的外在微生物污染。采取的避免污染的措施必须不影响任何测试中需要披露的微生物。

如果待测产品具有抗菌活性，尽可能取消或者解除这个活性。如果是用灭活剂，则它的效用和毒性情况必须说明。

如果表面活性物质作为检测样品，则它们对微生物的毒性和与灭活剂的兼容性应作说明。

计数方法

按照规定使用膜过滤法或者平板计数法。最可能数目法（MPN）是微生物计数法中精密度最差的方法。然而，对于特定的低生物负荷的产品组，可能是最适宜的方法。 方法的选择是基于如产品属性，微生物限度要求等因素进行选择的。 选择的方法必须进行大量的样品检测来判断是否符合规范。并建立其方法的适用性。

促生长实验，计数方法的适用性和阴性对照

实验四 酵母菌的形态观察和显微直接计数法

酵母菌是单细胞的真核微生物，个体比细菌大得 多，细胞核与细胞质已有明显的分化。繁殖方式 也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵 母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产 生子囊孢子。 酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱 状或香肠状等多种。

Saccharomyces cerevisiae

本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的 酵母形态和出芽生殖方式，区分死、活细胞。 美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的， 而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行 染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具 有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变 为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对 于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还 原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡 蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形 态，还可以区分死、活细胞。

一、实验目的和内容目的：了解酵母菌及其形态结构。内容：观察酵母菌个体形态、出芽方式，并区分 死、活细胞。

二、实验材料和用具

酿酒酵母(Saccharomyes cerevisiae) 斜面菌 种。 0.05%美蓝染色液； 显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接

微生物实验课件

实验四、 实验四、真菌的显微形态观察及 微生物菌落形态观察

微生物实验课件

一、实验目的 掌握真菌水浸片的制作 显微观察丝状真菌和酵母菌的形态 比较细菌、真菌和放线菌的菌落形态 比较细菌、

微生物实验课件

二、实验材料和菌种1.器材： 1.器材 器材： 接种针、滴管、载玻片、盖玻片、酒精灯、 接种针、滴管、载玻片、盖玻片、酒精灯、显微镜 2.菌种： 2.菌种 菌种： 曲霉、根霉、犁头霉、青霉 曲霉、根霉、犁头霉、 酿酒酵母、红酵母 酿酒酵母、 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 放线菌 放线菌507(平板一套可打开用于显微观察，一套不用打开用于菌落形态 平板一套可打开用于显微观察， 观察) 观察)

微生物实验课件

三、实验内容(一)丝状真菌及酵母显微形态观察1、实验目的要求 学习并掌握水浸片法制备标本片的方法 观察根霉、黑曲霉、 观察根霉、黑曲霉、犁头霉和青霉的菌丝形态 及特征 观察酵母菌的形态

微生物实验课件

2、实验原理 真菌形态结构比细菌复杂。习惯上， 真菌形态结构比细菌复杂。习惯上， 真菌可分为酵母菌和霉菌。 真菌可分为酵母菌和霉菌。 霉菌由粗大、 霉菌由粗大、有隔或无隔分支状菌丝

实验五 微生物的计数与活性污泥中生物相观察

一、 实验目的

1、学习平板菌落计数法的基本原理和方法，了解血球计数板的结构和使用方法和分光光度法计数法的原理和方法。 2、学会用血球计数板对芽殖酵母进行计算。

3、学习观察活性污泥中生物相的方法，初步分析生物处理系统工作状态是否正常。

二、 实验原理

1、 平板菌落计数法

平板菌落计数法是将待测样品经适当的稀释后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据稀释倍数和取样接种量即可算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不容易完全分散成单个细胞，所以长成的一个单个菌落也有可能来自样品中的2—3个或者更多细胞。因此平板菌落结果往往偏低。为了清楚阐述平板菌落计数结果，现在已倾向使用菌落形成单位，而不以绝对的菌落数来表示样品的活菌含量。 2、 分光光度法

当光线通过细菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，菌细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。因此，可用一系列己知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度--菌数

微生物学假期综合教学实习

实习时间： 2013年 6 月 25 日 开始

实习班级： 应技1101-1102 人

生命科学技术学院微生物教研室

微生物教学实习基本实验流程

第 配制牛肉膏固体培养基、3倍和单倍乳糖发酵液， 一准备无菌水及各种器皿、器材 天

）

灭菌

采集样品

（

第按要求做10倍梯度稀释

二

天

）配制伊红美测样品的细菌总数： 乳糖培养基初发酵试验：

样品的稀释液涂布按实验要求将稀释液接入兰固体和E.C液 牛肉膏平板 3倍、单倍乳糖发酵培养液 体培养基

37OC培养 37OC培养 灭菌

数平板上菌落看乳酸发酵 倒伊红美兰平板 （数，计算样品的细结果，查MPN表 第菌总数 三 检验乳酸发酵管中产酸产气的样品天 ）

伊红美兰平板划线 接E.C管

37OC培养 44.5OC培养

（挑有金属光泽、看结果，鉴定是 第

无光泽的菌落 否有粪大肠杆菌 四

天接单倍乳糖发酵管 革兰氏染色 ）

37OC培养

看复发酵结果 （ 第 综合本实验的六项结果（细菌总数、乳糖管初发酵（MPN）、伊红美兰平板鉴定、 五E.C平板鉴定、革兰氏染色、乳糖复发酵），写出实验报告 天清洗器材，并做好室内清洁。 ） （

微生物学综合教学实习

学习目

第四章 病毒

1 病毒具有哪些特点？病毒壳体有哪几种对称类型？

答：①体积微小 ②无完整的细胞结构，主要成分是核酸跟蛋白质 ③严格活细胞内寄生 ④对干扰素敏感，对抗生素不敏感 ⑤繁殖方式是复制，且具有感染性；有螺旋对称型、二十面体对称型、复合对称型。

2 什么是病毒的一步生长曲线？包括几个期？各有何特点？

答：主要以烈性噬菌体为例，一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线，反映了每种噬菌体的三个重要的特征参数：潜伏期、裂解期的长短及裂解量。包括潜伏期、裂解期和平稳期，潜伏期细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段，裂解期宿主菌迅速裂解、溶液中噬菌体颗粒急速增加的阶段，平稳期宿主细胞已经全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高峰的时期。

3 以噬菌体为例，说明病毒的增殖过程。

答：①吸附和侵入：噬菌体感染细菌时，其尾部为吸附器官，能识别宿主菌表面的特殊受体，然后分泌酶类溶解细胞壁，使细胞壁出现小孔，讲头部的核酸注入宿主菌内，蛋白质外壳留在宿主菌细胞外；②生物合成：进入宿主菌内的噬菌体核酸，首先转录翻译产生早期蛋白，进行晚期转录并复制子代核酸，再转录产生噬菌体的结构蛋白，子代核酸和蛋白质按一定程序装配成完整的子代噬菌体颗粒；③当宿主菌细胞

第四章 病毒

1 病毒具有哪些特点？病毒壳体有哪几种对称类型？

答：①体积微小 ②无完整的细胞结构，主要成分是核酸跟蛋白质 ③严格活细胞内寄生 ④对干扰素敏感，对抗生素不敏感 ⑤繁殖方式是复制，且具有感染性；有螺旋对称型、二十面体对称型、复合对称型。

2 什么是病毒的一步生长曲线？包括几个期？各有何特点？

答：主要以烈性噬菌体为例，一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线，反映了每种噬菌体的三个重要的特征参数：潜伏期、裂解期的长短及裂解量。包括潜伏期、裂解期和平稳期，潜伏期细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段，裂解期宿主菌迅速裂解、溶液中噬菌体颗粒急速增加的阶段，平稳期宿主细胞已经全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高峰的时期。

3 以噬菌体为例，说明病毒的增殖过程。

答：①吸附和侵入：噬菌体感染细菌时，其尾部为吸附器官，能识别宿主菌表面的特殊受体，然后分泌酶类溶解细胞壁，使细胞壁出现小孔，讲头部的核酸注入宿主菌内，蛋白质外壳留在宿主菌细胞外；②生物合成：进入宿主菌内的噬菌体核酸，首先转录翻译产生早期蛋白，进行晚期转录并复制子代核酸，再转录产生噬菌体的结构蛋白，子代核酸和蛋白质按一定程序装配成完整的子代噬菌体颗粒；③当宿主菌细胞

非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法

USP61中英对照版

<61> MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMENRATION TESTS

非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法

INTRODUCTION 导言

The tests described hereafter will allow quantitative enumeration of mesophilic bacteria and fungi that may grow under aerobic conditions.

以下所描述的这些检测将使得对在有氧的条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数成为可能。

The tests are designed primarily to determine whether a substance or preparation complies with an established specification for microbiological quality. When used for such purposes, follow the

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品