抗氧化活性测定方法有哪些

叶绿体的提取

一、试剂配置

1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl（0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO（0.0005=0.1g）；4200×使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）; 2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）； 3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；

实际配制：

PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),

悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;

80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）

二、提取步骤

1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml； （4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100m

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抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）

1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；

B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；

（4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml，避光保存，随用随配

β-胡萝卜素漂白法测定莲子心粗多糖抗脂质

过氧化的活性 30 mL 试管中加入0. 5 mLβ-胡萝卜素(β2caro2

毛头牛蒡子醇提物抗氧化活性研究

目的", 研究毛头牛蒡子提取物的抗氧化活性。方法",将毛头牛蒡子乙醇提取物采用溶剂萃取法, 分成极性不同的

4 个部分, 并采用DPPH 法和邻苯三酚自氧化法测定各部分的清除DPPH 自由基和超氧阴离子自由基的能力, 以测定其抗氧化活性, 并与抗坏血酸进行比较

DPPH 法抗氧化活性分析", DPPH 自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基, 在517 nm 处有强吸收, 其乙醇水溶液呈很深的蓝紫色, 加入受试物后,517 nm 处可以动态监测DPPH 自由基被清除的效果, 这种效果通常用对DPPH 的清除率来表示。清除率越大, DPPH 自由基清除越彻底, 受试物的抗氧化活性越强[ 6",7] 。计算清除率的公式为:

其中, A0 为未加样DPPH 溶液的原始吸

光度; A为加样后DPPH 液的吸光度; A 样为样品溶液自身的吸光度。公式中引入A0 是为了消除样品溶液本身颜色对实验结果的影响。A 0 的测定: 用移液器取2. 0 mL95% 乙醇, 再取2. 0 mL 已配制好的DPPH

研究黑蒜的抗氧化活性。对144只老龄小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(Vc组)、黑蒜低剂量组(65mg/kg)、黑蒜中剂量组(260mg／kg)、黑蒜高剂量组(650mg／kg)、白蒜低剂量组(65mg/kg)、白蒜中剂量组(260mg／kg)、白蒜高剂量(650mg／kg)组等9组,干预30d后,以溴化苯油灌喂小鼠,制造氧化损伤模型后,分别测定小鼠血液、肝脏组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物

5 8

2 0第9第期卷1 0

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科研学究

黑蒜抗氧化活性研究祝炳俏’吴海歌。刘媛媛。囤景鑫姚子昂 。,。。

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摘

要：究黑蒜的抗氧化活性。对 14只老龄小鼠随机分为空白组、型组、研 4模阳性对照组( )黑蒜低剂量 V组、

m(5m#g、 6 e )黑蒜中剂量. 2 0/s、￣ 6 mg )黑蒜高剂量￣ ( 5 g s、 g( k g 6 0m/ )白蒜低剂量￣ ( 5 s s、 k g 6 m/ )白蒜中剂量组 (6 s k 2 om/ k )白蒜高剂量 (5/ g .. 9组， g、 6 0ms )

DPPH法测定胡萝卜素的抗氧化活性 毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明

原创性声明

本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得 及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。

作 者 签 名： 日 期： 指导教师签名： 日 期：

使用授权说明

本人完全了解 大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。

作者签名： 日 期：

学位论文原创性声明

本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成

海 南 师 范 大 学

本 科 生 毕 业 论 文

题目：海南热带兰花的抗氧化活性研究

系 别： 化学系 学 院： 化学与化工学院

本科生毕业论文（设计）独创性声明

本人声明所呈交的毕业论文（设计）是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文（设计）中没有抄袭他人研究成果和伪造数据等行为 。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文（设计）中作了明确的说明并表示谢意。

论文（设计）作者签名： 日期：

本科生毕业论文（设计）使用授权声明

海南师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交毕业论文（设计）的复印件和磁盘，允许毕业论文（设计）被查阅和借阅。本人授权海南师范大学可以将本毕业论文（设计）的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存、汇编毕业论文。

论文（设计）作者签名： 日期：

指 导 教 师 签 名： 日期：

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目 录

1 引言

鹿仙草活性成分提取纯化及抗氧化护肝活性研究

筒鞘蛇菰（Balanophora involucrata Hook.f.）为蛇菰科蛇菰属植物，别名鹿仙草，蛇菰为寄生性草本植物，一年或多年生，无叶绿素和气孔，叶退化呈鳞片状或不存在，无正常根，靠根茎上的吸盘寄生于寄主植物的根上，根茎粗，通常分枝，表面常有瘤或星芒状皮孔，顶端具开裂的裂鞘。其全草入药, 寄主分布于海拔500-2600m的多种林木, 植株大多在中秋前后露出地面, 生长季节性强, 生长期短, 故资源稀少。《本草纲目》将蛇菰以葛菜花之名列入菜部第28卷, 别名葛乳。蛇菰资源分布：分布于福建、湖北、广东、广西、四川、云南等地。具有壮阳补肾，理气健脾，止血生肌，清热解毒的功效。民间常用于治疗阳痿，慢性肝炎，消化道出血，月经过多，遗精，肿瘤等症。

蛇菰的品种来源较多, 采用不同的提取方法和检测手段, 得到的化学成分不尽相同。蛇菰属植物中所含化学成分有很大一部分是三萜类。另外甾醇类、多酚类含量也较多，酚类有许多药理作用。1919年Simon等人从蛇菰中分离出蛇菰素；到1998年，刘锡葵等人正式提出蛇菰素分为蛇菰素A(balanophorin A)和蛇菰素B(balanophorin B)。含

罗丹明6G-Mn2+-H2O2体系荧光分光光度法

测定水果的抗氧化活性

1 前 言

羟自由基(·OH)是活性氧中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由基。它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。羟自由基还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬有关。对机体适当补充外源性抗氧化剂或给予能促使机体内源性物质恢复到一定水平的药物，可改善这些状况。由于长期使用化学合成的抗氧化剂对人体有一定的副作用，所以，寻找天然、安全、无毒的抗氧化剂就越来越受到人们的重视。

对羟自由基的研究有许多，例如：荧光法研究高粱红色素清除羟自由基活性，为高粱红色素的合理开发和利用提供了一定的参考依据；罗丹明6G-Co2+-H2O2体系荧光法测定常见蔬菜的抗氧化活性，测定了14种常见的蔬菜的抗氧化活性，其中菠菜、油菜、韭菜、香菜、雪里蕻5种绿叶蔬菜的抗氧化活性较强；

目前，离体检测羟自由基的方法主要有电子自旋共振（ESR）法[1]、化学发光法[2]、光度法[3]及荧光法[4]，这些方法多是用传统的Fe2+-H2O2体系产生羟自由基，或Cu+、Co2+、代替Fe2+[5、6]使灵敏度提高，对水

一、过氧化物酶（POD）活性的测定

POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。 测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。

△470 ×VT

POD活性=

0.01×t×Vs×W

式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；

VT ----提取酶液的总体积（ml） t----反应的时间（min）

Vs ----测定时取用酶液体积（ml） W----样品鲜重（g）

二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定

多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。

酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液