生化基础实验有哪些

实 验 讲 义

基础实验

生物科学与工程学院1

生 化

实验一 实验基本操作技能培训

一、 仪器的洗涤与干燥 1. 仪器的洗涤

化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器，常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的 结果。因此，在进行化学实验时，必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多，应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下：

(1)用水刷洗

用水和毛刷刷洗，再用自来水冲洗几次，可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷，也不能用力过猛，否则会戳破仪器。

(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗

去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成，它与肥皂、合成洗涤剂一样，能去除油污和一些有机物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用，使得洗涤的效果更好。洗涤时，可用少量水将要洗的仪器润湿，用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁，最后用自来水冲洗。 用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净，可用热的碱液洗。 (3)用铬酸洗液洗

铬酸洗液是由浓硫酸和重铬酸钾配制而成的，具有很强的氧化性，对有机物和油污的去污能力特别强。使用铬酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水，

实 验 讲 义

基础实验

生物科学与工程学院1

生 化

实验一 实验基本操作技能培训

一、 仪器的洗涤与干燥 1. 仪器的洗涤

化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器，常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的 结果。因此，在进行化学实验时，必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多，应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下：

(1)用水刷洗

用水和毛刷刷洗，再用自来水冲洗几次，可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷，也不能用力过猛，否则会戳破仪器。

(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗

去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成，它与肥皂、合成洗涤剂一样，能去除油污和一些有机物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用，使得洗涤的效果更好。洗涤时，可用少量水将要洗的仪器润湿，用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁，最后用自来水冲洗。 用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净，可用热的碱液洗。 (3)用铬酸洗液洗

铬酸洗液是由浓硫酸和重铬酸钾配制而成的，具有很强的氧化性，对有机物和油污的去污能力特别强。使用铬酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水，

※ 实验一 糖的性质实验

糖的颜色反应

※ 实验一（1）

【实验目的及要求】

1. 掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。 2. 掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。 【实验原理】

1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。

2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。 【实验仪器及用品】

仪器：水浴锅。 器皿：吸管、试管。

实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。 【实验试剂】

莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。 塞式试剂：间苯二酚50mg，溶于100ml盐酸（VH2O：VHCl=2:1），现用现配。 【实验内容及步骤】

一、莫式实验

于4支试管中，分别加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1 ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜

国家示范院校 广东高职旗帜

这是一所历史悠久、底蕴深厚的高职院校。从1933年出发，她肩负职教救国的神圣使命，沐风栉雨，从风云变幻的20世纪初一路走来。85年，她始终站在职业教育的潮头，她的发展史就是中国职业教育的一个缩影，一个标杆。

这是一所开拓创新、筑梦职教的高职院校。自1999年升格高职后，仅用10年的努力，便跻身国家示范高职院校行列，被誉为“广东高职的一面旗帜”。现在以“国内一流，国际知名”的国家优质高职院校为目标，以人才培养为第一使命，再度扬帆奋进，领航职教潮流。

这是一所钟灵毓秀、大气自然的高职院校。扎根千年商都，吸珠江云山灵气，坐拥商都无限资源；拓址古郡南海，占据珠江西岸先进制造产业带核心区，具备产教融合天然优势。广州校区，古朴典雅，凸显人文艺术，蕴含古典气质；南海校区，师法自然，聚焦工科特色，散发现代气息。

这是一所名师荟萃、英才辈出的高职院校。国务院特殊津贴专家、国家级模范教师、国家级教学名师、国家级教学团队、全国技术能手、“千百十工程”国家级培养对象、全国高校思政课教师影响力标兵人物、珠江学者等组成强大教学团队，传薪播火，授业启航。她“德能兼备、学以成之”，传承工匠精神，已育英才十余万。

这是一所规模宏大、实力雄厚的高职

生物化学实验指导

海洋学院生物化学课程组编

2008年7月22日

目 录

实验室守则 ???????????????????????????????? 2 实验一 糖类的定量测定 ???????????????????????? 4 实验二 薄层层析法分析氨基酸 ????????????????????? 7 实验三 氨基酸含量的测定 ??????????????????????? 9 实验四 酪蛋白的制备 ????????????????????????? 11 实验五 考马斯亮蓝G-250 法测定蛋白质含量 ????????????? 13 实验六 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ????????????????? 17 实验七 DNA的提取制备 ???????????????????????? 29 实验八 酶活性的测定 ????????????????????????? 33 实验九 过氧化物酶同工酶分析 ????????????????????? 37 海洋学院实验记录的基本要求 ???????????????????????42 实验报告撰写要求 ????????????????

实验一 糖的颜色反应及还原性检验

A. 莫氏试验①

一、目的

掌握莫氏（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。

二、原理

糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用

②

下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物。利用这一性质可以鉴定糖。

三、实验器材

棉花或滤纸；吸管1.0ml（×5）、2ml（×1）；试管1.5cm×15cm（×5）；容量瓶50ml（×5）；烧杯50ml（×5）；棕色瓶50ml（×5）；玻璃棒多根、电炉（配石棉网）多个。

四、实验试剂

莫氏试剂：称取α-萘酚2.5g，溶于95％乙醇并稀释至50ml。此试剂需新鲜配制，并贮于棕色试剂瓶中。

1％蔗糖溶液：称取蔗糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。

1％葡萄糖溶液：称取葡萄糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。 1％果糖溶液：称取果糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。

1％淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混和成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至50ml。

五、操作

于5支试管中，分别加入1％葡萄糖溶液、1％蔗糖溶液、1％果糖溶液与1％淀粉溶

①

液1 mL和少许纤维素（棉花或滤纸少量浸在1ml水中），然后各加莫

生物化学检验技术 课程学习指南

（适用于医学检验专业专科使用）

生化检验课程学习指南

生物化学及检验教研室编

一、课程简介

《生物化学检验》(临床生物化学检验、临床生化检验、生化检验、生化检验学、临床生物化学和生物化学检验、临床生物化学及生物化学检验、临床生物化学、临床化学等)是对人体健康和患病时化学状态的研究以及用于诊断、治疗和预防疾病的化学试验方法的应用。它的主要任务是研究人体器官、组织、体液的化学组成和进行着的生化过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。因此，《生物化学检验》既是一门研究人体健康和疾病时生理生化过程的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法分析机体健康和疾病时体液或组织样品中各种化学成分的医学应用技术学科，它在医学理论和医学实践中均具有相当重要的地位，是高等医学检验专业的一门主干学科和必修课程。

（一）课程目标

通过本课程的学习，要求学生掌握生物化学检验的基础理论、基本知识和基本技能，能够从事检验医学的生化实验诊断操作、评价和应用，培养成为医学检验技术专业高级专门人才。具体归纳为：

1、掌握生物化学检验的基本理论、基本知识； 2、具有娴熟

全面质量管理过程的全面性，决定了全面质量管理的内容应当包括设计过程、制造过程、辅助过程、使用过程等四个过程的质量管理。

1、设计过程质量管理的内容

产品设计过程的质量管理是全面质量管理的首要环节。这里所指设计过程，包括着市场调查、产品设计、工艺准备、试制和鉴定等过程（即产品正式投产前的全部技术准备过程》。主要工作内容包括通过市场调查研究，根据用户要求、科技情报与企业的经营目标，制定产品质量目标;组织有销售、使用、科研、设计、工艺、制度和质管等多部门参加的审查和验证，确定适合的设计方案;保证技术文件的质量;做好标准化的审查工作;督促遵守设计试制的工作程序，等等

2、制造过程的质量管理的内容

制造过程，是指对产品直接进行加工的过程。它是产品质量形成的基础，是企业质量管理的基本环节。它的基本任务是保证产品的制造质量，建立一个能够稳定生产合格品和优质品的生产系统。主要工作内容包括组织质量检验工作;组织和促进文明生产;组织质量分析，掌握质量动态;组织工序的质量控制,建立管理点，等等。

3、辅助过程质量管理的内容

辅助过程，是指为保证制造过程正常进行而提供各种物资技术条件的过程。―它包括物资采购供应，动力生产，设备维修，工具制造，仓库保管，运输服务等。它主要内容有:

一 蛋白质提取、纯化及分析技术

实验一 多酚氧化酶（PPO）的分离提取

一、材料与试剂

（1）马铃薯（大约每小组200-300g） （2）试剂：

0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02m巯基乙醇，0.001m EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02m巯基乙醇，0.001m EDTA，0.005m MgCL2）配置时配。 （3）实验器械与仪器设备：

试管与试管架；烧杯、玻璃搅棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆器；PH计和PH试纸；GL-20C高速冷冻离心机； DL-7A大容量低速冷冻离心机 二、操作步骤

1：粗酶提取：

马铃薯组织按1：1（W/V）比例与0.03m磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001m EDTA，5%甘油，1%聚乙烯吡咯烷酮）混合，匀浆4层后纱布过滤，滤液以6000rpm离心10min，弃除沉淀获得酶提取液。 2：盐析分级沉淀：

在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），然后6000rpm离心20min弃除沉淀；离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和

基础生化复习要点

（注：此题非考题，只是一些重点总结，请全面复习。）

一．写或结构写名称

ACP Ala AMP Arg Asn BCCP FAD FAS cys EMP ETC THFA FMN GSH Glu GLn His lys PAGE PEP Phe PRPP ser SSB Tm Try Tyr UDPG Ψ CAMP CDNA

二．名词解释或比较

稀有碱基/稀有核苷酸 DNA双螺旋结构的多态性 蛋白质的变性与复性 酶的活性中心与必须基团 酶的别构效应 生物氧化 糖酵解与糖异生 辅酶与辅基 中心法则 转录与逆转录 前导链与滞后链 操纵子 核苷酸的从头合成与补救途径 多核糖体 三．简述或论述

DNA 二级结构的模型要点

举例说明蛋白质结构与功能的关系 凝胶过滤层析的原理 SDS-PAGE的原理

酶催化的高效性产生的要素 TCA循环的生物学意义 ATP在能量转换