钙离子载体蛋白磷酸化

质粒载体单酶切后的去磷酸化

1、 去磷酸化体系的确定：

一般有两种体系：20ul体系和50ul体系

ddH2O X to 20ul SAP buffer 2ul

SAP 1ul（一般0.05-2μg的DNA用1ul的SAP足够） 质粒载体 m ul [m=（0.02nmol*质粒大小kb*660）/质粒浓度] 2、 反应条件：

37℃反应30-60min

65反应15-30min（灭活SAP）

用1X TE将去磷酸化后的载体补足300ul（为了下一步纯化载体时减少损失）

载体纯化（个人不建议用胶回收柱纯化，因为纯化的效率很低，除非你的载体浓度很高或者你的柱子效率很高。建议使用酚氯仿纯化DNA的方法纯化载体） 加入 酚：氯仿：异丙醇（25: 24:1） 300ul 充分混匀10min左右

8000rmp离心5min，分层后小心吸取上清于新离心管（千万不要吸到中间层，宁肯少吸点上清）

加入300ul异丙醇于上清中，充分混匀

80

蛋白质磷酸化与信号传导

蛋白質磷酸化與信號傳導

對所有真核生物而言，蛋白質的磷酸化是細胞內信號傳遞的關鍵步驟，舉凡在細胞代謝、生長、增殖、癌變調控方面，蛋白質的磷酸化都扮演著重要角色。目前在真核細胞內已發現有400多種蛋白激酶和1000多種磷酸蛋白。通過蛋白質磷酸化，機體得以改變細胞內蛋白質活性，或藉以改變酵素活性、或藉以傳遞信號、或調節細胞內各個生理過程。隨著愈來愈多的信號傳導路徑被證實與蛋白質磷酸化相關，此一主題己是當今細胞生物學研究的熱點。

蛋白質的可逆磷酸化

蛋白質的磷酸化和去磷酸化是一個可以相互轉化的過程，分別由機體藉由調控細胞內各類蛋白激酶（protein kinases）和蛋白磷酸酶（phosphatases）的活性來啟動或抑制。通過磷酸化和去磷酸化兩種構象的互變，導致蛋白質活性改變而表達其特殊的生理功能。現已證實，細胞的許多功能蛋白，如激酶、酶蛋白、受體、視蛋白、運輸蛋白、收縮蛋白、調節蛋白、核蛋白、離子通道、離子幫浦等，均能發生蛋白質的磷酸化與去磷酸化。蛋白質磷酸化的方式有兩種：一種是蛋白質自身磷酸化，如胰島素受體、C激酶、G激酶、Ca2+·CaM激酶、EGF受體、PDGF受體、IGF-1受體、FGF受體、CSF-1受體、

中国药物与临床2012年1月第12卷第1期Chinese Remedies &Clinics ，January 2012,Vol.12,No.1肺间质纤维化是一种渐进性加重的致命性弥漫

性肺疾病。肺内成纤维细胞和损伤的气道上皮细胞

向肌成纤维细胞转分化是特发性肺纤维化发生的重

要病理因素［１］，α鄄平滑肌肌动蛋白（α鄄ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ

ａｃｔｉｎ，α鄄ＳＭＡ）是研究肌成纤维细胞分化的标记物。

近年来，肺纤维化转分化病理过程中涉及到的信号

通路一直是研究的热点。ｃ鄄ｊｕｎ氨基末端激酶（ｃ鄄ｊｕｎ

ＮＨ２鄄ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ，ＪＮＫ）

信号通路参与调控许多细胞增殖、分化与凋亡，是丝裂原活化蛋白激酶家族的

重要一员［２］。Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ等［３］发现ＪＮＫ信号通路在人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化中发挥作用，而关于体内ＪＮＫ信号通路在肺纤维化转分化过程中是否发挥作用尚未见相关研究报道。ＳＰ６００１２５作为ＪＮＫ激酶抑制剂，可特异性阻断ＪＮＫ细胞信号通路［４］。本实验使用ＳＰ６００１２５进行干预，通过观察大鼠肺组织中ｐ鄄ＪＮＫ和α鄄ＳＭＡ的表达水平，从分子信号角度探讨肺纤维化转分化的发病机制。1材料与方法１．１主要试剂及药品：盐酸博莱霉素（ＢＬＭ，

NovelZincPhosphateTopologiesDefinedbyOrganicLigands

JianFanandBrianE.Hanson*

DepartmentofChemistry,VirginiaPolytechnicInstituteandStateUniVersity,Blacksburg,Virginia24061

ReceivedMarch1,2005

Sixnewzincphosphates[C18H20N4][Zn4(HPO4)4(H2PO4)2(C18H18N4)3] 2H2O(1),[Zn4(HPO4)4(C18H18N4)3] 4H2O(2),[Zn3(HPO4)3(H2PO4)(C22H22N8)0.5(C22H24N8)0.5](3),[Zn2(HPO4)2(C18H16N4)](4),[Zn(HPO4)(C18H14N2)](5),and[Zn2-(HPO4)2(C12H10N4)](6)havebeensynthesizedundermildhydrothermalconditionsinthepresenceof1,4-bis(N-benzimidazolyl)butane(L1),1,2,4,5-tet

锅炉等离子载体风减压阀失效

原因和对策分析

一、载体风减压阀使用概况

某600MW火电机组采用直吹中速磨，等离子点火，锅炉等离子载体风输入气源采用仪用压缩空气，经过减压阀减压后进入等离子系统作为载体风使用，如下图所示：

旁路阀输出端减压阀输入端

2011年#1、#2锅炉等离子载体风减压阀投用后1年内先后损坏，载体风压大幅升高，后与厂家协商免费更换原品牌（日本SMC）减压阀，使用几个月后又损坏，2012年更换为英国斯派莎克品牌，使用后很快又出现故障。目前该管路减压一直靠旁路阀进行手动节流实现。

由于仪用压缩空气的压力波动范围在0.63-0.78MPa之间，使用手动阀调节风压由于无法实现自动控制，会造成载体风压力波动大；另外，由于手动阀口径较大，且手动阀前后压差太大，在手动调节阀后压力的时候，微小的调节量就会造成很大的压力变化，几年来已多次出现旁路阀调整不当造成数台压力表同时爆表损坏的故障。

载体风是等离子拉弧的必要条件，当风压过低时，电离出来的等离子体移动距离太短，点火质量较低，容易发生火焰过于集中，造成燃烧器内壁结焦。当风压过高时，有可能把电弧吹灭。因此精确、稳定地控制载体风的压力是等离子系统安全、稳定运行的关键，为了实现这一目标，必须停止旁

马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因cDNA克隆及其在甲醇毕赤酵母中的表达

农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2005,13(3):282~287

··研究论文

马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基

基因(的克隆及其在毕赤酵母中的表达*

宋波涛柳俊**谢从华成善汉

(华中农业大学园艺林学学院，国家蔬菜改良中心华中分中心，园艺植物生物学教育部重点实验室，

湖北省马铃薯工程技术研究中心，武汉430070)

摘要：用RT-PCR结合RACE的方法，在腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因(温处理的马铃薯(

目标片段为体。DNA序列测定结果表明，

从低的保守位点设计1对引物，

L.)块茎cDNA中，扩增出1条约1.9kb的特异性条带，并将其克隆到pBluescriptSK域载

编码521个氨基酸。全长为1854bp，包含一个1563bp的开放阅读框架，5'端

有63bp的非翻译区，3'端包含219bp的非编码序列，3'端poly(A)尾端上游12和19bp处有加尾信号AATAAA。该基因已在GenBank注册，登记号为AY186620。将该基因PCR突变后，克隆到酵母表达载体pMET琢-B中，构成表达

BioTek应用手册

A p p l i c a t i o n N o t e

药物筛选

一种常见的GPCR传感器-ERK1/2的自动均相磷酸化检测 -均相LanthaScreen®细胞分析

Paul Held and Peter Banks, BioTek Instruments, Inc. Winooski, VT

Kristin Huwiler, Matthew Robers, and Bonnie Hanson, Life Technologies, Madison, WI

关键词：GPCR, LanthaScreen, ERK，TR-FRET

GPCRs的激活会刺激活化各种信号通路，大部分信号通路的激活均可能导致细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化。因此，针对ERK1/2的磷酸化检测可以代替GPCRs的活性检测。本文介绍了一种将BacMam调节的GFP-ERK2 传感器基因传递技术和LanthaScreen®细胞学实验技术相结合的时间分辨荧光共振能量转移技术（TR-FRET），该技术用来检测ERK2细胞外的磷

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MP518钙离子浓度计和钙离子浓度计价格 标题：MP518钙离子浓度计 MP518 钙离子浓度计 用以测试水溶液中的钙离子浓度，广泛用于水质、生化和生物医学的分析研究中。、 产品介绍： ● 符合国际规范的GLP要求，具有自动校准、自动温度补偿、数据储存、RS232输出、时钟显示、功能设置等智能化功能。 ● 有三种不同的测量模式： MP518钙离子浓度计 稳定显示模式；定时测量模式；连续测量模式。 ● 钙电极量程: 1～5 pCa (10-1～10-5 mol/L)。 ● 配置钙离子复合电极和温度电极 。 ● 可切换四种离子浓度单位：pX、mol/L、mg/L和ppm. ● 仪器带有唯一的产品序列号。 ● 符合IP54防尘防溅等级，仪表插口有硅胶帽密封保护。 技术规格： mV 测量范围 分辨率 准确度 -1999.9mV ~ 0 ~ 1999.9mV ... 标题：MP523-04氟离子浓度计 MP523-04 氟离子浓度计 适用于饮用水、地表水、海水、生活污水和工业废水等领域中氟化物的测试分析，以及矿物材料、有机材料和生物材料中的氟离子测量和

BY: 2014年 B系列报告 : 进出口数据报告 出品机构：中国产业洞察网 www.51report.com 2011年1月-2014年3月中国（HS28352590） 其他正磷酸氢钙（磷酸二钙）出口量及出口额 月度数据统计报告 中国产业洞察网 2014年 1 BY: 2014年 图表目录 图表 1：2009-2013年中国货物进出口总额（亿美元） .................................................................................... 3 图表 2：2013年中国货物进出口总额结构（%） ................................................................................................ 4 图表 3：2013年中国对主要国家和地区货物进出口额（亿美元）............................................

磷酸三钙流畅性的探索研究

【摘 要】随着全球食品行业的高速发展，对流畅好的磷酸三钙成品需求量成倍增加。因国内磷酸三钙流畅性比国外差，使得国内出口国外量大大减少，产品价格一直上不去，仅为国外产品价格的50%。经工艺改造：用喷雾干燥代替桨叶干燥或气流干燥生产出的磷酸三钙，粉体产品流畅性大大提高，满足了客户高档次磷酸三钙的需求，为企业实现了更高的利润。

【关键词】磷酸三钙流畅性；工艺；流程；国内外数据对比；喷雾干噪；实验结果；结束语

1 概述

连云港市某化工有限公司是国内生产的磷酸三钙的大型企业，产品主要是用于卡夫、雀巢等国内外知名食品国际性公司，在食品添加剂行业享有一定的知名度。产品只因流畅性这一指标差，而导致客户满意度不高，销售价格上不去，仅为国外价格的50%，严重制约了我国磷酸盐食品出口行业发展。经实验及工艺改造：用喷雾干燥代替桨叶干燥或气流干燥生产出的磷酸三钙，粉体产品流畅性能大大提高，满足了客户高档次磷酸三钙的需求，产品销售价格从每吨12000元提高至24000元，为企业实现了更高的利润。

2 产工艺简介

磷酸三钙原工艺流程是：先采用热法食品磷酸和碳酸钙中和反应，控制