植物dna的提取

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

班级 组别 成员 指导教师 10级生物科学2班 第七组 刘梦雅、王芳、毛阿威、张杰 刘立亚

2011年11月11日

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

一、 实验目的

1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法； 2. 掌握测定核酸的原理和方法；

3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法；

4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。

二、 实验原理

1、 关于植物DNA制备的基本原理

植物细胞中DNA主要存在于细胞核内，称为核DNA。细胞质中含有少量的DNA，称之为细胞质DNA，主要分布于线粒体或叶绿体中，分别称为线粒体DNA和叶绿体DNA，细胞内各种DNA称为总DNA。植物DNA的制备，必须首先注意植物细胞的特点：①植物组织中含有坚硬的纤维素，采用温和条件难以破碎细胞；②植物细胞一般具有大的液泡，破碎细胞时有机酸随之逸出将使pH显著下降；③通常植物细胞的DNA含量较低；④植物中含有大量多糖、脂质、色素和酚类等物质，这些杂质往往会与提取的DNA混在一起，给核酸的提取与纯化带来诸多不便。鉴于以上特点，提取植物DNA时除了选

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

班级 组别 成员 指导教师 10级生物科学2班 第七组 刘梦雅、王芳、毛阿威、张杰 刘立亚

2011年11月11日

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

一、 实验目的

1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法； 2. 掌握测定核酸的原理和方法；

3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法；

4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。

二、 实验原理

1、 关于植物DNA制备的基本原理

植物细胞中DNA主要存在于细胞核内，称为核DNA。细胞质中含有少量的DNA，称之为细胞质DNA，主要分布于线粒体或叶绿体中，分别称为线粒体DNA和叶绿体DNA，细胞内各种DNA称为总DNA。植物DNA的制备，必须首先注意植物细胞的特点：①植物组织中含有坚硬的纤维素，采用温和条件难以破碎细胞；②植物细胞一般具有大的液泡，破碎细胞时有机酸随之逸出将使pH显著下降；③通常植物细胞的DNA含量较低；④植物中含有大量多糖、脂质、色素和酚类等物质，这些杂质往往会与提取的DNA混在一起，给核酸的提取与纯化带来诸多不便。鉴于以上特点，提取植物DNA时除了选

植物DNA的提取分离技术

摘要：主要介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法：CTAB法、SDS法等，并在对其进行了简单的归纳总结与比较分析同时，并介绍了一些新的改良方法和其他植物提取方法 关键词：植物DNA 提取方法 研究进展

市售中药材大多为干品,而中药材的加工和贮藏整个过程,如日晒、高温烘干等都不利于DN的完整性, 为达到要求目前国内外研究发现并使用的DNA提取方法有很多[1-12]，其中被最为广泛应用的DNA提取方法是传统的CTAB法和SDS法[13]。由于不同植物的材料组分和干湿程度各异，因此对不同植物DNA的提取存在着不同的效果。目前许多学者都在致力于研究不同的植物DNA提取方法。他们在探索新方法的同时，也针对不同的植物，在传统的提取方法上进行着一些新的改良。

1.十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法

在目前众多的DNA提取方法中，CTAB法是其中最为广泛应用的一种。它既可以裂解细胞，又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀，因而经常被应用于植物的DNA提取工作中。 1.1方法及原理

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中

2×CTAB法植物总DNA提取

1. 液氮研磨1g左右的植物组织，转移到离心管中。改用研磨枪在冰上研磨，不加β-巯基乙醇

研磨时可加入适量的PVP、β-巯基乙醇。若CTAB准备2-3天内用完，则可将PVP、β-巯基乙醇直接加入其中。

2. 加入500μl的2*CTAB (60℃或65℃预热) ,颠倒混合均匀后在60℃或65℃水浴30m-1h小时,其间要上下颠倒混匀数次。

3.取出离心管，加入等体积的24：1（三氯甲烷：异戊醇），上下颠倒充分混合。 若量多，则可以直接侧立于摇床上晃动10分钟。

4.12000转速离心5-10min。将离心管动作轻缓的取出转子，放置于离心管架上。 a.离心后溶液分三层：上层为水相；中层为碎片和蛋白相；底层为氯仿 b.迅速进入下一步，以免各相混合

5.用移液枪吸取管中上层水相，动作一定要轻缓，不可搅动其它两层。 a.此步骤要宁舍不贪多，尽量避免吸取到下层液体。

b.若上步骤中中间层较厚，则继续加入等体积24：1，再次抽提一次，直至中间层较薄。 6. 在抽提出的水相中加入1/3体积的5M的KAc及等体积的异丙醇（4℃预冷），轻轻晃动混合均匀后在-20℃沉淀。沉淀至少15分钟至过夜。

6-1 在抽提出的水

主要试剂的配制

参考（美）萨姆布鲁克（Sambrook，J.）等.分子克隆实验指南（下册）配置如下[94]：

（1）0.5 mo1/L EDTA(pH 8.0)：称取EDTA-Na2 18.61 g，加80 mL双蒸水，磁力搅拌器上剧烈搅拌。加入7 mL 10 mo1/L NaOH调至pH 8.0再用双蒸水定容到100 mL，在1.03×105Pa下高压灭菌20 min。

（2）5 mol/L NaCl溶液：称取NaCl 29.22 g，溶解于90 mL的双蒸水，加热到80℃溶解，冷却，再用双蒸水定容100 mL，在高压灭菌20 min。

（3）10 mol/L NaOH溶液：称取40.00 g NaOH溶于80 mL的双蒸水，搅拌，定容到100 mL。 （4）1 mol/L Tris-HC1溶液(pH 8.0)：称取12.114 gTris碱，溶于80 mL的双蒸水，加入浓HC1 4.2 mL，调整PH值到8.0，加水定容到100 mL，高压灭菌20min。 （5）10%CTAB（m/v）：称取CTAB 10.00 g，溶解于80 mL的双蒸水，加热促进溶解，加双蒸水定容到100 mL，室温保存。

（6）5 mo1/L KAc溶液(pH 4

实验二 植物基因组DNA的提取

Tris 读音 “吹斯” 脱氧核糖核酸酶DNase

是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。 淀下来，而DNA溶解在溶液中。

锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平

苯酚在空气中经常被氧化生成醌，它能够产生自由基，直接用于DNA分离，会使磷酸二酯键断裂， 造成DNA降解。苯酚使蛋白变性，离心时沉

在提取DNA时用的原料成分的关系,很多植物源提取材料里面含有酚类物质,酚类物质是芳族环上的氢原子被羟基或功能衍生物取代后生成的化合物

酚类物质如果经氧化后就会很容易于DNA共价结合引起褐变.这就是褐变现象,为有效除去酚类物质，需要在研磨时加入抗氧化的PVP，用PVP是利用

它的“CO-N=”基有很强的结合多酚化合物的能力，其结合能力随多酚化合物中芳环羟基数量的增加而加强，结合成复合物后,通过离心除去。另外，在化合物被氧化。

加入提取液时，加入B-巯基乙醇可使多酚氧化酶失活，防止酚类物质

质粒DNA的提取、纯化与纯度鉴定

李笃财 生科

1班 201200140048

【实验目的】

1、掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用。 2、掌握碱变性法提取质粒DNA的方法。

3、学习并掌握凝胶电泳进行DNA分离纯化的实验原理。 【实验原理】

1. 质粒DNA的提取——碱变性提取法：

提取和纯化质粒DNA的方法很多，目前常用的有：碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等。其中，碱变性提取法最为经典和常用，适于不同量质粒DNA的提取。该方法操作简单，易于操作，一般实验室均可进行。提取质粒DNA纯度高，可直接用于酶切、序列测定及分析。

碱变性法提取质粒DNA一般包括三个基本步骤：培养细菌细胞以扩增质粒；收集和裂解细胞；分离和纯化质粒DNA。

在细菌细胞中，染色体DNA以双螺旋结构存在，质粒DNA以共价闭合环状形式存在。细胞破碎后，染色体DNA和质粒DNA均被释放出来，但两者变性与复性所依赖的溶液pH值不同。在pH值高达12.0的碱性溶液中，染色体DNA氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒DNA的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离

基因组DNA提取

基因组DNA提取试剂盒简介

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等试验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。 一、基因组DNA提取的原则

1、保证核酸一级结构的完整性(因为遗传信息全部储存在核酸一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基层)。

2、排除其它分子(如蛋白质、多糖,、脂类、有机溶剂等)的污染，使下游试验顺利进行。

二、基因组DNA提取的原理和方法

DNA与组蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色丝，染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。 1、样品预处理

从各种不同来源的样品(如细菌、酵母、血液、动植物组织细胞等)中提取高纯度的基因组DNA，因细胞结构及所成分不同，样品预处理方式也不同，以下简单介绍常用提取材料的预处理方式，若需详细了解，请参考本公司各基因组DNA提取

第二章 材料与方法

2.2总DNA的提取

土壤中存在着大量的腐植酸、蛋白质等杂质都将会影响以下实验步骤，而过多的纯化的步骤又会造成DNA的大量损失和DNA片段的破碎。土壤总DNA的质量直接决定实验着是否能够准确的反应微生物的实际群落组成结构，实验证明不同提取方法获得的DNA，经DGGE分析会产生不同的群落结构指纹图谱

错误！未找到引用源。

，因此选用合适的DNA 提取方法

是十分重要的；，所以必须在在DNA的质量和纯度上做出最佳的平衡选择，Krsek和Welington

错误！未找到引用源。

认为玻珠+溶菌酶+SDS的组合可从土壤中获较高产量和纯度的DNA。

错误！未找到引用源。

直接提取法参照Krsek和Welington 步骤方法如下：

实验试剂：

的试验方法并略作改变，具体使用试剂和

DNA提取液（1%(W/V) CTAB(十六烷基三乙基溴化铵) 1.5mol/lNaCl、100mM磷酸钠、100mM Tris-HCl、100mM EDTA、PH=8）；20mg/ml蛋白酶K；50mg/ml溶菌酶；10%SDS；饱和酚；酚/氯仿/异戊醇(25：24：1 V/+V)；氯仿；100%乙醇；70%乙醇；异丙醇。

提取步骤：

1.称取1g土样放入2.0

基因组DNA提取

基因组DNA提取试剂盒简介

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等试验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。 一、基因组DNA提取的原则

1、保证核酸一级结构的完整性(因为遗传信息全部储存在核酸一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基层)。

2、排除其它分子(如蛋白质、多糖,、脂类、有机溶剂等)的污染，使下游试验顺利进行。

二、基因组DNA提取的原理和方法

DNA与组蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色丝，染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。 1、样品预处理

从各种不同来源的样品(如细菌、酵母、血液、动植物组织细胞等)中提取高纯度的基因组DNA，因细胞结构及所成分不同，样品预处理方式也不同，以下简单介绍常用提取材料的预处理方式，若需详细了解，请参考本公司各基因组DNA提取