ip免疫共沉淀原理

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

免疫共沉淀 from WHU SKY

1用细胞刮子收细胞，3000rpm，5min，离心，去上清；或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温，冰上或4度冰箱或4度离心机。

2 PBS清洗，重复步骤1

3选择合适的bufer裂解细胞，现加1000XAL（一般核质均分布的建议使用NP-40，核内分布的建议使用High Salt ，只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer），加入1ml Buffer (106-107个细胞)，4℃,30min（在功能旋转仪上旋转裂解）。 4 12000rpm，15min，离心取上清（若上清仍浑浊，可重复离心1-2次）50ul上清作为 Input，其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug（可根据抗体效价酌情增减），4℃,旋转2-4h，

加抗体时要计算使用相同抗体的样品数，取（N+1~2）*1ug，用小量裂解buffer

稀释，再均分到各样品中，以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间，准备Protein G（一个反应20ul纯beads，如果beads原管中液体和beads体积比是1:1，一个样品取总体积40ul，多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物）

反应沉淀池、重力无阀滤池构造及原理

一、穿孔旋流反应池、斜管沉淀池

反应沉淀池是由穿孔旋流反应池、斜管沉淀池合建而成。 穿孔旋流反应池分正方形倒角六室，各室之间的隔壁上沿池壁开孔，孔口上下交错布置。水流沿池壁切线方向进入后形成旋流。第一格孔口较小，流速最大，而后孔口尺寸逐渐增大，流速逐格减小。 斜管沉淀池是把与水平面成一定角度（一般为600左右）的管状组件（断面矩形或六角形等）置于沉淀池构成，水流从下向上，颗粒沉于斜管底部，当颗粒累计到一定程度时，便自动滑下，清水在池顶用穿孔集水槽收集，污泥在池底用穿孔排污管收集排出沉淀池。 二、重力式无阀滤池

重力无阀滤池的工作原理是利用水力学原理，通过进出水的压差自动控制虹吸产生和破坏，实现自动运行的滤池。从沉淀池来的水，经进水分配槽，进水管，及配水挡板的消能和分散作用后，比较均匀地分布在滤层上部，水流通过滤料层、承托层与配水系统进入底部空间，然后经连通渠上升到冲洗水箱。随着过滤的进行，冲洗水箱中的水位逐渐上升(虹吸上升管中水位也相应上升)。当水位达到出水管喇叭口的上缘时，便从喇叭口溢流到清水池。

反冲洗的工作原理：当滤室沙层表面的淤泥和沉积物较厚，影响水流通过时，迫使滤室水位通过虹吸下降管逐步

IP地址漂移的实现与原理

丁一君

当前备份软件比较流行,其中用到的关键技术是IP 地址漂移， 实际上IP地址漂移技术是利用共享的“虚拟”IP地址，当本地进行节点切换与路由切换，使另一端的发送和收方端没有感觉到本地接的节点地址有变化，保证了通信的连续性，起到断点保护的功效。 用实例来描述可能更容易些：假设最简单的主从方式、单网卡的情况下，双机系统要占用3个网络地址。主机一地址为200.10.20.1,主机二的地址为200.10.20.2, 同时，还应该有一个“虚拟”IP地址，该地址为工作IP地址，用来做“漂移”，即工作地址为200.10.20.3。 在分配IP地址时，要分清工作IP地址和主机自有地址。正常情况下，工作主机的自有地址是被工作地址取代的（若主机一在工作，主机一的地址由200.10.10.1变为200.10.10.3）。在发生主机切换的情况下，主机一的地址恢复为200.10.10.1，而主机二的地址会由200.10.10.2变为200.10.10.3，这就是我们所说的地址漂移。

采用地址漂移技术, 利用虚拟IP地址来绑定主服务器，可有效解决不能利用组播的情况下多台服务器集群之间的信息交互问题。此方法具有一定的代表性，

沉淀溶解平衡专题训练

1．下列对沉淀溶解平衡的描述正确的是( ) A．反应开始时，溶液中各离子浓度相等。

B．沉淀溶解平衡达到平衡时，沉淀的速率和溶解的速率相等

C．沉淀溶解平衡达到平衡时，溶液中溶质的离子浓度相等，且保持不变。 D．沉淀溶解平衡达到平衡时，如果再加入难溶性的该沉淀物，将促进溶解。 2．下列物质的溶解度随温度的升高而减少的是( )

A．KNO3 B．Ca(OH)2 C．BaSO4 D．CO2 3．下列说法正确的是( )

A．往NaCl饱和溶液中滴加浓盐酸，NaCl的溶解度减小 B．升高温度，物质的溶解度都会增大 C．在饱和NaCl溶液中存在溶解平衡 D．在任何溶液中都存在溶解平衡 4．在饱和的CaSO4溶液中下列哪种物质不存在( )

＋－＋

A．Ca2 B．SO42 C．H D．H2SO4 5．向含有AgCl(s)的饱和AgCl溶液中加水，下列叙述正确的是( )

A．AgCl的溶解度增大

移动IP原理和三角路由

摘要：为了满足移动节点在移动中保持其连接性，移动IP技术随之产生。这里主要介绍移动IP的概况极其关键技术及其工作原理。根据现行状况分析移动IP技术中存在的“三角路由”问题及其基本解决方案,还提出了现有移动IP存在的问题以及今后可能的研究方向。

关键词：移动IP; 移动节点; 外地代理; 归属代理; 路由优化

前言： 近几年,随着通信技术和计算机技术的高速发展,越来越多的高性能通信设施日益成为人们生活中的必需品。这些高性能设施的优势在于任何时间、任何地点均可以成功接入因特网,因此,如何保证用户在进行网际移动的同时保持IP网络的完整性、保持用户通信的连续性是目前研究的一个重要课题。因此移动IP(Mobile IP，MIP)技术的出现正迎合了这种需求， 它能够在不间断当前通信状态的情况下无缝地漫游于Internet。移动IP 是一种在全球因特网上提供移动功能的技术，它提供了一种IP 路由机制, 使移动节点可以以一个永久的IP地址连接到任何链路上。

一、移动IP的体系结构

移动IP技术是移动节点(计算机/服务器/网段等)以固定的网络IP地址，实现跨越不同网段的漫游功能，并保证了基于

linux中的IP负载均衡实现原理

文章介绍了IP负载均衡技术在LVS中的使用。从集群的层次结构出发，深入对负载均衡的解析。从而，让您学透这方面的知识。

LVS的IP负载均衡技术可以实现高性能，大吞吐量的工作。那么这些性能都引来很多的使用者，在这里面我们先来介绍一下LVS的集群概念，之后再对它的IP负载均衡进行解说。相信大家可以对这个系统有一个全方位的了解。

一般来说,LVS集群采用三层结构,其主要组成部分为:

A?负载调度器(load balancer),它是整个集群对外面的前端机,负责将客户的请求发送到一组服务器上执行,而客户认为服务是来自一个IP地址(我们可称之为虚拟IP地址)上的?

B?服务器池(server pool),是一组真正执行客户请求的服务器,执行的服务有WEB?MAIL?FTP和DNS等?

C?共享存储(shared storage),它为服务器池提供一个共享的存储区,这样很容易使得服务器池拥有相同的内容,提供相同的服务?

调度器是服务器集群系统的唯一入口点(Single Entry Point),它可以采用IP负载均衡技术?基于内容请求分发技术或者两者相结合?在IP负载均衡技术中,需要服务器池拥有相同的内容提供相同的服务

第9讲

免疫学基本原理

天花患儿从1-7天的病症图

天花由天花病毒引 起的急性传染病。 天花病毒繁殖速度 快、传染性强、死 亡率高。潜伏期717天(平均约12天) 。

2-3天内

2周后

3-4周结痂处剥离脱 落。有高烧、 疲劳、头痛与 背痛的症状。 在感染天花病 毒后的15至 20天内致死 率高达30% 。

在脸、手臂与 腿上出现浓密 的圆形疹子， 而后遍布全身 。病变时疹子 转变成脓疱；

开始变干；

1980年

1979年10月26日1796年

爱得华 琴纳发 明了牛痘疫苗 从而保护人不 得天花。

世界卫生组织 宣布天花病毒 已被消灭。

全球消灭天花 证实委员会要 求各国停止预 防天花的免疫 种痘。

基本内容一、关于免疫 二、非特异性免疫和特异性免疫 三、免疫系统的功能和组成 四、抗原 五、抗体 六、抗原抗体反应 七、免疫检测的应用 八、课堂小结 九、作业

一、关于免疫 免疫(Immunity):是人和动物机体识别自身(self)和非自身(nonself), 并清除非自身的大分子物质，从而保持机 体内、外环境平衡的一种生理学反应。

一、关于免疫免疫的基本特性 1 识别自身和非自身 这是免疫应答的基础–免疫细胞膜表面的抗原受体+外来抗原的表位 –识别很精细，包括异种之

习题 6（沉淀平衡一）

1.解释下列现象。

a. CaF2在 pH＝3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大；

b. Ag2CrO4在0.0010 mol·L1AgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L1 K2CrO4溶液中

--

的溶解度小；（参考答案） 答：

a. 这是由于酸效应的影响。因为

,随着[H]的增大，

+

也增大，

也随之增大，即溶解度变大。所以，CaF2在 pH＝3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大。

b. Ag2CrO4的pKsp=11.71

Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度s1:

-1

-1

Ag2CrO4在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度s2:

-1

-1

所以， s1< s2，即Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度小。

2.某人计算M(OH)3沉淀在水中的溶解度时，不分析情况，即用公式Ksp==[ M3+][ OH]3计算，

-

已知Ksp=1×1032，求得溶解度为4.4×109 mol·L1。试问这种计算方法有无错误？为什么？

---

（参考答案） 答： 错误。

因为按此方法求得[OH-]=4×10 mol·L，即p