病原微生物实验设计方案

土壤中分离产生α-淀粉酶的菌种

一．实验目的

1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握微生物的鉴定方法。

3、对提取的土样进行微生物的分离、纯化培养，并进行简单的形态鉴定

二. 实验原理

α-淀粉酶是一种液化型淀粉酶，它的产生菌芽孢杆菌，广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中。

从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定。

1、采样：即采集含菌的样品

采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多，然后才可着手做各项具体工作。在土壤中几乎各种微生物都可以找到，因而土壤可说是微生物的大本营。在土壤中，数量最多的当推细菌，其次是放线菌，第三霉菌，酵母菌最少。除土壤以外，其他各类物体上都有相应的占优势生长的微生物。例如枯枝、烂叶、腐土和朽木中纤维素分解菌较多，厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多，果实、蜜饯表面酵母菌较多；蔬菜牛奶中乳酸菌较多，油田、炼油厂附近的土壤中石油分解菌较多等。 2、增殖培养（又称丰富培养）

增殖培养就是在所采集的土壤等含菌样品中加入某些物质，并创造一些有利于待分离微生物生长的其他条件，使能分

1．下述微生物除了哪种以外，均属于原核细胞型？ A病毒 B放线菌 C衣原体 D细菌 E支原体 2．真核细胞型微生物是：

A真菌 B细菌 C支原体 D立克次体 E 衣原体 3．细菌大小的测量单位是：

A厘米 B毫米 C微米 D毫微米 E微微米 4. 病毒大小的测量单位是：

A厘米 B毫米 C微米 D毫微米 E微微米

5. 关于细菌革兰染色操作步骤，下列哪项是错误的？

A 标本涂片固定 B 结晶紫初染 C 碘液媒染 D 盐酸酒精脱色 E 稀释复红复染 6.关于抗酸染色，下述哪项是错误的？

A 石碳酸复红染色 B 盐酸酒精脱色 C 碱性美兰染色 D 结核杆菌染成红色 E 非抗酸杆菌染成红色

7.关于血清学诊断方法，下述哪项错误？ A 伤寒—肥

几个病原病例

◆大肠埃希菌

4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。

思考题：

1.最可能的病原菌是什么？

2.针对该病例应做哪些微生物学检查？

提示：

4岁患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。

应及时进行常规微生物学检查并快速进行毒力和血清型等特征鉴定以确定防治措施。

◆志贺菌属

患者，男，23岁。急性腹痛2天，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38℃，血压正常，白细胞增高，未见阿米巴原虫。 思考题：

1.可初步诊断为哪种疾病？

2.采用哪种方法能进行快速诊断？

提示：

急性腹痛2天，每天10次左右脓血便，有明显里急后重感，肠鸣音亢进、低热等临床表现，初步诊断为急性细菌性痢疾

急性细菌性痢疾起病急，病情进展快，进行快速诊断显得特别重要。此案例可根据各医院开展的以上四种快速诊断方法进行快速诊断。

◆沙门菌属

患者，女，25岁。发热6天入院，食欲不振、乏力、腹胀。查体：

病原生物学基础复习题

一、选择题

1．选出一组正确的组合 D

A、Pasteur—牛痘、Ehrlich—侧链学说、Burnet—克隆选择学说

B、Jenner—免疫网络学说、Burnet—克隆选择学说、von Behring—抗血清治疗 C、von Behring—抗血清治疗、Ehrlich—侧链学说、Jerne—克隆选择学说

D、Doherty—MHC限制作用、Burnet—克隆选择学说、von Behring—抗血清治疗

E、Jenner—牛痘、Burnet—免疫网络学说、Jerne—克隆选择学说 2. 免疫监视功能是 D

A、抵抗病原微生物感染的能力 B、清除自身衰老细胞的能力 C、识别、排斥异物的能力 D、清除突变细胞的能力 E、调节免疫应答的能力

3. 关于免疫器官错误的是 D

A、脾脏是最大的外周枢免疫器官 B、T细胞和B细胞的前体细胞均来自于骨髓 C、黏膜相关淋巴组织是免疫组织 D、B细胞是在中枢免疫器官胸腺内分化成熟的 E、淋巴结是免疫应答发生的场所 4. 免疫学中的\非己物质\不包括 E

A、异种物质 B、同种异体物质 C、结构发生改变的

病原微生物风险评估报告

金黄色葡萄球菌的生物危害评估报告

一、金黄色葡萄球菌的传播与致病

金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，在空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道；上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。

一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。

而肠毒素形成条件包括：存放温度，在37℃内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉

病原微生物应急检测

柯昌文广东省疾病预防控制中心

一、病原微生物引起的传染病

我国传染病法规定的法定报告传染病分类：甲、乙、丙3类，从数量上共有39种，主要由病毒、细菌和寄生虫引起。

（一）甲类传染病主要鼠疫和霍乱。

（二）乙类传染病

（1）病毒引起的：传染性非典型肺炎、人感染高致病性禽流感、新型甲型H1N1流感、麻疹、病毒性肝炎、艾滋病、脊髓灰质炎、流行性出血热、狂犬病、流行性乙型脑炎。

（2）细菌引起的：伤寒和副伤寒、淋病、梅毒、百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、钩端螺旋体病、布鲁氏菌病、炭疽、肺结核、新生儿破伤风。

（3）寄生虫和细菌：疟疾、血吸虫病、细菌性和阿米巴性痢疾。

（三）丙类传染病

（1）病毒引起的主要有：流行性感冒、流行性腮腺炎、急性出血性结膜炎、手足口病、风疹及除霍乱、痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病。

（2）细菌和寄生虫引起的：麻风病、流行性和地方性斑疹伤寒、黑热病、丝虫病、包虫病。 （四）病原微生物引起的综合征 1、急性腹泻综合征

（1）细菌性腹泻：霍乱弧菌、志贺氏菌、大肠杆菌（肠毒素性和肠出血性）、沙门菌、空肠弯曲菌、小肠结肠耶尔森菌、艰难梭菌等。

（2）病毒性腹泻：轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、埃博拉和其

◆大肠埃希菌

4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。 思考题：

1.最可能的病原菌是什么？

2.针对该病例应做哪些微生物学检查？ 提示：

4岁患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。

应及时进行常规微生物学检查并快速进行毒力和血清型等特征鉴定以确定防治措施。

◆志贺菌属

患者，男，23岁。急性腹痛2天，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38℃，血压正常，白细胞增高，未见阿米巴原虫。 思考题：

1.可初步诊断为哪种疾病？

2.采用哪种方法能进行快速诊断？ 提示：

急性腹痛2天，每天10次左右脓血便，有明显里急后重感，肠鸣音亢进、低热等临床表现，初步诊断为急性细菌性痢疾

急性细菌性痢疾起病急，病情进展快，进行快速诊断显得特别重要。此案例可根据各医院开展的以上四种快速诊断方法进行快速诊断。

◆沙门菌属

患者，女

◆大肠埃希菌

4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。 思考题：

1.最可能的病原菌是什么？

2.针对该病例应做哪些微生物学检查？ 提示：

4岁患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合症。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。

应及时进行常规微生物学检查并快速进行毒力和血清型等特征鉴定以确定防治措施。

◆志贺菌属

患者，男，23岁。急性腹痛2天，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38℃，血压正常，白细胞增高，未见阿米巴原虫。 思考题：

1.可初步诊断为哪种疾病？

2.采用哪种方法能进行快速诊断？ 提示：

急性腹痛2天，每天10次左右脓血便，有明显里急后重感，肠鸣音亢进、低热等临床表现，初步诊断为急性细菌性痢疾

急性细菌性痢疾起病急，病情进展快，进行快速诊断显得特别重要。此案例可根据各医院开展的以上四种快速诊断方法进行快速诊断。

◆沙门菌属

患者，女

医学微生物学实验设计

姓名：姚淑宝 学号：2010514349 班级：10级临床十一班

病原性球菌的鉴定

姚淑宝

（石河子大学医学院 石河子 832000）

摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。

一、鉴定思想

本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。（具体见图1-1）

脓汁标本

直接镜检

分离纯化

葡萄球菌属 链球菌属 奈瑟菌属

血浆凝固酶试验 胆汁溶菌试验 麦芽糖发酵试验

阳阴阳阴阳阴性性性性性性 脑淋金白肺甲膜病黄色炎型 炎奈色葡链溶 奈瑟葡萄球血瑟菌萄球菌性 菌球菌链

实验八 主要病原菌的认识

一、 实验前要说明的几点问题

提前十分钟进入实验室，抄写板述。上课，点名入座。 二、板述内容： 1、目的要求

认识几上常见病原微生物的形态、染色特性和培养特性。 2、实验内容

1.1 观察大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、

魏氏梭菌的形态、染色特性、生化特性。

1.2 观察大肠、沙门、葡萄球菌、链球菌在普通培养基上的培养特性。 1.3 观察大肠杆菌、沙门氏菌在鉴别培养基上的培养特性。 1.4 观察大肠杆菌、链球菌在血液琼脂培养基上的溶血现象。 三、实验部分

1、链球菌

以马腺疫链球菌和兽疫链球菌为例。 （一） 马腺疫链球菌

形态特征：为革兰氏阳性链球菌，在脓汁病料标本中呈40—50个圆形，卵圆形或似三角形菌体组成的弯曲的长链，无芽胞与鞭毛。

培养特性：在血液琼脂上，培养18—24h后，形成灰白色、半透明、表面光滑的露滴状小菌落，呈β型溶血；在血清琼脂上能生成细小粘稠、湿润、透明、表面具有颗粒状构造的露滴状菌落。 (二)兽疫链球菌

形态特征：为革兰氏阳性链球菌。形态大致同其他链球菌，在脏器涂片标本中呈单个、成对或短链状（3-5个）存在。新分离菌株，特别是在鲜血或血清培养