乳酸脱氢酶测定是查什么

实验六 乳酸脱氢酶酶活力测定 及紫外吸收法测定蛋白质含量

目的要求

(1) 掌握LDH活性测定原理；

(2) 学习用比色法测定酶活性的方法。

实验原理

乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase简称LDH，EC.1.1.1.27, L－乳酸：NAD+氧化还原酶）广泛存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。

LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很多，其中紫外分光光度法更为

简单、快速。鉴于NADH, NAD+ 在340nm及260nm 处有各自的最大吸收峰，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值得改变，定量测定酶的含量。本实验测定LDH活力，基质液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下，加入一定量酶液，观察NADH在反应过程中340 nm 处光吸收减少值，减少越多，则LDH活力越高。其活力单位定义是：在25℃，pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中LDH单位。定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。

利用上述原理，改变不同第五则可测定相应脱氢酶反应过程中A340nm的改变，定量测定酶活力，如苹果酸脱氢

目的通过比较精浆及全精子中乳酸脱氢酶同工酶X(LDH—X)活性及其比值在生育男性与不育男性中的差异,探讨其在评价精液质量中的应用。方法以长链α-酮酸为底物,用全自动生化分析仪检测各实验组精浆及全精子中的LDH～X活性,并通过精子总数计算出精子LDH—X的活性、精浆／全精子中LDH—X的比值,进行统计学分析。结果不育A、B组精浆LDH—X活性大于生育组男性,精子LDH—X的活性

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现代中西医结合杂志 Mo en o r a o t rt rd i a C i s n s r d i 0 7D c 1 ( 5 d r u nl f ne a dT a io l hn e dWet n Me i n 2 0 e, 6 3 ) J I g e tn e a e ce

测定精浆和全精子中的乳酸脱氢酶同工酶 X活性及其比值在评价精液质量中的应用卢卫国周迎春何静朱辉超 ,,, ( .广州中医药大学第一附属医院，东广州 5 0 0; .广东省佛山市顺德区陈村医院，东佛山 5 8 1 ) 1广 14 5 2广 2 3 3[要]目的通过比较精浆及全精子中乳酸脱氢酶同工酶 x( D摘 L H—x)性及其比值在生育男性与不育男性活中的差

?类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶?类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性

乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA的克隆与表达

周文婷1，崔羽，王晓燕2，张永红，李世荣，李景鹏*

（东北农业大学生命科学与生物技术中心，哈尔滨 1500301；

哈尔滨医科大学附属第四医院检验科，哈尔滨 1500012）

摘 要： 类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用，由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物，利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1，ADH2和ADH3的酶活力分别为1.8± 0.3U/mg, 0.9±0.2U/mg和1.4±0.2U/mg。

关键词：乙醇脱氢酶（ADH）；基因克隆，原核表达；酶活力检测1

酒是重要的

?类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶?类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性

乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA的克隆与表达

周文婷1，崔羽，王晓燕2，张永红，李世荣，李景鹏*

（东北农业大学生命科学与生物技术中心，哈尔滨 1500301；

哈尔滨医科大学附属第四医院检验科，哈尔滨 1500012）

摘 要： 类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用，由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物，利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1，ADH2和ADH3的酶活力分别为1.8± 0.3U/mg, 0.9±0.2U/mg和1.4±0.2U/mg。

关键词：乙醇脱氢酶（ADH）；基因克隆，原核表达；酶活力检测1

酒是重要的

全血乳酸(LA)测定在临床中的应用

急诊科 苏中杰

【概况】：乳酸(Lactic acid, LA) 分子量90，是葡萄糖分子量的一半，是体内糖无氧代谢(糖酵解)的代谢终产物。主要由葡萄糖通过糖酵解途径在细胞浆中生成。乳酸主要产生于骨胳，肌肉，脑和红细胞，经肝脏代谢后由肾脏分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量是否不足。

乳酸水平的生理性增高可见于剧烈运动所致的肌肉痉挛等，但病理性增高则最常见于乳酸性酸中毒等多种临床疾病，而与呼吸性碱中毒也有关联。

A型乳酸酸中毒：严重组织缺氧时发生，任何原因引起的组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。 常见于休克、 严重哮喘、一氧化碳中毒、心衰、局域性血流灌注不足（组织缺氧）。

B型乳酸酸中毒：组织缺氧存在但并不明显。包括：

（1）.药物引起者有：酒精中毒、阿斯匹林、氰化物、双呱类（糖尿病药物）。 （2）.疾病引起者有：糖尿病、恶性肿瘤、肝脏疾病、甲基丙二酸血症(由于甲基丙二酸在血中的堆积，导致严重到可引起死亡的代谢性酸中毒和酮症的一类先天性代谢性疾病)、糖原酶缺陷(影响糖类合成的酶缺陷) 、脂肪酸氧化缺陷(影响脂肪酸

　花生学报　2006,35(1):1～7

　JournalofPeanutScience,Vol.35,No.1,2006

　文章编号:100224093(2006)0120001207

花生△12脂肪酸脱氢酶基因AhFAD2B在酿酒酵母中的表达及功能分析3

张洪涛1,2,单　雷2,全先庆1,2,3,毕玉平1,2,杨家森1,2,王秀丽2

(1.山东师范大学生命科学学院,山东济南250014,

山东济南250100;3.临沂师范学院,)

摘要:花生油中亚油酸(LAΔ9,12),脂肪酸脱氢酶(Δ12FAD)的功能,用RT-AhD2B的cDNA,连接到酵母表达载体p416中,并转,KFAD2B。气相色谱分析脂肪酸成分,结果表明该基因能在酵母K601中表达,并使菌株产生了两种新的脂肪酸即棕榈二烯酸(C16∶2Δ9,12)和亚油酸(C18∶2Δ9,12),含量分别占总脂肪酸的2.1%和9.2%,棕榈油酸(C16∶1Δ9)和油酸(C18∶1Δ9)含量与对照相比相应地下降,证明该基因编码的Δ12脂肪酸脱氢酶除能作用于C18∶1Δ9,还具有催化16碳的C16∶1Δ9底物在Δ12位脱氢生成C16∶2Δ9,12的功能,但在两种底物之间可能更偏爱C18∶1Δ9。

关键词:花生;亚

　花生学报　2006,35(1):1～7

　JournalofPeanutScience,Vol.35,No.1,2006

　文章编号:100224093(2006)0120001207

花生△12脂肪酸脱氢酶基因AhFAD2B在酿酒酵母中的表达及功能分析3

张洪涛1,2,单　雷2,全先庆1,2,3,毕玉平1,2,杨家森1,2,王秀丽2

(1.山东师范大学生命科学学院,山东济南250014,

山东济南250100;3.临沂师范学院,)

摘要:花生油中亚油酸(LAΔ9,12),脂肪酸脱氢酶(Δ12FAD)的功能,用RT-AhD2B的cDNA,连接到酵母表达载体p416中,并转,KFAD2B。气相色谱分析脂肪酸成分,结果表明该基因能在酵母K601中表达,并使菌株产生了两种新的脂肪酸即棕榈二烯酸(C16∶2Δ9,12)和亚油酸(C18∶2Δ9,12),含量分别占总脂肪酸的2.1%和9.2%,棕榈油酸(C16∶1Δ9)和油酸(C18∶1Δ9)含量与对照相比相应地下降,证明该基因编码的Δ12脂肪酸脱氢酶除能作用于C18∶1Δ9,还具有催化16碳的C16∶1Δ9底物在Δ12位脱氢生成C16∶2Δ9,12的功能,但在两种底物之间可能更偏爱C18∶1Δ9。

关键词:花生;亚

一、过氧化物酶（POD）活性的测定

POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。 测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。

△470 ×VT

POD活性=

0.01×t×Vs×W

式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；

VT ----提取酶液的总体积（ml） t----反应的时间（min）

Vs ----测定时取用酶液体积（ml） W----样品鲜重（g）

二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定

多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。

酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液

实验26 过氧化氢酶活力的测定（必修）

[目的与原理]

掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法，并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。

血清中的过氧化氢酶（CAT）分解H2O2的反应，可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，即可计算出CAT的活力，CAT活力单位定义为：每1分钟分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位（U）。 [试剂与器材] 试剂：

1、磷酸盐缓冲液（67mmol / l，pH=7.4）：取Na2HP04 7.60g，KH2P041.82g，溶于1L蒸馏水中，调pH至7.4。

2、基质液（65μmol/ l, H2O2）：取30% H2O2 3.69 ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。 3、钼酸铵：称取［(NH4)6Mo7O24］20.2g溶于500ml蒸馏水中。 器材：

721分光光度计 , 0.5cm比色杯，恒温水箱（37℃±0.5℃），试管 16mm×100mm，移液管，吸耳球，可调微量进样器。 [实验步骤]

1、样品测定：基质液置于37℃水浴 5 min，然后按下列步骤操作 试剂 基质液 钼酸铵 缓冲液 血清

对照管 1.0

准确称取天山云杉种子0.1 g，先加入 1 ml 预冷的50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含1 mmol/ L EDTA)，研磨成匀浆，然后用 4.5 ml 分两次冲洗研钵至试管中，4 ℃，10000 r/min 离心 20 min，上清液即为酶提取液，4 ℃保存用于ROS系统酶活性分析。 3 酶活性的测定

3.1 过氧化物酶 (POD，EC 1.11.1.7) 活性的测定。

按照 Chance 和 Maehly[6]的方法，并作如下修改:反应混合液为50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含 0.1 mmol/ L EDTA) 2.9 mL，2 % H2O2 1.0 mL，50 mmol/ L 愈创木酚1.0 mL。测定时，反应混合液先在 25 ℃ 水浴中预热，立即加入0.1 mL酶液以启动反应，以缓冲液调零，测定OD470值，每隔 30 s读数一次。取 0 — 60 s 时间段，即 1 min 反应时间来计算酶活性。以每分钟OD470增加0.01的酶量为一个酶活单位，U·g-1。

计算公式: POD活性 = ΔA470 × Vt × (0.01× t × FW × V1) -1 注: ΔA470:反应时间内