氨基酸纸色谱实验原理

根据具体仪器编写的氨基酸分析原理和色谱条件。

分析原理和色谱条件

一、 氨基酸分析的须知：

（一） 样品要求：样品应有代表性，固体样品必须过60目筛；液体样品需有一定的流动性；

办固体状的样品要保证能在称量纸上不流动。对不难采集并需要我们处理的样品，常规样品一般固体样品5克左右，液体样品15ml左右；对难以收集的样品（如：酶、肽等）液体样蛋白含量应大于300μg/ml，体积不少于4ml；固体重量应不少于500μg。

（二） 自己处理样品的同学和老师，应根据自己的样品状态，严格按照本室要求样品的处

理方法处理样品。并讲处理好的样品在星期二下午3点前送到测试中心氨基酸分析室，处理好的样品要同时送两份（两个盛有蒸干样品的25ml小烧杯），并提供样品的蛋白质含量、称样量、定容体积、加0.02NHCl体积等有关数据。（样品处理方法见本附件）。

（三） 因氨基酸分析需要柱后（或柱前）衍生，分析时间长，所以对氨基酸分析的上机浓

度要求严格。请各位老师和同学无论是自己处理样品还是需要氨基酸分析室处理样品都应准确知道自己所测样品的蛋白含量（或氨基态氮含量）。如果需要本实验室处理样品时，提供的蛋白质含量的误差应控制±5%。如20%的蛋白含量，提供的数据应为（18-22

氨基酸的离子交换柱色谱分离

【实验目的】

1. 2. 3.

掌握离子交换树脂分离氨基酸的基本原理； 掌握离子交换柱层析法的基本操作；

掌握氨基酸和茚三酮显色反应机理及洗脱曲线的绘制。

【实验原理】

1.

离子交换层析原理

离子交换层析是一种用离子交换树脂做支持剂的层析法.离子交换树脂是具有酸性或碱性基团的人工合成聚苯乙烯和苯二乙烯等不溶性高分子化合物.树脂一般都制成球形的颗粒.阳离子交换树脂含有的酸性基团如磺酸基(一S03H),磷酸基(一P03H),亚磷酸基(一PO2H),羧基(一COOH),酚羟基(一OH)等,可解离出H离子,当溶液中含有其他阳离子时,例如在酸性环境中的氨基酸阳离子,它们可以和H离子发生交换而\结合\在树脂上

本实验采用磺酸型阳子交换树脂（732型）分离酸性氨基酸（天冬氨酸Asp pI=2.97）和碱性氨基酸(赖氨酸Lys pI=9.74)的混合液。在pH5.3条件下，由于pH低于Lys的pI值，Lys可解离成阳离子，吸附在树脂上；又由于pH高于Asp的pI值，则Asp可解离为阴离子，不能被树脂吸附而直接流出色谱柱。在pH12条件下，因pH高于Lys的pI值，Lys又解离为阴离子从树脂上被交换下来，这样通过改变洗脱液的pH值

蛋白质的酶促降解及氨基酸代谢

一.选择题

1．生物体内大多数氨基酸脱去氨基生成α-酮酸是通过下面作用完成的。( ) A.氧化脱氨基 B.还原脱氨基 C.联合脱氨基 D.转氨基 2．下列氨基酸中( )可以通过转氨作用生成α－酮戊二酸。 A.Glu B.Ala C.Asp D.Ser 3．转氨酶的辅酶是( )

A.TPP B.磷酸吡哆醛 C.生物素 D.核黄素 4．以下对L－谷氨酸脱氢酶的描述( )是错误的。 A.它催化的是氧化脱氨反应 B.它的辅酶是NAD或NADP

C.它和相应的转氨酶共同催化联合脱氨基作用 D.它在生物体内活力不强

5．鸟氨酸循环中，尿素生成的氨基来源有( )

A.鸟氨酸 B.精氨酸 C.天冬氨酸 D.瓜氨酸 6．磷酸吡哆醛可参与下面氨基酸的( )反应？

A.脱羧反应 B.消旋反应 C.氧化

蛋白质分解代谢

A型题：

1．生物体内氨基酸脱氨基的主要方式为： A．氧化脱氨基

B．还原脱氨基 C．直接脱氨基 D．转氨基 E．联合脱氨基

2．人体内氨的最主要代谢去路为： A．合成非必需氨基酸 B．合成必需氨基酸 C．合成NH4+随尿排出

D．合成尿素随尿排出 E．合成嘌呤、嘧啶、核苷酸等

3．转氨酶的辅酶组分含有：

A．泛酸 B．吡哆醛 C．尼克酸 D．核黄素 E．硫胺素

4．可经脱氨基作用直接生成α-酮戊二酸的氨基酸是：

A

非极性R基

Glycine Alanine Gly(G)

Ala(A)

Leucine Leu(L)

Methionine Met(M)

极性不带电荷R基

Serine Threonine Ser（S)

Thr(T)

Proline Asparagine Pro(P)

Asn(N)

Valine Val(V)

Isoleucine Ile(I)

Cysteine Cys(C)

Glutamine Gln(Q)

芳香R基

Phenylalanine Tyrosine Phe(F) Tyr(Y)

Tryptophan Trp(W)

带正电荷R基

Lysine

Arginine Lys (K)

Arg (R)

带负电荷R基

Histidine His (H)

Aspartic acid Asp (D)

Glutamic acid Glu (E)

4.1 光度分析法[5] [6]

β-氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸的条件下可以生成蓝紫色物质[7]，其颜色深浅主要与β-氨基丙酸的浓度有关。因此可利用此显色反应采用比色法定量测量β-氨基丙酸。我在实验中发现很多因素如浓度、pH值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大的影响。如忽视这些因素会使实验产生很大的误差。就此显色反应的最佳条件我做了初步的探究。 4.1.1试剂的配制：

缓冲液的配制：配制pH= 6.00的NaAc－HAc缓冲溶液 β-氨基丙酸标准溶液的配制：

用电子天平准确称取1.020 gβ-氨基丙酸(生化纯)，溶于250ml pH=6.00缓冲溶液中，得到C = 4.080 g/L标准溶液。

茚三酮试剂的配制：称取0.5g茚三酮溶于100ml蒸馏水中，得到5g/L的茚三酮水溶液。

4.1.2标准曲线的确定

分别准确移取0.30ml、0.40ml、0.50ml、0.60ml、0.70ml、0.80ml、0.90ml、1.00ml标准液于8个比色管中，用pH=6.00的缓冲溶液稀释到5.00ml再加入1ml茚三酮水溶液充分摇匀，将其放在沸水浴中加热10min。冷却到室温，用7230型分光光度计在569nm下测其吸光度。以吸光

蛋白质分解代谢

A型题：

1．生物体内氨基酸脱氨基的主要方式为： A．氧化脱氨基 B．还原脱氨基 C．直接脱氨基 D．转氨基 E．联合脱氨基

2．人体内氨的最主要代谢去路为： A．合成非必需氨基酸 B．合成必需氨基酸

+

C．合成NH4随尿排出 D．合成尿素随尿排出 E．合成嘌呤、嘧啶、核苷酸等

3．转氨酶的辅酶组分含有：

A．泛酸 B．吡哆醛 C．尼克酸 D．核黄素 E．硫胺素

4．可经脱氨基作用直接生成α-酮戊二酸的氨基酸是： A．谷氨酸

蛋白质分解代谢

A型题：

1．生物体内氨基酸脱氨基的主要方式为： A．氧化脱氨基

B．还原脱氨基 C．直接脱氨基 D．转氨基 E．联合脱氨基

2．人体内氨的最主要代谢去路为： A．合成非必需氨基酸 B．合成必需氨基酸 C．合成NH4+随尿排出

D．合成尿素随尿排出 E．合成嘌呤、嘧啶、核苷酸等

3．转氨酶的辅酶组分含有：

A．泛酸 B．吡哆醛 C．尼克酸 D．核黄素 E．硫胺素

4．可经脱氨基作用直接生成α-酮戊二酸的氨基酸是：

A

家禽营养

家禽理想蛋白质氨基酸模式

不同饲料蛋白质的营养价值变化很大，要使家禽有效地利用饲料，必须按照其营养生理需要供给蛋白质。国内外已有不少关于家禽的氨基酸模式，但各个氨基酸模式之间有很大的差异。本文综述了家禽理想蛋白质氨基酸模式研究方法和应用。

蛋白质是家禽日粮中最主要的营养物质之一，人们对家禽蛋白质、氨基酸需要的认识已经从经典的粗蛋白质和总氨基酸需要向可利用氨基酸需要、小肽营养及理想蛋白模式方向发展。

1 理想蛋白质及氨基酸模式

理想蛋白质体系完全是按照动物的维持和生产需要提供适量的各种必需氨基酸。尽管不同家禽对单个氨基酸绝对需要量的差异较大，但就某一阶段而言，各种氨基酸需要量相对于某一氨基酸（赖氨酸）的比例具有一定规律性。人们对理想氨基酸模式（ＩＡＡＰ）的研究是基于如下假设：对家禽而言，其ＩＡＡＰ相对恒定，受品种、性别、年龄等因素的 影响很小；随家禽的生长，改变的只是各种ＡＡ的绝对需要量，而相互比例基本保持不变。这种假设基本上是成立的。尹清强等（１９９５）对２３周龄罗曼蛋鸡的试验研究表明，试验前、后鸡活体组织的ＡＡ组成及模式几乎没有变化（见表１），这是理想蛋白质的最大优点。Baker（1993）认为，理想氨基酸模式与氨基酸需要量不同，它不受

实验一 纸层析法分离氨基酸

一、实验目的

1．掌握纸层析的基本技术

2．学习用纸层析法分离、鉴定氨基酸

二、实验原理

纸层析是以滤纸作为支持物的分配层析法：利用不同物质在同一推动剂中具有不同的分配系数、经层析而达到分离的目的。在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数，若以K表示分配系数：

层析溶剂(亦称展层剂或推动剂)是选用特定的有机溶剂和水组成的。滤纸纤维素与水有较强的亲和力(葡萄糖基的-OH基能与H2O通过氢键相互作用)，能吸附很多水分(可达22%滤纸重，其中约有6%的水与纤维素结合成复合物)，这部分被吸附的水因扩散作用降低而形成固定相。反之，展层剂中的有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可在滤纸的毛细管中自由流动而形成流动相。层析时，点有样品的滤纸一端浸入展层剂中，有机溶剂连续不断地通过点有样品的原点处，使其的溶质依据自身的分配系数在这两相间不断进行分配，即随着有机溶剂不断向前移动，溶质被携带到新的无溶质区并继续在两相间发生可逆的重新分配，结果使溶质离开原点不断向前移动。由于溶质中各组分的分配系数不同，导致前行中出现移动速率差异，因而通过一定时间的层析，样品中的不同组分即可实现分离。 层析中某物质的移动速率以Rf值表示