微生物细胞氧化葡萄糖获得的能量

目录

A、验证方案 1.概述 2.适用范围 3.验证目的

4.验证小组及职责分工 4.1 验证小组 4.2 职责分工 5.验证内容

6.漏项与偏差及采取的纠偏措施. 7.验证结论 8.验证方案批准 B、验证报告 1.概述 2.适用范围 3.验证目的

4.验证小组及职责分工 4.1 验证小组 4.2 职责分工 5.确证内容

6.漏项与偏差及采取的纠偏措施. 7.验证结论 8.最终批准 9. 再验证周期

1 概述

由于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性、重现性进行验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。

2 适用范围

适用于进厂的原辅料葡萄糖微生物限度检查——平皿法的验证。 3 验证目的

建立葡萄糖微生物限度分析方法，包括细菌数、霉菌数及酵母菌数的检查以及控制菌的检查，并对分析方法进行验证，以证明所采用的方法适合于葡萄糖微生物限度的检查，为日常的检测工作提供依据。

4 验证小组及职责分工 成 员 组 长 职 责 负责验证期间各部门的协调及整个验证过程的具体实施。 负责验

微生物学

微生物 (microorganism, microbe) 一词，是对所有形体微小、单细胞或个体结构较为简单的多细胞，甚至无细胞结构的低等生物的总称，或简单地说是对细小的、人们肉眼看不见的、只有借助于显微镜才能看见的生物的总称。但近年来发现有的细菌是肉眼可见的。

微生物特点：个体微小、结构简单、繁殖迅速、分布广泛、种类繁多、易变异 微生物的分离、纯化及培养技术

分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。

常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 平板划线法 稀释涂布平板法 ：

1、倒平板： 牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。

2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中，以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5

两个糖分子以а糖苷键缩合而成的双糖。是饴糖的主要成分。由含淀粉酶的麦芽作用于淀粉而制得。用作营养剂，也供配制培养基用。 从化学观点说：麦芽糖（Maltose，or Malt Sugar）是一个化学名词，属双糖(二糖）类。它是白色针状结晶。而常见的麦芽糖是没有结晶，而且在烹调时由于加入了蔗糖，令白色的麦芽糖亦转至为金黄色，增加了它的色香味。麦芽糖的化学式是：C12H22O11

物理性质: 白色晶体, 易溶于水,有甜味(不及蔗糖). (与蔗糖同分异构)

化学性质:（1）有还原性: 能发生银镜反应,是还原性糖.（2）水解反应: 产物为2分子葡萄糖

麦芽糖分子结构中有醛基，是具有还原性是一种还原糖。因此可以与银氨溶液发生银镜反应，也可以与新制碱性氢氧化铜反应生成砖红色沉淀。可以在一定条件下水解，生成两分子葡萄糖 .

二。无色或白色晶体，粗制者呈稠厚糖浆状。一分子水的结晶麦芽糖102～103℃熔融并分解。易溶于水，微溶于乙醇。还原性二糖，有醛基反应，能发生银镜反应，也能与班氏试剂（用硫酸铜、碳酸钠或苛性钠、柠檬酸钠等溶液配制）共热生成砖红色氧化亚铜沉淀。能使溴水褪色，被氧化成麦芽糖酸。在稀酸加热或α-葡萄糖苷酶作用下水解成2分子葡

1 DNS

DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。

2 试剂制备

将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。

3 标准曲线

分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。

4 样品测定

样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2

葡萄糖氧化酶 在食品加工中的应用

1.葡萄糖氧化酶EC1.1.3.4 葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,EC1.1.3.4, 简称GOD),最先于1928年在黑曲霉和灰绿青霉中 发现。 最适温度：30~50℃,最适pH :5.6~6.5。 Ag+、Hg+、NaHSO3对它有强烈的抑制作用， Na+、Ca 、Mg2+、zn 、Mn 对其具有不同程度 的激活作用 催化葡萄糖与氧反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢：

C6H12O6+O2 C6H12O7 +H2O2

2.反应机理

3.GOD在食品中的应用 葡萄糖氧化酶在食品工业上有广泛： ①除氧保鲜 ②去葡萄糖 适用于食品工业中许多的产品，例如啤酒、 果汁、油脂、奶制品、蛋黄酱、食品罐头 和饮料的除氧； 鱼、虾、蟹、肉等的保鲜； 蛋品加工、炸制食品的脱糖； 面食品的增筋等等。

3.GOD在食品中的应用四个方面： 一是去葡萄糖 二是脱氧杀菌 三是测定葡萄糖含量 四是其他应用

3.1去葡萄糖 葡萄糖氧化酶最重要的应用之一就是防止美拉德 反应。 蛋类制品脱糖：应用葡萄糖氧化酶进行脱糖，即 将适量的酶添加到蛋白液中，不断供给适量的氧 气，使葡萄糖完

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第九章

体液葡萄糖检验

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本章内容概要： 本章内容概要：第一节 概述 第二节 体液葡萄糖测定

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本章教学要求： 本章教学要求：

1、掌握血糖、糖化血红蛋白、糖化血清蛋白测定的推荐方法 掌握血糖、糖化血红蛋白、 血糖 及临床意义，口服葡萄糖耐量试验的程序和临床应用。 及临床意义，口服葡萄糖耐量试验的程序和临床应用。 2、熟悉糖尿病的实验室检测项目和诊断程序 熟悉糖尿病的实验室检测项目和诊断程序 3、了解血糖浓度的调节机制、糖代谢紊乱。。 了解血糖浓度的调节机制、糖代谢紊乱。。 血糖浓度的调节机制

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糖的生理功能(能量资源和结构材料) 糖的生理功能(能量资源和结构材料)1、氧化供能：分解代谢提供人体75%能量； 氧化供能：分解代谢提供人体75%能量； 75%能量 2、人体组成成分之一：糖占人体干重的2%; 人体组成成分之一：糖占人体干重的2%;合成糖原储存在肝脏与肌肉中； 合成糖原储存在肝脏与肌肉中； 形成糖蛋白和蛋白多糖(激素、 受体等)、糖脂( )、糖脂 形成糖蛋白和蛋白多糖(激素、酶、受体等)、糖脂(神经组织和细 胞膜重要组分); 胞膜重要组分); );非糖物 3、转变：其它糖及糖衍生物(核糖、脱氧核糖、氨基多糖);非糖物 转变：其它糖及糖

微生物细胞工程的应用

1.7 微生物细胞工程的应用1.7.1 通过原核微生物生产商品 1.7.2 现代生物农药 1.7.3 现代微生物肥料 1.7.4 生物净化与生物废料再生 1.7.5 微生物细胞固定技术

微生物细胞工程的应用

1.7.1 通过原核微生物生产商品将原核微生物改造成生产有用代谢产物的反应 将原核微生物改造成生产有用代谢产物的反应 器，生产许多重要的生物产品 细胞工程技术+基因工程技术， 细胞工程技术 基因工程技术，克隆生物产品 基因工程技术 的编码基因，在宿主细胞中进行表达。 的编码基因，在宿主细胞中进行表达。 降低成本，提高药效、 降低成本，提高药效、产量

微生物细胞工程的应用

技术策略目的基因的获得：基因组 文库， 目的基因的获得：基因组DNA文库，cDNA 文库 文库， 扩增， 文库，PCR扩增，化学合成法 扩增DNA/RNA提取，酶解，转化 提取，酶解， 提取 目的DNA的筛选：制作探针，从基因组 的筛选： 目的 的筛选 制作探针，从基因组DNA文 文 库或cDNA文库中筛选出目的 文库中筛选出目的DNA 库或 文库中筛选出目的探针制备：根据同源序列 纯化目的蛋白 纯化目的蛋白， 探针制备：根据同源序列/纯化目的蛋白，测定其氨

苯酚硫酸法绘制标准葡萄糖曲线

准备工作

1. 洗净称量瓶，烘干

2. 取适量葡萄糖（粉末状）至称量瓶中，烘干，至恒重（105℃） 3. 紫外可见风光光度计开启，预热20min。

测定

1. 精确称取无水葡萄糖0.5000g，至100ml容量瓶稀释定容至，取出溶液1ml于50ml容量

瓶，定容。

2. 50 ml容量瓶中分别取0ml、0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml，至试管，

每样需平行三次，分别加蒸馏水至2 ml、6%苯酚1 ml、浓硫酸5 ml，振荡，置于沸水浴中加热15min，取出后在流动自来水中迅速冷却。然后紫外可见分光光度计在490nm处测吸光值。

绘制标准曲线

以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制曲线，相关系数R平方值越接近1越好。 PS：

1. 其他样品多糖含量苯酚硫酸法测定，同如上所述的标准曲线测定方法，只需将不同量的

葡萄糖溶液改为“加入1 ml样品（多糖溶液）、1 ml蒸馏水、6%苯酚1 ml、浓硫酸5 ml”，其他操作不变。

2. 使用浓硫酸、苯酚注意安全。

多糖得率(%)=

采用硫酸-苯酚法[1]，将干燥的多糖溶于蒸馏水中，定容于100ml容量瓶中，用移

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第五章 微生物的营养

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本章内容第一节，微生物的化学组成和营养要求

第二节，微生物的营养类型

第三节，营养物质进入细胞的方式第四节，培养基

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第一节 微生物细胞的化学组成和营养要求一、微生物细胞的化学组成水(70%-90%) 微生物细胞 干物质 有机物 蛋白质、多糖、 脂、核酸、维生 素、有机酸等及 其降解产物 微生物、动物、植物之间存在“营养上的统一性” 无机物(盐)

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细胞化学元素组成：

主要元素：碳、氢、氧、氮、磷、硫 、钾、镁、钙、铁； 微量元素：锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。

这些化学元素都来自胞外环境。

微生物细胞利用这些化学元素物质制造其细胞物质和组 分，并进一步将它们组织成为细胞结构。

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营养：微生物在其生长过程中获取生命活动所需的能量和结构 物质的生理过程。

营养物质：外界环境可为细胞提供结构组分、能量、代谢调节物质 和良好生长环境的化学物质。

概念区分：营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是生物维持 和延续其生命形式的一种生理过程。

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二、微生物的营养要素及其生理功能微生物

玉米生产葡萄糖液的二次液化

年第!期

中学化学教学参考

总第腿期

玉米生产葡萄糖液的二次液化、课外动活陕西省卫生学校

何国试

一葡萄糖液的生产工艺以淀粉为原料用酶法生产葡萄糖液的一##加淀粉酶争# 一#&一竺般工艺是淀粉调浆二上二全止竺喷射‘ 、

、

提出在液化和糖化设备之间增加一个水解罐

,

,

进行二次液化

。

实践证明进行二次液化可以)

,

。

、

、

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一

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二二兰兰二二生竺竺上二争

加葡萄糖淀粉酶

一的水解程度或糖化程度糖化液中还原糖淀粉,

成品

。

一浓一值 一萄糖一表缩工业上用即葡值+示,

液化

,

,

大大缩短糖化时间并能提高糖化液的 (二二次液化的工艺及条件控制、

值

。

糖化

,

压滤

、

、,

脱色

()

水解罐是一个密闭的耐压不锈钢罐可以通入蒸气加压玉米粉浆在水解罐内的二次液,

,

全部以葡萄糖值计算占干物质的百分率玉米中含淀粉 !,一 ,蛋白质 .,

。

化首先要解决的是罐内蒸气压和保压时间,,

,

,

. .

,一,一

蒸气压高保压时间长虽有利于液化但液化后颜色变深会使一部分还原糖转化为有色物,

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,0

,

脂肪

/

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0

,纤维素,。

,以及少量无机盐等,

在用玉米为原料生,

质同时也增加后面脱色困难罐内蒸气压太小保压时间短玉米粉浆中的难溶性淀粉不能很好水解蛋白质不能很好变性凝固就会影响糖化时间和 ( )