HE染色切片厚度

我来一一解答你的疑问：

1.“做大鼠皮下HE染色后可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况吗？” 答：HE 染色，即苏木精 — 伊红染色法，苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大，H&E染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因此，H&E染色，尤其在400倍放大的情况下，可以明显看到一个个以蓝色为主的点状的炎症细胞（主要是中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），而其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，呈蓝色或深蓝色。

2. “通过HE染色观察我的材料是否对皮下组织产生炎症反应，那么HE的结果包括哪些呢？”

答：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积

石蜡切片制作

一、苏木精-伊红对染法

——paraffin section

一、器材及试剂： 1. 器材：

切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。

切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 2．试剂：

中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，中性树胶。 3. 材料：

鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。 二、实验原理：

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色

常规HE染色

石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色。所以，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡，经过乙醇洗后，再用水洗。即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。一般脱蜡至水的时间和步骤如下： HE染色脱蜡至水步骤 步骤顺序

1 2 3 4 5 6 7 8

冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要经过脱蜡至水步骤，水洗后直接用苏木精和伊红染色。

染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色（H.E）。特殊染色（special stains）和组织化学（免役组织化学）染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。

HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产品，因为这种树非常罕见，多数氧化苏木精是合成品。苏木精必须氧化成熟后才能使用。苏木精染液需要预先配制，放置几个月自然氧化成熟。或购买成熟过的商品苏木精，也可在苏木精液中加一些成熟剂。

苏木精本身对组织没有染色作用，需要“媒染剂”与组织连接，媒染剂是铁，铝，钨等由这类正离子金属提供。矾也

常规HE染色

石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色。所以，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡，经过乙醇洗后，再用水洗。即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。一般脱蜡至水的时间和步骤如下： HE染色脱蜡至水步骤 步骤顺序

1 2 3 4 5 6 7 8

冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要经过脱蜡至水步骤，水洗后直接用苏木精和伊红染色。

染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色（H.E）。特殊染色（special stains）和组织化学（免役组织化学）染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。

HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产品，因为这种树非常罕见，多数氧化苏木精是合成品。苏木精必须氧化成熟后才能使用。苏木精染液需要预先配制，放置几个月自然氧化成熟。或购买成熟过的商品苏木精，也可在苏木精液中加一些成熟剂。

苏木精本身对组织没有染色作用，需要“媒染剂”与组织连接，媒染剂是铁，铝，钨等由这类正离子金属提供。矾也

石蜡切片制作

一、苏木精-伊红对染法

——paraffin section

一、器材及试剂： 1. 器材：

切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。

切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 2．试剂：

中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，中性树胶。 3. 材料：

鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。 二、实验原理：

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色

病理科常规切片（HE切片）质量PDCA管理循环案例示范

病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。

目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。

数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1），对今年1-7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1%，优良率97.6%，总体达标。 表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准

优质标准

组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数

满分（分） 10

质量缺陷减分

组织稍不完整：减1～3分；不完整：减4～10分；未达到规定面数：减5分

切片薄(3～5μm)，厚薄均匀

冷冻切片

实验材料：固定好的鼠脑 试剂：30%蔗糖；包埋剂；1*PBS 用品与仪器：冷冻切片机；刀片；24孔板

实验步骤：（切片的地点在1楼和6楼，1楼的切片机在使用前需要预约）

1、将前一天放于4%PFA中固定的鼠脑样品取出放入30%蔗糖中进行固定。（鼠脑刚放入时会浮在液面上，放置过夜，待沉淀后可进行切片操作）

2、进行切片操作之前要进行一些准备工作，首先，在24孔板（每个鼠脑大概需要2个24孔板）每个孔中加入1ml PBS，用来舒展脑片。其次，具有自带荧光的鼠脑的切片需要使用包有锡纸的24孔板，防止其荧光淬灭

3、开切片机，将CT和OT温度都调节为-20℃，切片厚度设定为40μm。

4、用包埋剂包埋底座，凝固后将底座置于切片机相应位置上，调整好底座的位置，使之与刀片平行，转动切片转轮，将底座切平，注意不要让底座的厚度太大，根据切口的情况调整切片机使之运作良好。（注意切片的转轮要在每一次切片完成后锁定，防止切伤手指） 5、沿与冠状切平行的方向将鼠脑的小脑部分切除，将剩余的脑放置在底座上（注意鼠脑的中缝线要对准底座上的豁口），底座平行放置于-20℃环境下，可看到鼠脑由底座部分向上逐渐变白。

6、待鼠脑完全变白后，向鼠脑上添加包埋剂，等待鼠脑

◆学习目标：(Learning Aims) 1.会用本课所学四会单词和短语； seldom influence absent fail examination exactly take pride in be proud of general introduction 2.阅读理解故事，整体感受文章，并能根据课文问题正确 回答和判断对错。 3.听录音，能够正确朗读复述课文的中心内容。

看看谁在有限的时间内默写的又快又对！不常，很少 influence 影响 absent 缺席，不在 不及格，失败 fail 考试 examination 寄宿学校 boarding 亲自 in person 确切地 exactly 自豪.骄傲(名) pride 自豪的.骄傲的(形) proudseldom 为……感到自豪take pride in be proud of

为..骄傲 总的；普遍的 引起任何问题 决定做某事 建议做某事 乘坐11小时的火车 和5小时的汽车

generalcause any problems decide to do advise to do take an 11-hour train

and a15-hour bus ride

Where a

1. 体式显微镜下，用显微剪刀沿角膜缘剪下角膜，将眼杯置于固定液内（0.2M NaH2PO4

10ml + 0.2M Na2HPO4 40ml + 8%多聚甲醛 50ml），４℃固定过夜

2. 体式显微镜下，用显微剪剪除虹膜，并剪断晶体悬韧带，晶体自动游离出眼杯，尽量减

少对眼杯扰动，将眼杯置于30%蔗糖（sucrose）溶液内（0.1M PB配置 PH=7.4），４℃脱水过夜沉底

3. 将眼杯由30%蔗糖溶液取出，置于20%蔗糖溶液与OCT包埋剂（TFM? Tissue Freezing

Medium）2：1体积比例混合液中，室温浸泡摇动30min 4. 体式显微镜下，于平皿内用软纸采用虹吸方式吸干眼杯内外水份，尽量减少对眼杯扰动 5. 在模具（tissue-tek 4565）上标记样品情况，向模具内倒入20%蔗糖溶液与OCT包埋剂

2：1体积比例混合液，将眼杯开口向上置于液体上，先用显微镊子按压一侧眼球（下方），使液体缓慢浸满眼杯，而后将眼杯在琼脂糖翻转，杯口朝下置底，上方眼球标记点朝向模具标记位置并置中，并使鼻侧或颞侧眼球靠近模具壁，将模具置于钢板上，移至-80℃冰箱（保证眼杯在内不动），静置10min

6. 将模具置于冰冻切片机恒冷箱内1

抹灰的厚度

水泥砂浆抹灰厚度，按消耗量标准，一般外墙抹灰分三层，底层、中层、面层、三层总厚度在15--20MM，最厚不超25MM。一般底层5MM左右、中层5--12MM左右、面层2---5MM。 抹灰的厚度相关拓展：

一般抹灰是指采用砂浆对建筑物的面层进行罩面处理，其主要目的是对墙体表面进行找平处理并形成墙体表面的涂层。为确保抹灰粘贴牢固，避免开裂、脱落，通常采用分层施工的做法，其具体构造分为三层：粗底涂、中底涂、表涂。

（1）粗底涂：是墙体基层的表面处理，作用是与基层粘结和初步找平，基层的施工操作和材料选用对饰面影响很大。常用材料有石灰砂浆、水泥砂浆和混合砂浆。

①砖前面：砖墙由于是手工砌筑，一般平整度较差，必须采用水泥砂浆或混合砂浆进行粗底涂，亦称刮糙。

②混凝土墙面：混凝土墙面由于是用模版浇筑而成，所以表面较光滑，平整度比较高，所以在饰面前对墙体进行处理，使之达到必要的粗糙程度。处理方法有凿毛、甩浆、划纹、除油，或是用渗透性较好的界面剂涂刷一层。

③加气混凝土墙面:加气混凝土墙体表观密度小、空隙大、吸水性强，直接抹灰会使砂浆失水而无法与墙面有效的粘结。处理方法是先在墙面上涂刷一层108建筑胶水：水=1：4的溶液拌水泥涂刷墙面，封闭孔

洞，