原核启动子结构

真核启动子

RNA转主要用途 录本 启动子 描述 表达 备注 CMV 常规表达用 人类巨细胞病毒来mRNA 源的强哺乳动物表达启动子 组成型 可能包含一个增强子，在某些细胞中会沉默 EF1a

常规表达用

人延长因子1α来源

mRNA

的强哺乳动物表达启动子

组成型

表达水平十分稳定，与细胞类型无关

SV40 常规表达用 猿猴空泡病毒40来mRNA 源的哺乳动物表达启动子 组成型 可能包含一个增强子 PGK1 (人/小鼠)

常规表达用

磷酸甘油酸酯激酶

mRNA

基因来源的哺乳动物启动子

组成型

广泛表达,但可能因细胞类型而异。由于甲基化或脱乙酰作用，倾向于抵抗启动子下调。

Ubc 常规表达用 人类泛素C基因来mRNA 源的哺乳动物启动子 组成型 顾名思义，该启动子无处不在 human beta actin

常规表达用

β-肌动蛋白基因来

mRNA

源的哺乳动物启动子

组成型

无处不在，鸡的启动子常用与启动子杂交

CAG 常规表达用 mRNA 强杂交哺乳动物启动子 组成型 包含CMV的增强子，鸡的beta actin启动子和兔的beta-globin剪接受体 TRE

常规表达用

mRNA

四环素响应元件启动子

被四环素或

者类似

真核生物启动子有三类，分别由RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ进行转录。 类别Ⅰ（class Ⅰ）启动子：

只控制rRNA前体基因的转录，转录产物经切割和加工后生成各种成熟rRNA。 类别Ⅰ启动子由两部分保守序列组成：

核心启动子（core promoter）：位于转录起点附近，从-45至+20； 上游控制元件（upstream control element，UCE）：位于-180至-107；

RNA聚合酶Ⅰ对其转录需要2种因子参与：

UBF1：一条M为97000的多肽链，结合在上述两部分的富含GC区；

1个TBP，即TATA结合蛋白（TATA-binding protein，TBP）；

SL1：一个四聚体蛋白，含有 3个不同的转录辅助因子TAFⅠ；

在SL1因子介导下RNA聚合酶Ⅰ结合在转录起点上并开始转录。 类别Ⅱ（class Ⅱ）启动子：

类别Ⅱ启动子涉及众多编码蛋白质的基因表达的控制。 该类启动子包含4类控制元件：

基本启动子（basal promoter）：序列为中心在-25至-30左右的7 bp保守区，TATAAAA/T，

称为TATA框或Goldberg-Hogness 框。与RNA聚合酶的定位有关，DNA双链在此解开并决定转录的起点位置

真核生物启动子有三类，分别由RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ进行转录。 类别Ⅰ（class Ⅰ）启动子：

只控制rRNA前体基因的转录，转录产物经切割和加工后生成各种成熟rRNA。 类别Ⅰ启动子由两部分保守序列组成：

核心启动子（core promoter）：位于转录起点附近，从-45至+20； 上游控制元件（upstream control element，UCE）：位于-180至-107；

RNA聚合酶Ⅰ对其转录需要2种因子参与：

UBF1：一条M为97000的多肽链，结合在上述两部分的富含GC区；

1个TBP，即TATA结合蛋白（TATA-binding protein，TBP）；

SL1：一个四聚体蛋白，含有 3个不同的转录辅助因子TAFⅠ；

在SL1因子介导下RNA聚合酶Ⅰ结合在转录起点上并开始转录。 类别Ⅱ（class Ⅱ）启动子：

类别Ⅱ启动子涉及众多编码蛋白质的基因表达的控制。 该类启动子包含4类控制元件：

基本启动子（basal promoter）：序列为中心在-25至-30左右的7 bp保守区，TATAAAA/T，

称为TATA框或Goldberg-Hogness 框。与RNA聚合酶的定位有关，DNA双链在此解开并决定转录的起点位置

1、 UCSC

（1）网址：http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgNear

在Genome里选择物种，比如human，search里输入你的基因名PTEN，点击Go （2）出现新的页面，看到“Known Gene Names”下面的PTEN了吧，点它 （3）又回到了和（1）类似的页面，此时，点击sequence

（4）出现一个新的页面，选中promoter，同时可以输入数值修改具体的序列区域，比如Promoter including 2000 bases upstream and 100 downstream，即表示启动子-2000～＋100区域

（5）点击“get sequence”，出现页面中最上面的序列“>uc001kfb.1 (promoter 2000 100) PTEN - phosphatase and tensin homolog”就是你要的人PTEN启动子-2000～＋100区域的序列了

2、Ensembl

（1）网址：http://www.ensembl.org/index.html

在“Search Ensembl“标题下search后的下拉框中选中物种名homo sapiens（人），fo

青岛农业大学 毕 业 论 文（设计）

题 目: 葡萄逆境胁迫诱导启动子的克隆

及其表达载体的构建

姓 名: 刘丽雪 学 院: 生命科学学院 专 业： 生物技术 班 级： 2007级4班 学 号： 20072833 指导教师： 薛仁镐

2010年6月17日

目 录

中文摘要···························································································································1 Abstract······························································································································2

棉花SUPERMAN类锌指蛋白基因GZFP的启动子及功能分析

棉花学报CottonScience2011，23（6）：483~489

研究与进展

棉花SUPERMAN类锌指蛋白基因GZFP的

启动子及功能分析

杨郁文1，周建武2，张保龙1*，范晓慧1，任永哲1，陈天子1

（1.江苏省农业科学院农业生物技术研究所/江苏省农业生物学重点实验室,江苏南京210014；2.扬州大学生物科学与技术学院，江苏扬州225009）

摘要：GZFP是来源于陆地棉的一个SUPERMAN类锌指蛋白基因。为了进一步了解该基因功能，本研究通过染色体步移（Genomewalking）获得其启动子区域，并构建该片段与GUS连接的重组载体pBI-pGZFP-5::GUS，通过花浸染法转化拟南芥。转基因植株的GUS染色结果表明GUS基因主要在根部以及花器官表达，而叶片中的表达量很低，并且根部的表达量在整个生育期都很强。通过半定量RT-PCR分析不同诱导下GZFP基因的表达变化，发现ABA、干旱、盐胁迫诱导可以提高其表达量。构建GZFP过量表达载体并通过叶盘法转化烟草，烟草转化株的表型无明显变化，但是转化株中NtOPBP1和NtERD10的表达量较未转化株明显增强，而这两个基因都参与了植物的

原核诱导表达的标准操作程序（SOP） 一．目的：

使本实验室工作人员了解诱导表达的操作过程，并能实际动手进行原核诱导表达一系列实验。

二．适用范围：

本SOP适用于对新基因克隆的表达，并针对新基因产生的可溶性蛋白。

三．实验原理：

E.coli的乳糖操纵子含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个代谢物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。在没有乳糖存在时，lac操纵子处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子即可被诱导。在这个操纵子体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录

[Merck推荐]原核表达秘笈之宿主菌株选择指南

在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件,以获得最满意的表达效果。 事实上，在平时的实验中，最容易被忽视的就是宿主菌的选择——多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因——即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。

作为原核表达的宿主，对外源基因的表达会产生一定的影响，是勿庸置疑的。每一个宿主细胞都像一个微观的小工厂，按照细胞固有的程序完成“你给它们安排的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的，当出现问题时，我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？

知其然还要知其所以然。比如，菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21系列就是lon和ompT蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因，为T7表达系统而设计。

真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同

原核诱导表达的标准操作程序（SOP） 一．目的：

使本实验室工作人员了解诱导表达的操作过程，并能实际动手进行原核诱导表达一系列实验。

二．适用范围：

本SOP适用于对新基因克隆的表达，并针对新基因产生的可溶性蛋白。

三．实验原理：

E.coli的乳糖操纵子含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个代谢物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。在没有乳糖存在时，lac操纵子处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子即可被诱导。在这个操纵子体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)核心基因启动子(BCP)变异与e抗原(HBeAg)及病毒载量的关系。方法(1)研究对象为176例HBV慢性感染者(轻、中、重度慢性乙型病毒性肝炎,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌)。(2)研究方法：①采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对患者血清进行检测HBVBCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变。②采用PCR结合荧光探针检测

维普资讯

广西医学 2 0 0 6年 1 第 2 0月 8卷第 1 0期

19 43

●论

著

乙型肝炎病毒核心基因启动子变异与血清 HB A e g及病毒载量关系的探讨▲广西医科大学第一附属医院感染性疾病科 (南宁 502 )玉艳红 30 1黄力毅宣伟军※庞 辉#

[摘要]目的研究乙型肝炎病毒( B核心基因启动子( ) H V) I变异与 e P抗原( eg及病毒载量的关系。方法 ( ) BA ) 1研究对象为 1 6 I V慢性感染者(、重度慢性乙型病毒性肝炎，炎肝硬化， 7例 - t B轻中、肝慢性重型肝炎和原发性肝癌) 2研究方法：。( ) ①采用 P R微板核酸杂交结合 E IA检测显示技术，患者血清进行检测 H V C C LS对 B B P