不同碳源对黑曲霉产纤维素酶的影响

新疆农业大学

《酶与酶工程》

目:

名: 院: 级: 号: 绩 专题讨论综述

黑曲霉纤维素酶酶学性质的研究及其分离纯化

2013 年4月

题姓学 班学成

黑曲霉纤维素酶酶学性质的研究及其分离纯化

摘要：

从我院保藏菌株中，分离纯化出一株较纯的产酶相对较高的菌株。通过在单因素实验基础上进行正交实验，对其液态产酶的发酵条件进行研究，结果显示：氮源为1%的NH4NO3，无机盐为1%的NaCl,表面活性剂为0.05%的tween-80，接种量为3.6%，水量为1:1.5，pH6.0,发酵温度28℃，复合碳源为麸皮：酵母粉：蛋白胨=4:1:1，装料量为75g(250ml三

万方资料

第27卷第3期2005年6月江西农业大学学报

ActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensis

Vol.27,No.3June,2005

文章编号:1000-2286(2005)03-0466-03

黑曲霉LH2446产纤维素酶液体

发酵条件的研究

汪世华

1,2

,胡开辉,黄碧芳,余文英,彭利民

2223

　　(1.福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室,福建福州350002;2.福建农林大学生命科学院开放实验室,福建福州350002;3.武汉隆华生物股份有限公司技术中心,湖北武汉430000)

摘要:采用诱变后的黑曲霉LH2446液体发酵生产纤维素酶。确立了产酶最佳条件:5%稻草粉为碳源,1%的黄豆粉为氮源,培养基起始pH值为pH6.5,250mL三角瓶中装培养基75mL,培养时间为h,温度为30℃。在最适条件下产纤维素酶的最高产量为23600U/g。关键词:纤维素酶;液态发酵;产酶条件中图分类号:Q55　　文献标识码:A

StudiesonsforSubmergedFermentation

ofnigerLH2446toProduceCellulase

WANGShi-hua

2

1,2

,HUKai-hui

2

2

3

HU

第3 8卷第 5期 20 0 8年 1 O月

工

业

微

生

物

Vo 8 No 5 l3 . Oc .2 0 t 08

I d sra i o ilg n u ti M c b oo y l r

p值对绿色木霉 ( rco emavrd )纤维素酶的影响 H T i d r iie产 h耿冰，郭美锦，张嗣良，王永红，储炬，庄英萍 (东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，海 2 0 3 )华上 0 2 7

摘

要

采用微晶纤维素为唯一诱导性碳源，对绿色木霉 ( r￣ Ti c

vr e在摇瓶发酵过程中 id ) i

控制与不控制 p产纤维素酶进行比较。控制 p时胞外蛋白浓度为 07 gn比不控制 p时提 H H .2m/￣ H高4%; AE C 3 H)、 G、 B和 C H酶活为 1 .u/ L,2 .U/,.5 m 0 8 U/ L分别是不控制 p B 50 m 10 0 mL 17 U/ L,.5 m H

时的 2 1231. .、.、17和 17。在不同 p下测定纤维素酶液各酶活，明 p .倍 H表 H值显著影响纤维素酶各单酶酶活。在 p 2 7时， H .葡萄糖苷酶酶活仅为 p 4 8时酶活的 4 p回调试验结果表明葡萄糖 H .%;

纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究

第７期（总第１７８期）

农产品加工 学刊

Ｎｏ．７２００９年７月

ＡｃａｄｅｍｉｃＰｅｒｉｏｄｉｃａｌｏｆＦａｒｍＰｒｏｄｕｃｔｓＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ

Ｊｕｌ．

文章编号：１６７１—９６４６（２００９）０７－００１０－－０３

纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究

再吐尼古丽 库尔班ｔ，’叶

凯１，涂振东１，冯国郡１，傅

力２

（１．新疆农业科学院。新疆乌鲁木齐８３００９１；２．新疆农业大学食品学院，新疆乌鲁木齐８３００５２）

摘要：采用同态发酵法，进行了生产燃料乙醇的试验，同时尽量在相同条件下，研究了纤维素酶对甜高粱秸秆发酵

产酒率的影响。实验分２组。第１组为空白试验：酵母菌接种量为０．２％，发酵温度２８℃。第２组为对照试验：酵

母菌接种量为０．２％，发酵温度２８℃，纤维素酶０．８％，发酵时间为１１４

ｈ。结果表明，第１组折算。甜高粱茎秆发酵

产酒，体积分数为６ｌ％的乙醇得率为３．５倒，１００ｇ；第２组折算，体积分数为６１％的乙醇得率为６．５６ｇ，１００ｇ，比不加

纤维素酶的乙醇得率提高了３．０６％。

关键词：甜高粱秸秆；固态发酵；纤维素酶中图分类号：ＴＱ９２０．６

文献标志码：Ａ

ｄｏｉ：１０ ３９６９１ｊｉｓｓｎ １６７１—９６４６

目 录

实验一 产纤维素酶菌种的分离与初筛 实验二 产纤维素酶菌种的复筛与保藏 实验三 酶活测定与传代保藏

实验四 产纤维素酶菌种的紫外诱变育种 实验五 产纤维素酶菌种的产酶条件优化

实验六 产纤维素酶菌种的产酶条件优化的结果分析

实验一 产纤维素酶菌种的分离与初步鉴定

一、实验目的

1．了解产纤维素酶微生物分离的基本原理； 2．掌握产纤维素酶微生物分离的操作方法。

二、实验原理

自然界中存在大量的纤维素类物质，同时存在着很多能分解纤维素类物质的生物，小到

细菌、放线菌、真菌，大到一些食草类昆虫与动物。这些生物与绿色植物一起构成了这个世界的碳循环。在发酵堆肥中，存在着大量的，耐高温的纤维素分解菌株，但多半都为混合分解，菌种需要：

1. 内切型葡萄糖苷酶（endo-1,4-β-D-glucanase,EC3.3.1.4,简称EBG），也称Cx酶、CMC

酶、EG。这类酶作用于纤维素分子内部的非结晶区，随机识别并水解β-1,4-糖苷键，将长链纤维素分子截短，产生大量非还原性末端的小分子纤维素； 2. 外切型葡萄糖苷酶（exo-1,4-β-D-glucanase,EC3.2.1.91），也称C1酶、微晶纤维素酶、

纤维二糖水解酶（Cell

第3 8卷第 5期 20 0 8年 1 O月

工

业

微

生

物

Vo 8 No 5 l3 . Oc .2 0 t 08

I d sra i o ilg n u ti M c b oo y l r

p值对绿色木霉 ( rco emavrd )纤维素酶的影响 H T i d r iie产 h耿冰，郭美锦，张嗣良，王永红，储炬，庄英萍 (东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，海 2 0 3 )华上 0 2 7

摘

要

采用微晶纤维素为唯一诱导性碳源，对绿色木霉 ( r￣ Ti c

vr e在摇瓶发酵过程中 id ) i

控制与不控制 p产纤维素酶进行比较。控制 p时胞外蛋白浓度为 07 gn比不控制 p时提 H H .2m/￣ H高4%; AE C 3 H)、 G、 B和 C H酶活为 1 .u/ L,2 .U/,.5 m 0 8 U/ L分别是不控制 p B 50 m 10 0 mL 17 U/ L,.5 m H

时的 2 1231. .、.、17和 17。在不同 p下测定纤维素酶液各酶活，明 p .倍 H表 H值显著影响纤维素酶各单酶酶活。在 p 2 7时， H .葡萄糖苷酶酶活仅为 p 4 8时酶活的 4 p回调试验结果表明葡萄糖 H .%;

纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究

第７期（总第１７８期）

农产品加工 学刊

Ｎｏ．７２００９年７月

ＡｃａｄｅｍｉｃＰｅｒｉｏｄｉｃａｌｏｆＦａｒｍＰｒｏｄｕｃｔｓＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ

Ｊｕｌ．

文章编号：１６７１—９６４６（２００９）０７－００１０－－０３

纤维素酶对甜高梁秸秆发酵产酒率影响的研究

再吐尼古丽 库尔班ｔ，’叶

凯１，涂振东１，冯国郡１，傅

力２

（１．新疆农业科学院。新疆乌鲁木齐８３００９１；２．新疆农业大学食品学院，新疆乌鲁木齐８３００５２）

摘要：采用同态发酵法，进行了生产燃料乙醇的试验，同时尽量在相同条件下，研究了纤维素酶对甜高粱秸秆发酵

产酒率的影响。实验分２组。第１组为空白试验：酵母菌接种量为０．２％，发酵温度２８℃。第２组为对照试验：酵

母菌接种量为０．２％，发酵温度２８℃，纤维素酶０．８％，发酵时间为１１４

ｈ。结果表明，第１组折算。甜高粱茎秆发酵

产酒，体积分数为６ｌ％的乙醇得率为３．５倒，１００ｇ；第２组折算，体积分数为６１％的乙醇得率为６．５６ｇ，１００ｇ，比不加

纤维素酶的乙醇得率提高了３．０６％。

关键词：甜高粱秸秆；固态发酵；纤维素酶中图分类号：ＴＱ９２０．６

文献标志码：Ａ

ｄｏｉ：１０ ３９６９１ｊｉｓｓｎ １６７１—９６４６

4881（2011）03-0006-03文章编号：1009-DOI：10．3969/j．issn．1009-4881．2011．03．002

产纤维素酶霉菌的筛选及初步鉴定

陈

燕，王小芬，金

伟，胡申才，曾

驰

（武汉工业学院生物与制药工程学院，湖北武汉430023）

摘

要：在长期有腐烂植物的潮湿处采集8种样品，用羧甲基纤维素液体培养基富集培养，分

离得到34株产纤维素酶的霉菌。利用刚果红染色法对所得菌株进行染色并以水解圈/菌落直

径大小为筛选标准进行初筛，得到11株菌。再用DNS法测定初筛所得菌株发酵液中纤维素

wx1005，酶的活力，得到两株纤维素酶活性较高的菌株wx0503、其发酵液纤维素酶活力分别可47．46U/mg。此外，达31．31U/mg、用苏丹混合液染色法对初筛所得到的产纤维素酶菌株染

wx1007。色，镜检观察其产油脂情况，得到2株产油量较大的纤维素酶产生菌株wx0403、关键词：纤维素酶；真菌；酶活；油脂

中图分类号：Q939．96

文献标识码：A

Screeningandcharacterizationofcellulase－producingfungistrains

CHENYan，WANGXiao－fen，JINWei，HUShen－cai，Z

生物化学实验报告

题目：纤维素酶活力的测定（3,5-二硝基水杨酸法）

姓名： 学号： 班级： 时间：

一、

实验目的：

掌握还原糖的测定原理，学习用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。

二、

实验原理：

纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。 三、

实验试剂：

1. 3,5-二硝基水杨酸显色液：称取10g 3,5-二硝基水杨酸，溶入蒸馏水中，

加入20g分析纯氢氧化钠，200g酒石酸钾钠，加水500ml，升温溶解后，加入重蒸酚2g，无水亚硫酸钠0.5g。加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000ml。存于棕色瓶中，放置一周后使用。 2. 0.1摩尔pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液。

3. 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，溶解后成胶状液，静置过夜。使用前摇匀。 4. 标准葡萄糖溶液：称取干燥至恒重的葡萄糖100mg，溶解后定容至100ml，

此溶液含葡萄糖1.00mg/ml。

5. 酶液：将0.05g酶溶解定容至50ml，从中取出1ml再定容至100ml，待

测。（用pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制）

四、

*33*年第"-期中国饲料

—*-—

纤维素酶酶活的测定方法

河南省科学院生物研究所河南省饲料产品质量监督检验站

刘德海陈小鸽

杨玉华

安明理

饲用纤维素酶在饲料工业中已普及应用，对其质量检测显得日益重要。纤维素酶是一种复合酶，按作用底物的能力划分为两部分，一部分是对棉花纤维素能起催化水解作用的酶，称为!"酶；另一部分是对羧甲基纤维素钠（#$%!&!）起水解作用的酶，称为!’酶。据此，一般采用两种测定方法，一种是适用于!(酶的!&!法，另一种是适用于!"酶的滤纸法。下面就此两种方法作一介绍。

"

!&!（羧甲基纤维素）法")"材料")")"饲用纤维素酶由河南省科学院生物研

究所提供。

")")*试剂磷酸氢二钠、

柠檬酸、羧甲基纤维素、+，,%二硝基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、亚硫酸钠、苯酚。")")+仪器

-*"型分光光度计、

恒温水浴锅、./0%*酸度计、

秒表。")")1

试剂配制")")1)"2/,)3柠檬酸缓冲液制取3)*45678

磷酸氢二钠液（称取-)