土壤微生物生物量的测定方法

土壤微生物生物量的测定方法

1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）

1.1 基本原理

新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的0.5mol/LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（KEC），从而计算土壤微生物生物量碳。

1.2 实验仪器

自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。

1.3 实验试剂

1）无乙醇氯仿（CHCL3）；

2）0.5mol/L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中

3）工作曲线的配制：用0.5mol/L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、 70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。（其实一般情况下， 仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）

1.4 操作步骤

1.4.1 土壤的前处理（过筛和水分调节略） 1.4.2 熏蒸

称取新鲜（相当

1. 土壤微生物生物量的测定(滴定法)

一、实验目的和内容

土壤微生物生物量是指土壤中体积小于5～10μm3活的微生物总量，是土壤有机质中最活跃的和最易变化的部分。耕地表层土壤中，土壤微生物量碳（Bc）一般占土壤有机碳总量的3％左右，其变化可直接或间接地反映土壤耕作制度和微生物肥力的变化，并可以反映土壤污染的程度。近30年来，国外许多学者对土壤微生物生物量的测定方法进行了比较系统的研究，但由于土壤微生物的多样性和复杂性，还没有发现一种简单、快速、准确、适应性广的方法。目前广泛应用的方法包括：氯仿熏蒸培养法（FI）、氯仿熏蒸浸提法（FE）、基质诱导呼吸法（SIR）、精氨酸诱导氨化法和三磷酸腺苷（ATP）法。

氯仿熏蒸浸提法（FE）的原理是：土壤经氯仿熏蒸处理，微生物被杀死，细胞破裂后，细胞内容物释放到土壤中，导致土壤中的可提取碳、氨基酸、氮、磷和硫等大幅度增加。通过测定浸提液中全碳的含量可以计算土壤微生物生物量碳。 二、实验材料和用具

仪器：培养箱；真空干燥器；真空泵；往复式振荡机（速率200次每min）；1L广口玻璃瓶；定量滤纸；紫外分光光度计；LNK-872型消煮炉（江苏省宜兴市科教仪器研究所） 试剂：

1. 无乙醇氯仿：市售的氯仿都含有乙

土壤微生物及微生物量研究综述

陈建国 20092133 水保09级

一、研究背景

土壤微生物是生态系统的重要组成部分。土壤微生物一方面对土壤有机物质起分解作用，使有机物质转化成有效养分，另一方面，对土壤中的无机营养元素起固持和保蓄作用

[1-4]

[1]

。

土壤微生物在土壤养分转化与循环、维护生态平衡和保护环境等方面具有非常重要的意义。

土壤微生物与植物在根际微环境中进行着复杂频繁的互作。土壤有益微生物通过其代谢活动提高土壤中植物营养元素的有效性，改变了植物根系生理状态，最终促进了植物的定植、生长和发育；植物通过其根际分泌物影响着土壤微生物的群落结构和代谢活性。土壤微生物与植物相互作用不是完全独立的，还受到土壤、温度、水分等多种环境因素影响，进一步研究植物、土壤微生物与环境关系，特别是研究植物一土壤一微生物所构成的系统可为今后进行绿色农业、林业保护和环境保护等提供更有价值的信息

[17]

。

森林土壤微生物是森林生态系统的重要组成部分之一，在林地枯枝落叶分解、腐殖质合成、土壤养分循环和能量转化中起着重要作用，其数量不仅直接影响土壤的生物化学过程和土壤养分的组成与转化，也是土壤中生物活性的具体体现，是维持和恢复林地生产力的主要因素。森

土壤微生物测定

土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统的微小变化。土壤微生物活性的表征量有:微生物量、C/N、土壤呼吸强度和纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。

测定指标：

1、土壤微生物量 (Mierobia lBiomass，MB)

能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um3的生物总量。它与土壤有机质含量密切相关。

目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO2，根据释放出的CO2:的量和微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。

此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。

熏蒸提取-容量分析法 操作步骤： （1）土壤前处理和熏蒸 （2）提取

将熏蒸土壤无损地转移到20

土壤微生物研究规范——II. 土壤样品的运输和贮存

1. 土壤微生物样品的运输

土样从采集点到实验室往往需要经历一定时间的运输，土样运输过程中难免影响土壤的温度、水分、氧气等环境条件，所以要尽快置于黑暗、低温（4℃）的密闭环境，尽量维持土壤含水量稳定不变，黑暗环境是为了避免光照下藻类在土壤表明的生长，低温是为了减少细菌繁殖，维持微生物区系稳定。一般装于聚乙烯袋子，并松扎。另外，储存时尽可能避免物理压实，样品袋不要堆叠过多，以免破坏土壤原有的团粒结构，并导致底层样品处于厌氧环境。

微生物取样的土壤样品需要在0-4℃的条件下保存，所以土壤样品应及时保存在保温箱或冰箱中（设置0-4℃），并最好在一周内完成前期处理。

如果采集地有冰箱、熏蒸所需的真空干燥器和通风橱等设施，建议将微生物土壤样品熏蒸浸提后，以冷冻的浸提液保存在塑料小瓶中，以方便运送。

如果采集地没有通风橱等设施，建议将所取的土壤样品过筛后冷藏在保温箱中，以方便运送。具体的流程如下：

（1）提前准备好保温箱及冷冻好的冰板。冰板需要提前1-2 d冷冻，可以再用自封袋装一定量水分放平冷冻为规则的冰块备用。

（2）按照微生物取样规范进行取样，及时过筛去除根系、土壤动物等杂质，放置在0-4℃保鲜冰

土壤微生物的分离与鉴定

组员：阚能涛，户红通，郭晓辉，耿静，孔桂慧，兰欣玉 关键词：土壤微生物，分离鉴定，生理生化， 实验摘要：

土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。根际微生物与植物的关系特别密切，不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响，而不同的根际微生物由于其生理活性和代谢产物的不同，也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。土壤微生物不仅对土壤的肥力和土壤营养元素的转化起着重要作用，而且对于进入土壤中的农药及其他有机污染物的自净、有毒金属及其化合物在土壤环境中的迁移转化等都起着极为重要的作用。

土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。

土壤中微生物以细菌数量最多，为几百万个/克土至几亿个/克土，有各种生理类群，营养类型多属异养型，鉴别染色多为革兰氏阳性。放线菌含量为几万个/克土至几百万个/克土，但其生物量不比细菌低，因为菌丝体积较大。土壤中真菌含量为几千个/克土至几十万个/克

钼矿周围土壤中微生物的分离与鉴定

步骤一 钼矿周围土壤的采集与处理

一、采集地点：河南省、洛阳市、栾川县钼矿区土壤。

二、实验器材：无菌牛皮纸袋，无菌铲，长线，标杆，标签，尺子，冰箱。 三、样本采集及处理方法: 1.取样：2012 年3月于洛阳市栾川县钼矿区土地选择2 个不同的地点进行采样，

分别在4个方向选取3点，每个地点在不同位置各取3 个样，直取5~20cm深度的土壤，每点按1m×1m取样，每点取样量一致，将样点土壤混均后取200 g装入无菌牛皮纸袋中封好，带回实验室放入灭菌的袋中或放在4℃冰箱中暂存备用。 采样注意事项：

(1)样品标记：采集的样品放入统一的灭过菌的牛皮纸袋样中，用铅笔填写好标签，袋内外各具一张。

(2)一个混合土样以取土1公斤左右为宜，如果样品数量太多，可用四分法将多余的土壤弃去（方法是将采集的土壤样品放在洁净的塑料布上，弄碎、混匀，铺成四方形，划对角线将土样分成四份，把对角的两份分别合并成一份，保留一份，弃去一份，果所的样品依然很多，可用四分法处理，直至所需数量为止）。

(3)采样深度，对一般土地采样深度5—30cm即可，采样时深度要垂直，上下取土量要一致，每个采样点的取土深度及采样量应均匀一致，土壤上层与下层的

钼矿周围土壤中微生物的分离与鉴定

步骤一 钼矿周围土壤的采集与处理

一、采集地点：河南省、洛阳市、栾川县钼矿区土壤。

二、实验器材：无菌牛皮纸袋，无菌铲，长线，标杆，标签，尺子，冰箱。 三、样本采集及处理方法: 1.取样：2012 年3月于洛阳市栾川县钼矿区土地选择2 个不同的地点进行采样，

分别在4个方向选取3点，每个地点在不同位置各取3 个样，直取5~20cm深度的土壤，每点按1m×1m取样，每点取样量一致，将样点土壤混均后取200 g装入无菌牛皮纸袋中封好，带回实验室放入灭菌的袋中或放在4℃冰箱中暂存备用。 采样注意事项：

(1)样品标记：采集的样品放入统一的灭过菌的牛皮纸袋样中，用铅笔填写好标签，袋内外各具一张。

(2)一个混合土样以取土1公斤左右为宜，如果样品数量太多，可用四分法将多余的土壤弃去（方法是将采集的土壤样品放在洁净的塑料布上，弄碎、混匀，铺成四方形，划对角线将土样分成四份，把对角的两份分别合并成一份，保留一份，弃去一份，果所的样品依然很多，可用四分法处理，直至所需数量为止）。

(3)采样深度，对一般土地采样深度5—30cm即可，采样时深度要垂直，上下取土量要一致，每个采样点的取土深度及采样量应均匀一致，土壤上层与下层的

钼矿周围土壤中微生物的分离与鉴定

步骤一 钼矿周围土壤的采集与处理

一、采集地点：河南省、洛阳市、栾川县钼矿区土壤。

二、实验器材：无菌牛皮纸袋，无菌铲，长线，标杆，标签，尺子，冰箱。 三、样本采集及处理方法: 1.取样：2012 年3月于洛阳市栾川县钼矿区土地选择2 个不同的地点进行采样，

分别在4个方向选取3点，每个地点在不同位置各取3 个样，直取5~20cm深度的土壤，每点按1m×1m取样，每点取样量一致，将样点土壤混均后取200 g装入无菌牛皮纸袋中封好，带回实验室放入灭菌的袋中或放在4℃冰箱中暂存备用。 采样注意事项：

(1)样品标记：采集的样品放入统一的灭过菌的牛皮纸袋样中，用铅笔填写好标签，袋内外各具一张。

(2)一个混合土样以取土1公斤左右为宜，如果样品数量太多，可用四分法将多余的土壤弃去（方法是将采集的土壤样品放在洁净的塑料布上，弄碎、混匀，铺成四方形，划对角线将土样分成四份，把对角的两份分别合并成一份，保留一份，弃去一份，果所的样品依然很多，可用四分法处理，直至所需数量为止）。

(3)采样深度，对一般土地采样深度5—30cm即可，采样时深度要垂直，上下取土量要一致，每个采样点的取土深度及采样量应均匀一致，土壤上层与下层的

　万方数据

　万方数据

　万方数据

不同施肥条件对玉米生长季耕层土壤微生物量碳的影响

作者：杨劲峰， 韩晓日， 阴红彬， 战秀梅， 刘小虎， Yang Jinfeng， Han Xiaori， Yin Hongbin， Zhang Xiumei， Liu Xiaohu

作者单位：沈阳农业大学,土地与环境学院,辽宁,沈阳,110161

刊名：

中国农学通报

英文刊名：CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN

年，卷(期)：2006,22(1)

被引用次数：11次

参考文献(4条)

1.王继红;刘景双;于君宝;王金达氮磷肥对黑土玉米农田生态系统土壤微生物量碳、氮的影响[期刊论文]-水土保持学报 2004(01)

2.Brookas PC;Landman A;PrudenG Chloroform fumigation and the release of soil nitrogen:A rapid direct extraction method to measure microbial biomass nitrogen in soil[外文期刊] 1985

3.Jawson ND;Elliott LF;Papendick RI The de