elisa组织样本处理

组织样本处理

通常情况下，为了方便研究人员对样本的选择和使用，样本库除对原始样本进行分装保

存外，尚需对样本做进一步的提纯处理，以获得样本的衍生物，供研究者使用。这样既能控制样本的使用量，减少对样本不必要的浪费，又能保证其质量不受影响。可从快速冰冻保存的组织样本中直接提取DNA、RNA和蛋白质；或将OCT包埋组织样本用于制作冰冻组织切片；将福尔马林固定石蜡包埋组织样本用于制作石蜡切片；也可取特定的样本进行细胞培养成为细胞系。

根据处理提纯的样本不同，采取不同的储存方式。如DNA、RNA和蛋白样本可以放在

冻存管中超低温保存，组织切片存放在切片盒中室温下保存，细胞系在液氮中保存。 1. DNA提取

从快速冰冻保存的组织样本、OCT包埋组织的样本、福尔马林固定石蜡包埋组织样本或石蜡切片中均可提取DNA 样本，过程稍有区别，但多采用酚-氯仿法从新鲜或冰冻组织，以及细胞等样本中提取DNA，样本的处理按照标准操作程序进行。用紫外分光光度计法测定DNA的浓度，琼脂糖凝胶电泳检测法检测DNA的纯度。在DNA 保存区储存DNA样本，DNA样本应保存在-80℃冰箱中，并做好标记。 2. RNA提取

RNA很容易被污染和降解。最好是从经过RNA酶抑制剂处理的组织中

组织样本处理

通常情况下，为了方便研究人员对样本的选择和使用，样本库除对原始样本进行分装保

存外，尚需对样本做进一步的提纯处理，以获得样本的衍生物，供研究者使用。这样既能控制样本的使用量，减少对样本不必要的浪费，又能保证其质量不受影响。可从快速冰冻保存的组织样本中直接提取DNA、RNA和蛋白质；或将OCT包埋组织样本用于制作冰冻组织切片；将福尔马林固定石蜡包埋组织样本用于制作石蜡切片；也可取特定的样本进行细胞培养成为细胞系。

根据处理提纯的样本不同，采取不同的储存方式。如DNA、RNA和蛋白样本可以放在

冻存管中超低温保存，组织切片存放在切片盒中室温下保存，细胞系在液氮中保存。 1. DNA提取

从快速冰冻保存的组织样本、OCT包埋组织的样本、福尔马林固定石蜡包埋组织样本或石蜡切片中均可提取DNA 样本，过程稍有区别，但多采用酚-氯仿法从新鲜或冰冻组织，以及细胞等样本中提取DNA，样本的处理按照标准操作程序进行。用紫外分光光度计法测定DNA的浓度，琼脂糖凝胶电泳检测法检测DNA的纯度。在DNA 保存区储存DNA样本，DNA样本应保存在-80℃冰箱中，并做好标记。 2. RNA提取

RNA很容易被污染和降解。最好是从经过RNA酶抑制剂处理的组织中

数字图像处理基本操作

1. 图像的缩放

图像的缩放是图像的空间域变换操作，可以认为是在输入图像和输出图像之间进行像素-像素变换。图像插值操作是图像缩放的基本方法，基本原理是，估计像素点之间位置的像素值，将输入图像和输出图像的变换在数字图像的约束下得以完善，有效的填充图像可能出现的空白点。

图像的插值包括三种方法：1.最近邻插值，该算法中，输出图像中每一个像素点的值就是与该点在输入图像中变换位置最临近采样点的值。2.双线性插值，该方法的输出像素值是它在输入图像中2*2邻域采样点的平均值。3.双三次插值，相比于双线性插值，其插值邻域大小为4*4，插值效果好，但相应计算量也较大。

Matlab图像处理工具箱中的函数imresize可以对图像进行缩放操作，同时指定以上所介绍的插值方法作为其函数。以下基于matlab实现图像“hd1.bmp”的不同方式的缩放（这里设置放大倍数为2倍）

%图像缩放操作代码：

>> J=imread('hd1.bmp'); %图像的读入

>> x1=imresize(J,2); %将图像以最近邻插值放大两倍 >> x2=imresize(J,2,'bilinear');

磁珠法提取核酸的3种样本处理方法

转自：洛阳吉恩特生物科技有限公司 磁珠法核酸提取实验室 以生物磁珠为载体提取核酸，所有反应是在液体体系中进行的，但生物样本多种多样，有液体也有固体，或者固液混合体，大多数生物样本在进行核酸提取纯化之前需要进行一定的前处理，液化、富集、除杂等都是常见的前处理方式。 一、液化

将固体样本转化为液体样本是最重要的样本前处理方法，固体样本是很难直接在试剂盒的作用下用于提取核酸的。固体样本跟杂质一样，会严重阻碍磁珠吸附核酸，并且耗损大量的磁珠位点，很难取得良好的提取效果。

常见的固体样本如植物组织、动物组织、泥土、浓痰等。

植物组织和动物组织，可剪取适量的样本，在研钵内快速研磨。研磨时如果需要保护RNA，可以采用液氮研磨的方式。如果不需要提取RNA，也可以加入裂解液或者生理盐水帮助研磨成匀浆状态。

泥土的处理方式主要是通过浸泡。因为从泥土中提取核酸，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸。使用生理盐水或者其他适当缓冲液体浸泡泥土，如果是较为干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小颗粒，浸泡过程中可用小棒搅动帮助泥土分散。浸泡一段时间后，将泥浆用三层滤纸过滤，过滤所得的液体，即可用于磁珠法提取。

如浓痰、脓液等固

磁珠法提取核酸的3种样本处理方法

转自：洛阳吉恩特生物科技有限公司 磁珠法核酸提取实验室 以生物磁珠为载体提取核酸，所有反应是在液体体系中进行的，但生物样本多种多样，有液体也有固体，或者固液混合体，大多数生物样本在进行核酸提取纯化之前需要进行一定的前处理，液化、富集、除杂等都是常见的前处理方式。 一、液化

将固体样本转化为液体样本是最重要的样本前处理方法，固体样本是很难直接在试剂盒的作用下用于提取核酸的。固体样本跟杂质一样，会严重阻碍磁珠吸附核酸，并且耗损大量的磁珠位点，很难取得良好的提取效果。

常见的固体样本如植物组织、动物组织、泥土、浓痰等。

植物组织和动物组织，可剪取适量的样本，在研钵内快速研磨。研磨时如果需要保护RNA，可以采用液氮研磨的方式。如果不需要提取RNA，也可以加入裂解液或者生理盐水帮助研磨成匀浆状态。

泥土的处理方式主要是通过浸泡。因为从泥土中提取核酸，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸。使用生理盐水或者其他适当缓冲液体浸泡泥土，如果是较为干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小颗粒，浸泡过程中可用小棒搅动帮助泥土分散。浸泡一段时间后，将泥浆用三层滤纸过滤，过滤所得的液体，即可用于磁珠法提取。

如浓痰、脓液等固

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

一、采集血样，室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可；血量一般为1ml；一般地，1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞（PBMC，即淋巴细胞核单核细胞）。

二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的离心管，为管1，先加入500ul淋巴细胞分离液；另一个1.5ml 无菌无酶的离心管中，装有500ul血样的真空管和500ul PBS（磷酸盐缓冲液），1：1混匀的混合物，共1ml。然后缓慢把混匀的血样PBS混合液加入到有淋巴细胞分离液的管1中，注意要缓慢，使血样尽量位于提取液上层，不能太用力让血细胞扩散到下层，就没办法离心分层了。（这一步的操作应该尽量快速的完成，因为时间长了，红细胞就会在重力作用下沉降，混入到提取液中，对后面的离心造成影响）然后离心。1500rpm,15min,20摄氏度。 说明：

1、从采集血样到开始实验的时间最好不超过4小时。实验过程中一直保持室温条件，一般20摄氏度比较适中，因为细胞的最适温度是体温37摄氏度，但是温度降低又可以降低细胞的代谢，两者有些矛盾，所以取中间温度比较理想。

2、关于淋巴细胞分离液的注意事项：启封后应置4℃保存避免微

体液标本处理流程规范（试行）

一、目的：确保生物样本库工作人员高质量完成处理体液标本并有效储存的任务。 二、适用范围：此标准流程适用于组织样本库工作人员。 三、权责：所有组织样本库的成员都有义务遵守此标准流程

四、操作用具：1.8ml冻存管 Eppendorf手动单道移液器 记号笔 记录本 镊子 离心机 手套 口罩 枪头 液氮冷冻盒 标签 等

五、采集流程：基于安全考虑，所有处理生物样品的步骤，操作时必须佩戴手套、口罩作业。 1准备：

1.1 体液样本库工作人员每日去病房领取当日所取标本，及时时处理； ．

1.2 准备好冻存管、加样枪、枪头、液氮冷冻盒、冻存管等物品。进行体液分离操作前应戴好口罩、帽子、手套；

1.3 每日清洁操作台周围环境卫生，做到操作台及周围环境无血迹、无杂物等无关物品。 2体液标本处理： 2.1抗凝全血：

A．标本处理前的检查：

·检查抗凝血的抗凝效果，抗凝不完全者重新采样 ·出现溶血者，重新采集 ·患者相关信息必须填写完整； B. 低速离心：3000 rpm，10min；

C.必要时温度控制在4摄氏度高速离心；150

应用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样本浓度

整体思路：在ELISA实验结束后，我们得到的是经酶标仪读出的标准品以及样本的OD值。其中，标准品的浓度已知，我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度，以OD值为横坐标，浓度为纵坐标，做一条标准曲线，并用公式表示出来。这样，我们把样本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即样本浓度。 下面我们就一步步来实现这个目标:

1. 首先，将数据整理好输入Excel，分别为经酶标仪读出标准品的OD值及其对应的浓度值。

2. 拖动鼠标选取完成的数据区，并点击图表向导，在图表类型中选“XY散点图”，并选择子

图表类型的“散点图”（第一个没有连线的）。如下图所示。

3. 点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如

果是纵向列表就改选“列”。

在做ELISA标准曲线，并通过此曲线求样本浓度时，因样本OD值是已知的，因此，我们需要将OD值设为X。根据上图我们可以看到，横坐标X值为OD值，纵坐标Y为标准品浓度，这正是我们想要的。

4.有时需要我们手动选择X值，这时可以点击“系列”来更改，如下图。

如果要对横坐标和纵坐标进行掉换，我们可以就点击X值和Y值文本框右边的小图标，结果如下图：

出现上图后，拖动鼠标选

数据列表的基本处理方法

第一节 基本概念

数据列表是一个矩形表格，表中单元格没有进行过合并。 数据列表的一行数据叫做一条记录 数据列表的一列数据叫做一个字段，

数据列表的每一列可以有一个名字——字段名，如果一个数据列表有字段名，则一定是在数据表列的第一行。

字段名 1行叫做1条记录 1列叫做1个字段

图：数据列表的基本概念

如果表格中有单元格由2个以上的单元格合并而成，那么这个这个表格就不是数据列表。

这个单元格由两个单元格合并而成

图：非数据列表的例题

对于数据列表，excel可以进行数据表的排序、筛选、分类汇总、做数据透视表、多表的合并计算等操作，也可以使用数据库函数对其进行处理等。而非数据列表不能做上述操作，也

不能运用数据库函数等。

第二节 数据列表的数据筛选

数据筛选是对一个数据列表，筛选出满足给定条件的数据行（记录）。对不满足条件的数据行（记录）进行隐藏，使其不显示出来。

Excel的数据筛选分为自动筛选和高级筛选2种。

一、自动筛选

自动筛选是excel对使用“自动筛选”命令的数据列表的每一个字段的字段名（没有字段名的数据列表则是每一个字段的第1行）设置一个筛选条件设置下拉列表框，使用者可根据需要设置筛选条件。

数据列表

第一部分 企业所得税汇算清缴稽查企业应注意法律证据举证 一、税务稽查对象选定的因素和稽查选案基本流程

充分利用征收信息、税源监控信息，税收管理信息，收集相关信息对纳税人收入信息、财产信息、生产信息、销售信息、营销信息、财务信息、租赁信息、投资信息、注册信息等进行综合指标配比。最终选定为稽查对象。

1、选案中税务稽查对象一般是通过以下方法产生 2、税务稽查执法程序法律限制及要求

实施稽查前应当向纳税人发出书面稽查通知，告知其稽查时间、需要准备的资料、情况等，但有特殊情况不必事先通知： 3、税务机关调阅企业帐务、资料等相关凭据的法律程序

调取账簿及有关资料应当填写《调取账簿资料通知书》、《调取账簿资料清单》。

二、企业所得税税前扣除票据合法性的稽查

税前扣除凭证的具体种类、形式、格式并不重要，但必须能够起到税前扣除的证明作用。 具体分两大类:

㈠、成本构成需要提供的凭证 注意三个环节检查

企业入库购进存货或商品的成本，其凭证主要检查：购货发票、运费发票、装卸费发票或收据、农产品收购凭证、清选整理人工费领

款收据等

㈡、税前扣除凭证应具有的特征

《中华人民共和国企业所得税法》第八条规定：企业实际发生的与取得收入有关的、