糖原染色PAS

PAS染色法-概况、原理

PAS染色法概况

PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

PAS染色法原理

PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。 原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。

PAS染色法-应用、制作

PAS染色法-应用

随着医学实验技术的发展 ，近年来 ，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ，还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。

PAS染色法-制作

1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精 Carnoy固定液: 纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml

2. 染色液

1) 过碘酸酒清夜配法: 过碘

PAS染色法-概况、原理

PAS染色法概况

PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

PAS染色法原理

PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。 原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。

PAS染色法-应用、制作

PAS染色法-应用

随着医学实验技术的发展 ，近年来 ，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ，心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ，糖原累积病诊断和研究 ，糖尿病的诊断和研究 ，用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ，还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。

PAS染色法-制作

1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精 Carnoy固定液: 纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml

2. 染色液

1) 过碘酸酒清夜配法: 过碘

糖原染色

高碘酸-Schiff（Periodic acid Schiff, PAS）染色法 【试剂配制】

（1）高碘酸氧化液：

高碘酸 1g 蒸馏水 100ml。 （2）Schiff液：

碱性品红 1g 1N盐酸 20ml 亚硫酸氢钠 2g 活性炭 2g 蒸馏水 200ml

将1g碱性品红热溶于200ml煮沸水中，搅拌5分钟，冷至50℃时过滤，在滤液中加20ml 1当量盐酸，冷至25℃时加1g亚硫酸氢钠（sodiumbisulfite）。将该液存放在冷暗处14～24小时，然后加入2g活性炭，摇动1分钟过滤，滤后保存在0～4℃冷暗处，在室温下使用。

注意：如碱性品红为结晶，可预先研成粉末，使易溶解。亚硫酸氢钠须有浓厚的气味，否则效

糖原染色

高碘酸-Schiff（Periodic acid Schiff, PAS）染色法 【试剂配制】

（1）高碘酸氧化液：

高碘酸 1g 蒸馏水 100ml。 （2）Schiff液：

碱性品红 1g 1N盐酸 20ml 亚硫酸氢钠 2g 活性炭 2g 蒸馏水 200ml

将1g碱性品红热溶于200ml煮沸水中，搅拌5分钟，冷至50℃时过滤，在滤液中加20ml 1当量盐酸，冷至25℃时加1g亚硫酸氢钠（sodiumbisulfite）。将该液存放在冷暗处14～24小时，然后加入2g活性炭，摇动1分钟过滤，滤后保存在0～4℃冷暗处，在室温下使用。

注意：如碱性品红为结晶，可预先研成粉末，使易溶解。亚硫酸氢钠须有浓厚的气味，否则效

肝糖原的提取和鉴定 一、实验目的

1、 学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。 2、 正确掌握使用离心机的方法步骤。 二、实验原理 三、实验步骤

（一）、肝糖原提取

1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。 2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。

3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。

4、溶液以2000r/min离心10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。 5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。 （二）、鉴定

1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。

2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶

肝糖原的提取和鉴定 一、实验目的

1、 学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。 2、 正确掌握使用离心机的方法步骤。 二、实验原理 三、实验步骤

（一）、肝糖原提取

1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。 2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。

3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。

4、溶液以2000r/min离心10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。 5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。 （二）、鉴定

1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。

2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶

实验一 细胞多糖的PAS反应

目的：掌握细胞中多糖（如淀粉、细胞壁纤维素等）原位显示的PAS反应原理，熟悉PAS的技术。 一、PAS反应原理

过碘酸（HI04·2H20）作为一种强的氧化剂，能够打开C—C键,将-CHOH-CHOH-、-CHOH-CHO、-CHOH-COOH、-CHOH-CH2NH2等的羟基氧化为醛基。但它不继续氧化新形成的醛基。所以，有充分的醛基与Schiff试剂中的无色碱性品红化合而形成紫红色物质，使细胞中的多糖（如淀粉、细胞壁纤维素等）原位显示出来。 二、器材、试剂及材料 1、器材

显微镜，载/盖玻片、镊子、刀片、吸水纸。 2、试剂

（1）过碘酸酒精溶液

过碘酸（HI04·2H20） 0.4g 95%乙醇 35ml 0.2M醋酸钠（27.2g+1000mlH2O） 5ml 蒸馏水 10ml （2） Schiff试剂

先将100ml蒸馏水煮沸，然后加人0.5g碱性品红，充分搅拌，必要时可再煮

甲壳素和壳聚糖之所以具有重要的理论研究意义和商业价值，在于其分子结构和组成的独特性，它是自然界唯一的碱性多糖，是地球上数量最大的含氮有机化合物。甲壳素及其衍生物不但具有良好的生物相容性、低毒和生物降解性，还具有许多生物医学功能和药物作用，壳聚糖被誉为人体所需的第六大生命要素。许多甲壳素及其衍生物产品业已商业化，关于甲壳素／壳聚糖的国际会议每两年召开一次，关于甲壳素的国际性学术专刊“Advance in Chitin Science”也于上世纪九十年代创刊。甲壳素及其衍生物已经在生命科学、功能材料等领域形成了新的研究和开发热点。甲壳素和壳聚糖具有较复杂的双螺旋结构，螺距为0．515nm，一

个螺旋平面由6个糖残基组成。甲壳素的结构单元是甲壳二糖，壳聚 糖的结构单元是壳二糖。甲壳素大分子链上分布着许多羟基，N．乙酰 氨基和氨基，它们形成各种分子内和分子问的氢键。甲壳素的结构由 于氢键类型不同而有三种结晶体：a一甲壳素，由两条反向平行的糖 链组成，通常与矿物质沉积在一起形成坚硬的外壳，如虾蟹的外壳； B一甲壳素由两条同向平行的糖链组成；Y一甲壳素由三条糖链组成， 两条同向一条反向。B和Y一甲壳素与胶原蛋白相联结，表现出一定 的硬度、柔韧性和流动性，

高中数学竞赛讲座二试内容19

染色问题 （一）

一．基本方法

染色问题的本质是对集合的元素进行分类的问题，染色可以使分类更直观、更形象．

染色问题主要有两类：一类使借助染色方法解决问题；二类是问题的条件是用染色的方式给出的．常

见的染色问题有对区域的染色（包括对方格，三角形的染色），对线段的染色，对点的染色．常用思想方法是整体思想，抽屉原理，考虑极端情形，数学归纳法，构造思想等． 二．例题精选

（一）．k染色平面问题

将平面上的点用不超过k种颜色给每一个点染一种颜色，这样的平面叫做k染色平面．

１．坐标平面上若干个整点，将一些整点染红色，一些染蓝色，证明：总可以有一种染法使每行、每列两

种颜色点数之差不超过１．

R B R R B B R B B R B R B R R B R B R B

R B R B R

B R B R B

２．对于任意的a>0，二染色平面上必存在斜边长为a且内角分别为30?,60?,90?的三顶点同色的三角形．

B B

Ｒ a Ｒ

３．将平面上每一个点都以红、蓝两色之一染色，证明：存在这样的两个相似三角形，

B B 它们相似比为１９９５，而且每个三角形的三个顶点同色．

1

B B R RR

我来一一解答你的疑问：

1.“做大鼠皮下HE染色后可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况吗？” 答：HE 染色，即苏木精 — 伊红染色法，苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大，H&E染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因此，H&E染色，尤其在400倍放大的情况下，可以明显看到一个个以蓝色为主的点状的炎症细胞（主要是中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），而其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，呈蓝色或深蓝色。

2. “通过HE染色观察我的材料是否对皮下组织产生炎症反应，那么HE的结果包括哪些呢？”

答：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积