a novel lab chip
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ChIP protocol实验室成熟的CHIP-seq及CHIP-qPCR操作流程
ChIP protocol
Fixation type: Type I:
1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:
2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:
1% Glutaraldehyde solution
(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min
Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M
ChIP protocol实验室成熟的CHIP-seq及CHIP-qPCR操作流程
ChIP protocol
Fixation type: Type I:
1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:
2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:
1% Glutaraldehyde solution
(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min
Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M
ChIP-chip及ChIP-seq的应用现状及其发展前景
[2]NadkarniJJ,DasturRS,ViswanathanV,etal.Duchenneandbec‐
bilitation[J].NeurolIndia,2008,56(3):248‐253.dystrophin[J].NatGenet,1993,3(4):283‐291.
kermusculardystrophies:anIndianupdateongeneticsandreha‐
1309
[14]VolpiEV,BridgerJM.FISHglossary:anoverviewofthefluores‐
cenceinsituhybridizationtechnique[J].Biotechniques,2008,45(4):385‐386,388,390passim.
[15]Velázquez‐WongAC,Hernández‐HuertaC,Márquez‐CalixtoA,
ersbyfluorescenceinsituhybridizationandRT‐PCR[J].GenetTest,2008,12(2):221‐223.
etal.Identificationofduchennemuscul
ChIP protocol实验室成熟的CHIP-seq及CHIP-qPCR操作流程
ChIP protocol
Fixation type: Type I:
1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:
2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:
1% Glutaraldehyde solution
(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min
Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M
ChIP protocol实验室成熟的CHIP-seq及CHIP-qPCR操作流程
ChIP protocol
Fixation type: Type I:
1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:
2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:
1% Glutaraldehyde solution
(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min
Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M
ChIP protocol实验室成熟的CHIP-seq及CHIP-qPCR操作流程
ChIP protocol
Fixation type: Type I:
1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:
2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:
1% Glutaraldehyde solution
(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min
Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M
chip protocol中文
CHIP PROTOCOL(基于millipore EZ-CHIP catalog#17-371):
实验原理:
在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
实验步骤: 第一天:
【实验材料准备】:
1000ul、100ul、200ul、20ul移液器,大、中、小号tip,1.5ml EP管,200ul PCR管。
【实验仪器准备】:
台式低温离心机,超声仪,电泳设备一套,旋转混匀仪,层析柜。 【实验试剂准备】:
SDS lysis buffer复温,使其充分溶解,避免沉淀;protease inhibitor cocktail室温下充分解冻;PBS预冷(若使用试剂盒提供10xPBS,使用前还需用去离子水稀释成1xPBS工作液)。
(一)、细胞的甲醛交联与超声破碎*。
1、收集细胞(1-2x10^7),加入37%甲醛,使得甲醛的终浓度为1%(0.7%)。 2、室温孵育10min(精确计时)。
3、及时终止交联:加10x甘氨酸终浓度为1x。混匀后,在室温下放置5
ChIP操作步骤
ChIP实验步骤
第一部分、细胞的甲醛交联与超声破碎
1. 交联前的准备工作
(1)细胞准备:对细胞进行一定条件的处理,以确保目的基因的转录激活。细胞密度应达到1×106细胞/10 cm培养皿。
(2)配制1%甲醛溶液:270 μl 37%甲醛加入10 ml无血清细胞培养液中即可,应使用高质量的甲醛。
2. 交联与超声破碎
优化超声条件,以保证目的细胞的染色质DNA能被剪切为200 bp~1000 bp的片段,具体操作如下(以HepG2细胞为例):
(1)小心吸出细胞培养液,加入1%甲醛溶液10 ml,37℃孵育10 min,然后置冰上5 min终止固定。
(2)小心尽量吸净培养液,用预冷的PBS 3 ml洗细胞两次。
(3)加入预冷的内含PMSF(10ul)的PBS 1 ml。刮取细胞并移至离心管中,于4℃以1200 rpm(约3000 g)离心5 min,小心移走上清液,得到细胞沉淀(细胞沉淀可于-80℃保存数月)
(4)以200μl SDS裂解缓冲液重悬细胞(含PMSF:2ul),冰上放置10 min (5)冰上超声剪切染色质DNA,使其成为200 bp~1000 bp的片段(10个脉冲,每个20 s,脉冲间隔20 s)
(6)加入5M
chip protocol中文
CHIP PROTOCOL(基于millipore EZ-CHIP catalog#17-371):
实验原理:
在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
实验步骤: 第一天:
【实验材料准备】:
1000ul、100ul、200ul、20ul移液器,大、中、小号tip,1.5ml EP管,200ul PCR管。
【实验仪器准备】:
台式低温离心机,超声仪,电泳设备一套,旋转混匀仪,层析柜。 【实验试剂准备】:
SDS lysis buffer复温,使其充分溶解,避免沉淀;protease inhibitor cocktail室温下充分解冻;PBS预冷(若使用试剂盒提供10xPBS,使用前还需用去离子水稀释成1xPBS工作液)。
(一)、细胞的甲醛交联与超声破碎*。
1、收集细胞(1-2x10^7),加入37%甲醛,使得甲醛的终浓度为1%(0.7%)。 2、室温孵育10min(精确计时)。
3、及时终止交联:加10x甘氨酸终浓度为1x。混匀后,在室温下放置5
lab5
C++程序设计 lab5 学号:41130091 班级:材料1104 姓名:丁振文
实验5 数组
一、实验目的
⑴ 掌握一维数组和二维数组定义的规则,初始化及数组元素的引用方法。
⑵ 熟练掌握一维数组和二维数组的使用基本算法,解决排序和矩阵操作问题。 ⑶ 掌握字符数组与字符串的关系以及字符数组与字符串的使用方法。
二、实验内容和实验要求
1.练习题一
⑴ 编程实现将10个整数升序排列。 ⑵ 要求
从键盘输入10个整数存放在一个一维数组中,调整10个数按从小到大的顺序排列,并输出。分别用冒泡法和选择法实现。(写两个程序)
⑶程序代码 冒泡法:
#include int i,j,t,a[10],k; cout<<\输入10个整数:\ for(i=0;i<10;i++) cin>>a[i]; for(i=0;i<9;i++) for(j=i+1;j<10;j++) if(a[i]>a[j]) { t=a[i]; a[i]=a[j]; a[j]=t; } cout<<\输出升序排列的结果:\ for(i=0;i<10;i++) cout< C++程序设计 lab5 学号:41130091 班级:材料1104 姓名:丁振文 选择法: #inc