无菌检查方法验证2015版药典

无菌检查方法的验证

无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法，是作为无菌产品批放行的重要依据及药监部门对无菌产品质量监管的一个重要项目。因此如何确保无菌检查方法的准确可靠至关重要，而检查方法的验证是保证检查结果的公正、科学和准确的基础，因此各个主要国家的GMP或药典都对无菌检查方法的验证提出了严格的要求，2010版中国药典对分析方法验证和检查的要求也有大幅度的提高，同时也是GMP检查中检查的重点和容易发现问题的区域。 验证要求与方法

无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。

前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。

再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。

通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方

微生物限度/无菌方法学验证流程

1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月

单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有

的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐，

2. 每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天

药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏

1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌 6沙门菌

（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间） 7白色念珠菌 8黑曲霉菌

（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）

3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天

实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证 每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用

药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：

1. 回收率验证：回收率验证实验共需要26天

（若回收率达不

微生物限度/无菌方法学验证流程

1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月

单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有

的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐，

2. 每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天

药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏

1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌 6沙门菌

（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间） 7白色念珠菌 8黑曲霉菌

（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）

3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天

实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证 每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用

药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：

1. 回收率验证：回收率验证实验共需要26天

（若回收率达不

无菌检查法-2015版中国药典

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器

××××××××××公司GMP文件 编码：SOP-QC-TY-02-033

非无菌药品微生物限度检查操作规程 起草人 审核人 批准人 日 期 日 期 日 期 年 月 日 执行日期 2015年12月01日 年 月 日 年 月 日 颁发部门 质保部 分 发 部 门 质保部（）份 质检部（）份 变更记载： 修订号 执行日期 生产部（）份 物资部（）份 设备部（）份 采供部（）份 00 2012年06月01日 销售部（）份 行政部（）份 01 2014年05月01日 财务部（）份 02 2015年12月01日

1. 目的：建立非无菌药品微生物限度检查检验标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确。

2. 适用范围：适用于本公司所有采用非无菌药品微生物限度检查法测定的供试品。

3. 责任者：QC检验员、QC经理。 4. 正文：

4.1 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 4.1.1 简述

微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的

美国药典USP31 71 无菌检查法中文版

美国药典USP31-NF26无菌检查法《71》.doc 71 STERILITY TESTS 无菌检查法

此通则的各部分已经与欧洲药典和/或日本药典的对应部分做了协调。不一致的部分用符号（ ）来标明。

下面这些步骤适用于测定是否某个用于无菌用途的药品是否符合其具体的各论中关于无菌检查的要求。只要其性质许可，这些药品将使用供试产品无菌检查法项下的膜过滤法来检测。如果膜过滤技术是不适合的，则使用在供试产品无菌检查法项下的培养基直接接种法。除了具有标记为无菌通道的设备之外，所有的设备均须使用培养基直接接种法进行检测。在结果的观测与理解项下包含了复验的规定。 由于无菌检查法是一个非常精确的程序，在此过程中程序的无菌状态必须得到确保以实现对结果的正确理解，因此人员经过适当的培训并取得资质是非常重要的。无菌检查在无菌条件下进行。为了实现这样的条件，试验环境必须调整到适合进行无菌检查的方式。为避免污染而采取的特定预防措施应不会对任何试图在检查中发现的微生物产生影响。通过在工作区域作适当取样并进行适当控制，来定期监测进行此试验的工作条件。 这些药典规定程序自身的设计不能确保一批产品无菌或已经灭菌。这主要是通过灭菌工

2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容

2010年版药典附录无菌检查和微生物

限度检查方法增修定内容

杜平华

2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容

起草的指导思想

一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、 环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着 力解决发展中的问题。 二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自 主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国 药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国 际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进 医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会 作出贡献。

2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容

2010年版无菌检查法增修订内容

2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容

一、进一步确定了无菌检查法的定义： 无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、 原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。 二、进一步明确了无菌检查保障 1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ， 但采用的措施不得影响微生物的生长。 2 、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需进 行环境检测。 3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过 无菌技术的培

生物样品定量分析方法验证指导原一、范

准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药浓度，对于药和制剂研发非常重要这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性或根据动学药动学

和生物等效性试验的结果做出关键性决定因此必须完整地验记录应用的生物分

析方法，以获得可靠的结果

本指导原则提供生物分析方法验证的要求也涉及非临床或临床试验样品际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证本指导原则二和三主要针对色谱分析方法，四针对配体结合分析方法

生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求应该在相应的生物样品分析中遵GL原则GC原则

二、生物分析方法验

（一）分析方法的完整验

分析方法验证的主要目的是证明特定方法对于测定在某种生物基质中分物浓度的可靠性此外方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂一般应对个新分析方

法和新分析物进行完整验证当难于获得相同的基质时可以采用当基质替代，但要说明理由

一个生物分析方法的主要特征包括选择性定量下限响应函数和校正围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶中储存和处理全过程中的稳定性

有时可能需要测定多个分析物这可能涉及两种不同的药物也可能涉及个母体药物及其代谢物或一个药物的

无菌灌装模拟试验方案

验证分类：工艺验证 验证部门：冻干粉针剂车间

甘肃大得利制药有限公司

1.概述：为证明在确定的环境、工艺和操作下，生产过程能有效地防止微生物污染，使产品达到无菌要求，需进行培养基模拟灌装试验，来验证所提供产品的无菌可靠性达到可接受的标准。这是GMP对非最终灭菌无菌冻干粉注射剂生产的基本要求，是无菌制剂工艺验证的重要组成部分。但是此试验不能对常规生产造成不良影响。

无菌灌装模拟试验是指由掌握了无菌操作的人员在一个有控制的环境中，利用适宜的设备系统,将经灭菌（或经除菌过滤）的无菌培养基灌装于事先灭菌的容器中，制成无菌药物的过程。该验证是在与无菌灌装生产过程有关的其他验证如：洁净厂房、公用系统（工业用水系统等）、设备（包括蒸汽灭菌柜、隧道式干燥灭菌器等）等验证合格后，且操作人员熟练掌握了岗位SOP后进行的。

采用培养基代替药品进行无菌灌装对无菌工艺进行验证，即用经过湿热灭菌（除菌过滤）的液体胰酪胨大豆肉汤培养基代替产品药液，进行无菌灌装、半加塞操作，灌装后的样品送入冻干箱内放臵产品冻干程序所需时间，再进行压塞、轧盖，然后进行培养观察，以确认无菌灌装工艺的可靠性，以上整个操作过程应模拟正常的产品生产时的最差状态。

培养基灌装作为无菌灌装的模

XXXX有限公司

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无菌检查法适用性试验报告

文件编号：XXXX

XXXX有限公司

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无菌检查法适用性试验报告

起草人_____________ 审核人_____________ 批准人_____________

部门____________ 部门____________ 日期__________ _

日期___________ 日期___________

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1、概述

为本公司主要产品之一，本产品规格为： ，已进行批量生产并已进行工艺验证,由于《中华人民共和国药典》2015年版对无菌检查方法作了修改，其产品的无菌检查方法和培养基发生改变，可能影响检验结果的准确性。为确保检测方法的准确性及适应性、测定方法的可靠性进行验证，根据该产品特性拟采用薄膜过滤法进行无菌检查，并按制定的方法及条件进行试验，根据验证结果判断该产品是否合适采用该方法进行无菌检查。

2、验证依据：《中华人民共和国药典》2015版 四部通则1101无菌检查法。