常用培养基的制备实验原理

常用培养基的制备

技能训练3 常用培养基的制备

常用培养基的制备

实训目标熟悉培养基制备的基本程序 会制备常用的培养基

常用培养基的制备

仪器材料高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、 量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、 营养琼脂培养基(或伊红美兰琼脂培养基、三 糖铁琼脂培养基、SS琼脂培养基、麦康凯琼脂 培养基)等

常用培养基的制备

方法步骤

(一)营养琼脂培养基 (二)血液琼脂培养基 (三)肉汤培养基 (四)半固体培养基

常用培养基的制备

(一)营养琼脂培养基计算 称量 溶化 倒平板或倒试管 灭菌 无菌检验 备用

常用培养基的制备

1.计算：根据营养琼脂培养基的说明书了解营养琼脂粉与水的比 例，一般是1000 ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g,再根据 培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。 营养琼脂粉的量=31.3×15×n/1000 (g) 其中： 15代表一个平板需要营养琼脂约15 ml; n代表要做的培养基平板的数量

常用培养基的制备

2.称量：用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相 应的 蒸馏水的量，要尽量准确。

常用培养基的制备

3.溶化：将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶 化，边加热边搅拌，沸腾时立即从

常用培养基的配制

（一）营养琼脂培养基

【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。

【成分】牛肉膏 3g

NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼 脂 20g

【pH值】7.2±0.2

【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基

【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。

【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g

【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（三）半固体培养基

【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g

【pH值】7.6

【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经 121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（四）营养肉汤培养基

【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成

常用培养基及基本特性

1、RPMI-1640 Medium

RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。 2、Minimum Essential Medium（MEM）

也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。

3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。 5、DMEM/F12

分子实验室常用的培养基配方,和SDS-PAGE缓冲液配方。

五、实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)

组份浓度 100 mg/ml Ampicillin

配制量 50 ml

配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。

IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)

组份浓度 24 mg/mL IPTG

配制量 50 mL

配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。

4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。

X-Gal (20 mg/ml)

组份浓度 20 mg/ml X-Gal

配制量 50 ml

配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光

常用培养基及抗生素配置 1310466559 来源：生物秀知道 浏览次数：1592 网友评论 0 条 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 10g 5g 10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 1 mol/L 氯化钾 20g 5g 0.5g 2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 甘油 12g 24g 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 m

备注：培养基和激素母液配制方法

（1）母液配制时，先向容量瓶中注入1/3定容体积的蒸馏水，再一一称取各种盐放入烧杯中溶解，装入容量瓶，

不得一次称取所有盐，混合溶解！在配制大量母液时，氯化钙最后加入。

（2）200×Fe盐溶液

称取1.39g FeSO4?7H2O溶于水（A液）；称取1.865 g Na2?EDTA溶于热水（B液）； 将A液缓慢倒入正在加热的B液中，加水接近250ml，煮沸，混合液颜色变深，冷却到室温，定容到250ml后,置于棕色试剂瓶内4℃保存。

（3）0.5mg/ml 2,4-D母液的配法

称取50mg 2,4-D，置于小烧杯内；加少量无水乙醇或95%乙醇使之完全溶解； 加水定容至100ml，4℃保存。如果出现沉淀，需要重新配置。

（4）0.5mg/ml α-NAA母液的配法

称取100mgNAA置于小烧杯内；用1N的KOH溶液溶解NAA； 用水定容至200ml，4℃保存。

（5）0.5mg/ml 6-BA母液的配法

称取100mg 6-BA置于小烧杯中；加少量的浓盐酸，用玻棒研磨成糊状，再加入少

量浓盐酸，使之完全溶解；用水稀释并定容至200ml，4℃保存。

（6）100mM乙酰丁香酮（As）

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

实验四一、实验目的

培养基的制备与灭菌

1、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。

2.掌握高压蒸汽灭菌及干热灭菌的方法及注意事项

二、实验原理： 培养基是用人工方法，将多种 物质按微生物生长所需而调制成的一种营养基 质，用来分离和培养微生物。培养基可分为天 然培养基、合成培养基和半合成培养基三类。 根据是否含有凝固剂又可分为液体培养基、固 体培养基(1.8-2.0%)、半固体培养基(0.30.5%),

凝固剂一般是琼脂(洋菜),也有用硅胶与明 胶。一般来说，培养基包括有水份、碳源、 氮源、无机盐类以及生长因素等五大类营养 成份。此外还得有适宜的pH值，一定的渗透 压(即浓度)以及氧化还原电位等。 三、实验材料：三角瓶、试管、烧杯、分装 器、玻棒、天平、药匙、pH试纸，搪瓷杯、 量筒、纱布、棉花、橡皮筋、牛皮纸、角匙、 称量纸、各种生化试剂等 。

1、葡萄糖发酵培养基 蛋白胨 10g NaCl 5g 葡萄糖 10g 水1000mL 1.6%溴甲酚 紫水 pH 7.4-7.6 将蛋白胨、NaCl、葡萄糖加入水中，加热调pH至7.4-7.6, 加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分装试管内倒置一杜氏小管， 塞上硅胶塞，灭菌。 2、乳糖发酵培养基 蛋白胨 20g

组培实验遇到的常规问题

1.有些植物在组培生根阶段会把大量元素和糖减半，我应根据什么来判断是否需要减半？ 答：在组培过程中，我们提起配方往往只局限于激素的配比和添加物的使用，其实对基本培养基的构成和培养条件（温度、光照、湿度、PH等）都属于配方的范畴。在这方面的调整主要是根据实际培养状况灵活调整。在生根阶段，试验证明培养基高渗透势或液体培养基有利于营养素和激素的运转，有利于根的发生和形成质量，因此大部分植物在生根过程需要调整基本培养基的组成。但具体需不需要应该通过对比试验确定。

2.什么是滤纸桥生根？

答：1）滤纸桥生根技术是分化苗直接瓶外生根技术，其作用主要是简化生根环节，提高炼苗成活率，降低组培成本，同时还可以对污染苗进行最大程度的利用。

3.组织培养中出现黄化的原因有几种？

答：黄化是指在组培过程中由于培养基成分、环境、激素、碳水化合物等各种因素引起的幼苗整株失绿，全部或部分叶片黄化、斑驳。这一现象在植物组织培养中比较常见，特别在部分木本花卉中较为常见，引起黄化的主要原因是培养基中Fe的含量不足；各矿质营养不均衡；培养环境通气不良，瓶内乙烯含量升高；激素配比不当；糖用量不足或长时间不转移糖已耗尽；PH值变化过大；培养温度不适；光照不足等。

解决的方