引物二聚体形成的后果

什么是引物二聚体？怎样消除引物二聚体?

是引物的3'端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨性(包括提高退火温度，降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。

减少PCR产物中引物二聚体的方法:

1从引物自身 着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法; 2.可能模板有问题;模板浓度过小，适当加大模板量;

3.Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可 降低它们的浓度; 4.取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引 物二聚体就会消失的;理由:引物可能会发生发夹结构,自身环化等结构,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟可使引物变为单链，以减少二聚体。不过有人认为在 PCR仪上95度变性5min也同样达到目的，而且成功试过通过延长退火时间也可以消除引物二聚体。

5.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可 以增强特异性;

6.PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ

两种定量检测D-二聚体方法的探讨

摘要】目的探讨两种定量方法检测同一标本D-聚体之间的结果比较。方法分别用胶体金免疫渗透法和全自动血凝仪上使用的免疫比浊法检测180例门诊及住院病人标本。结果免疫比浊法测定结果阳性率高于胶体金免疫渗透法。结论 D-二聚体的多种检测方法中，胶体金免疫渗透试验和全自动血凝仪上使用的免疫比浊法都拥有能定量检测、快速、简单、敏感性高等优点，但全自动血凝仪上使用的免疫比浊法相对于胶体金免疫渗透法，易在大多数医院推广使用，有很好的应用前景。

【关键词】 D-二聚体定量检测胶体金免疫渗透法免疫比浊法

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）31-0138-02

随着心脑血管及其他器官血栓性疾病对人们生命威胁的日益加重，医学界对血栓性疾病的研究越来越深入。D-二聚体是交联的纤维蛋白的降解产物，血浆内D-二聚体浓度能够反映体内继发纤溶水平。当体内发生血栓，如深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PE）和弥散性血管内凝血(DIC)时，纤溶酶被激活，大量交联的纤维蛋白在纤溶酶的作用下分解并释放

D-二聚体(D-Dimer)测定

1 测定方法

颗粒增强的免疫比浊法。 2 测定原理

标本中的D-二聚体(D-Dimer)与试剂中包被有抗D-二聚体抗体的胶乳颗粒相遇，发生特异性的抗原-抗体反应，形成抗原-抗体复合物，使溶液的浊度发生改变。该浊度的高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比，待反应完成后测定其浊度，从而使D-二聚体得以测定。 3 标本

枸橼酸盐抗凝血浆, 处理方法见标本处理程序。

稳定性：20 - 25℃ 8小时 4 - 8℃ 4天

-20℃ 6个月

其他：冰冻标本要在37℃温箱中完全溶解，再在室温重稳定15分钟后才能使用。

标本不需要稀释。

混匀标本要避免形成泡沫，标本要在2500g至少离心15分钟。

4 试剂 4.1 试剂

来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。

贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末

R1：打开后机上稳定28天 R2：打开后机上稳定28天

准备：R1:直接使用。

R2直接使用，但是第一次使用和上机后每周要混匀一次。

其他：将R1和R2试剂放入37℃温箱中温育，并且在室温重稳定30分钟，然后

目的探讨分析急性脑梗死患者血清中同型半胱氨酸、C反应蛋白及D二聚体与急性脑梗死发生的关系。方法对本院2010～2011年收治的60例急性脑梗死患者(观察组)和60例健康志愿者(对照组)的血清中同型半胱氨酸、C反应蛋白及D二聚体的含量进行分析比较,并对患者美国卫生研究院卒中量表评分进行分析。结果观察组患者血清中同型半胱氨酸、C反应蛋白及D二聚体的含量显著高于对照组,两

22 3第9第期 0年月 1 7 1卷

临床研究

急性脑梗死患者同型半胱氨酸、 c反应蛋白及 D二聚体的变化研究丁彦博

河南省南阳市中心医院神经内科，河南南阳

4 30 70 0

【要】摘目的探讨分析急性脑梗死患者血清中同型半胱氨酸、应蛋白及 D二聚体与急性脑梗死发生的关系。方 C反法对本院 2 1~ 0 1年收治的 6 0021 0例急性脑梗死患者 (察组 ) 6观和 0例健康志愿者 (照组 )对的血清中同型半胱氨酸、 C反应蛋白及 D二聚体的含量进行分析比较，并对患者美国卫生研究院卒中量表评分进行分析。结果观察组患

者血清中同型半胱氨酸、 C反应蛋白及 D二聚体的含量显著高于对照组，组比较差异具有统计学意义 (两 P<00 ) .5: 其中观察组患者中大面积脑梗死组 ( B组 )者血

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懈怠的后果

当你每天走进单位和离开单位的时候，你是否想过今天你是企业的“正资产”还是企业的“负资产”？不要说你的老板吝啬，也不要说你的企业家财迷，如果一位企业家不能让企业的利润最大化，可以说他是不道德的，乃至于是违法的。有人说为什么呢？请问企业不盈利，企业还能继续发展吗？很明显答案是不能。企业不盈利是否能按时给员工发工资呢？不能，企业不盈利是否能给你社会保障呢？不能 ,企业不盈利是否给员工更好的待遇呢？答案还是不能。因此我们可以看出只有盈利企业才能持续经营才能教出未来的好老板。我们要永远清晰地知道在任何一个领域任何一个行业都要要求自己做到成为企业的正资产，如果说做不到我们宁可辞职。

如果一个人不是企业的正资产，他将很难有尊严。有人说我们的老板不公平，我和某同事犯同样的错误，可是他只批评了某人两句却不但要罚我款,还要我写检查我心里极度不平衡.这该怪谁呢？其实你别怪老板，应该怪你自己，为什么呢？肯定是你的水平和别人有很大差距，不要说老板不公平，老板也是人不是神。人们说力求公正的时候那就意味无法公正，所以才力求。我们的爸妈对我们多好，但是我们还是知道爸妈最喜欢哪个孩子，哪个孩子最乖最懂事爸妈就看哪个孩子比较顺眼，所以路在自己脚下环境是自

慢性肝病患者血浆纤维蛋白产物、抗凝血酶III及D―二聚体

的临床研究

摘要：目的 检测慢性肝病患者的血浆纤维蛋白降解产物（FDP）、抗凝血酶-III（AT-III）以及D-二聚体（D-D）的水平，探讨其变化的临床意义。方法 随机选取我院近年来收治入院的30例慢性肝炎、30例肝硬化以及30例正常体检人员作为研究对象，分别检测其血浆纤维蛋白降解产物、抗凝血酶-III以及D-二聚体水平加以对比分析。结果 三组患者在各项相关指标上均存在显著的差异，P<0.05，有统计学意义。结论 通过对血浆纤维蛋白降解产物、抗凝血酶-III以及D-二聚体水平的检测，可有效判断慢性肝病患者疾病的严重程度，为疾病的诊断以及治疗提供可靠的依据。

关键词：慢性肝炎；肝硬化；血浆纤维蛋白降解产物；抗凝血酶-III；D-二聚体

机体的正常代谢主要依靠肝脏完成，人体内多数的纤溶和抗纤溶因子以及凝血和抗凝血因子均由肝脏产生。慢性肝病发生时，肝脏的代谢功能紊乱，呈现出不同程度的纤溶系统以及凝血系统障碍[1]。本文为了探讨慢性肝病患者纤维蛋白降解产物、抗凝血酶-III以及D-二聚体变化的临床意义，现从我院随机选取慢性肝炎、肝硬化以及正常体检人员各30

例作为研究对象，分别对其进行检测加以对比分析。具体结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本次研究所选研究对象为我院近年来收治入院的30例慢性肝炎患者、30例肝硬化患者以及30例在

常见载体的测序引物：

Primer of Vector:

Vector：Primer(F)；Primer(R)

pACT T7 T3

pACT2 GAL4 AD pACT2-R

pAS2-1 GAL4 BD pAS2-1.R

pB42AD pB42ADF pB42ADR

pBACPAK8 BAC1 BAC2

pBK-CMV T7 T3

PBS(SK/KS)/M13- M13F/T7 T3/M13R

pBV220 PBV220F PBV220R

pCAMBIA 1301(1300) P1 P2

pCAMBIA 2300 M13R(-48) M13F(-47)

PCANTB5E S1/M13R S6

pCAT3-enhancer RVP3 此载体无反向引物

pcDNA3.0 CMV-F/T7 SP6/BGH

pcDNA3.1 T7 BGH

pcDNA4 T7/CMV-F BGH

pcDNA6 T7/CMV-F(J21025在T7前面） BGH

pcDNAII T7 SP6

pCE2.1 M13F M13R

pCEP4 pCEP-F EBV-R

pCF-T M13F M13R

pCI T7（17Base） 此载体无反向引物

pCI-neo T7（1

AFLP(扩增片段长度多态性)分子标记实验

扩增片段长度多态性Amplified fragment length polymorphism（AFLP）是在随机扩增多态性（RAPD）和限制性片段长度多态性（RFLP）技术上发展起来的DNA 多态性检测技术，具有RFLP技术高重复性和RAPD技术简便快捷的特点，不需象RFLP分析一样必须制备探针，且与RAPD标记一样对基因组多态性的检测不需要知道其基因组的序列特征，同时弥补了RAPD技术重复性差的缺陷。同其他以PCR为基础的标记技术相比，AFLP技术能同时检测到大量的位点和多态性标记。此技术已经成功地用于遗传多样性

研究，种质资源鉴定方面的研究，构建遗传图谱等。

其基本原理是：以PCR(聚合酶链式反应)为基础，结合了 RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增)，再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。

一、 实验材料

采用青稞叶片提取总DNA。

二、

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躯体形式障碍的疑病症

迟雅周宝民

躯体形式障碍，各个年龄段的人都有，多见于老年人，青春期少年也有患此病的。教师由于职业的关系,工作长期超负荷,缺乏体育锻炼,精神压力比较大,容易有各种躯体不适的症状，因此，教师患有疑病症的也不鲜见。

一、什么是疑病症

疑病症是最常见的躯体形式障碍之一。疑病症的核心表现是对自己患有一种严重疾病的可能性的焦虑或者是恐惧。疑病症病人没有任何真正的生理疾患，他们只是坚信自己要得或者是已经得了一种严重的疾病，从而导致焦虑或者是恐惧。有学者认为，疑病症本质是一种焦虑障碍。研究显示，疑病症与焦虑障碍，尤其是惊恐发作，具有很多类似的特征。因为焦虑或者是恐惧，疑病症患者会对自己的身体状况过分关注，便导致了对自己身体生理现象和感觉的曲解，认为某种生理现象或者是感觉即是疾病的征兆或表现。

我们需要注意的是，疑病症病人并不是在假装有病。他们确确实实感受到了自己所报告的痛苦，或者是自己真真切切地害怕马上就要受到可怕疾病的侵袭。此类病人深信自己的恐惧或者是焦虑既合情又合理，对于别人的质疑，他们非常困惑不解。

二、疑病症的临床表现

授课：XXX

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出于对自己身体状况的担忧，疑病症病人因这些症

PCR 引物设计的原则和要点

PCR 引物设计的原则和要点

http://www.77cn.com.cn 2005-5-13 9:13:57 来源：生物中国人

引物设计有3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。引物设计应注意如下要点：

1 引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。

2 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3 个以上的连续碱基，如GGG 或CCC，也会使错误引发机率增加[2]。 3 引物3’端的末位碱基对Taq 酶的DNA 合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A 的错配效率明显高于其他3 个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基A[3][4]。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR 反应失败。5’端序列对PCR 影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物[2]。 4 引物序列的GC 含量一般为40-60