细胞培养技术

一．物品准备

培养室的灭菌：

1. 定期打扫培养室：每周打扫一次，先用自来水拖地，擦桌面，超净工作台等，然后用3‰

的来苏或新洁尔灭擦拭。

2. 二氧化碳培养箱的灭菌：先用3‰的新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精或0.5%过氧乙酸擦

拭，用紫外灯照射。

3. 实验前打开紫外灯照射30分钟。

4. 试验后用75%酒精3‰的新洁尔灭擦拭超净工作台，边台，倒置显微镜的载物台，打开

紫外灯照射30分钟。

5. 实验人员的实验准备：肥皂洗手，穿上隔离衣，戴好帽子，口罩，换上入室拖鞋。戴上

手套，用75%酒精棉球擦拭双手。 无菌操作演示：

1. 凡带入超净工作台的酒精，PBS，培养基，胰蛋白酶的瓶子均要用75%的酒精擦拭瓶子

外面。

2. 靠近酒精灯火焰操作。 3. 器皿使用前必须过火灭菌。

4. 继续使用的器皿（如瓶盖，滴管）要放在高处，使用时仍要过火。 5. 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻，准确，如吸管不能碰到废液缸。 6. 吸取两种以上的液体时，要注意更换吸管，防止交叉污染。 常用物品准备：

1. 玻璃吸管：实验室常用的玻璃吸管，粗的一端要用棉花盖上，防止吸液时液体进入吸头

而造成污染。再将其装入吸管筒。

2. 培养皿：要用专用的器皿装好或用牛皮纸包好再进行消毒。

AEP对LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型抗炎实验

一、试剂与仪器 （一）细胞系 RAW264.7。 （二）试剂 胎牛血清

DMEM HyClone，美国 10000 U/mL 青霉素/链霉素Gibco，美国

DMSO Sigma，美国 lipopolsaccharide Sigma，美国 甲基四唑蓝(MTT) Sigma，美国 对氨基苯磺酸 Sigma，美国 N-α-萘乙二胺 Sigma，美国 （三）仪器 超净台 酶标仪

CO2恒温细胞培养箱 显微镜 离心机

（四）供试品配置

LPS 溶液配置：称取 LPS 粉末 5 mg，溶于 1 mL DMSO 中，得 5 mg/mL 母液。用时将母液用培养基稀释至 2 μg/mL（DMSO＜0.1%）。

MTT 溶液配置：称取 MTT 50 mg，溶于 10 mL PBS

——从最基础的地方教起,一步一步详细介绍细胞培养技术,非常好的开门教程

细胞培养从头学

——从最基础的地方教起，一步一步详细介绍细胞培养技术，非常好的开门教程

常用设备

准备室的设备：

单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：

液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

无菌操作

无菌室的灭菌：

1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射

3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟

4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔

山东大学实验报告 2014/11/4

姓名：XX 系年级：2013级XX班 学号：201300XXXXXXX 实验题目: 动物细胞培养 同组者: XXXXX 动物细胞培养技术

【实验目的】

1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养； 2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；

4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率；

【实验原理】

（一）. 动物细胞培养技术

动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。

细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用

细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；(2).观察到的结果有时难以正确

山东大学实验报告 2014/11/4

姓名：XX 系年级：2013级XX班 学号：201300XXXXXXX 实验题目: 动物细胞培养 同组者: XXXXX 动物细胞培养技术

【实验目的】

1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养； 2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；

4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率；

【实验原理】

（一）. 动物细胞培养技术

动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。

细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用

细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；(2).观察到的结果有时难以正确

鸡胚培养

第一节 鸡胚接种

一、鸡胚的结构

鸡胚是正在发育的活的机体，组织分化程度低，细胞代谢旺盛，适于许多人

类和动物病毒的生长增殖，是常用的病毒分离培养方法之一（衣原体、立克次体的分离亦用鸡胚）。目前，鸡胚在正粘病毒、副粘病毒、痘病毒、疱疹病毒及脑炎病毒，尤其在禽类病毒的研究上应用较多。可用于病毒的分离、鉴定，抗原和疫苗制备，以及病毒性质的研究等。虽然随着组织培养技术的不断发展，不少病毒已不再用鸡胚来分离培养，但对某些病毒来说，鸡胚仍是一种不可缺少的培养手段。鸡胚培养的优点是，来源充足，价格低廉，操作简单，无需特殊设备或条件，易感病毒谱较广，对接种的病毒不产生抗体等。当然，鸡胚培养也有其缺点，即除痘斑和鸡胚死亡是特异性感染指征外，多需用第二试验系统来测定病毒存在与否；非 SPF 鸡胚，亦可能含有对某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、霉形体、鸡白血病等病毒。因此，用鸡胚分离培养病毒时，必须考虑这些问题。原则上应使用非免疫蛋来孵鸡胚，最好用 SPF 鸡胚。

一般说来，孵育至 8-14 天的鸡胚最有利于病毒的生长，因为此阶段鸡胚发

育日趋完善，各种脏器均已形成，已能经受接种物的适当刺激，同时胚胎细胞幼嫩，骨胳不健全，还未长出羽毛，很利于

动物细胞工程

其它动物细胞工程的基础动物细胞培养 动物 细胞 工程 常用 技术 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体

学习目标：【知识能力】1、动物细胞培养的过程、条件及应用2、应用细胞的基础知识，分析细胞工程的理论基础

【情感态度与价值观】1、讨论细胞工程技术的社会意义 2、认同细胞学基础理论研究与技术开发之间的关系

重点难点【重点】

动物细胞培养的过程及条件。 用动物体细胞核移植技术克隆动物的 过程。 【难点】 用动物体细胞核移植技术克隆动物的 过程。

–思考与回忆： 1、动物细胞全能性特点？

随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制， 分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。

2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞 发育成动物个体？

不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中， 伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养 条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功 能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细 胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。

3、动物的细胞培养的理论依据(原理)? 细胞增殖

动物细胞培养的应用和概念：1、概念：动物细 胞培养就是从动物 有机体中取出相关 的组织,将它分散 成单个细胞,然后, 放在适宜的培养基 中,让

2.1.2《植物细胞工程的实际应用》课件(新人教版选修3)

课件邮箱：hsy09ji@ 密码：hy091214

2.1.2《植物细胞工程的实际应用》课件(新人教版选修3)

动物 细胞 工程 常用 技术

动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体

其中动物细胞培养技术是其他 动物细胞工程技术的基础

2.1.2《植物细胞工程的实际应用》课件(新人教版选修3)

2.1.2《植物细胞工程的实际应用》课件(新人教版选修3)

动物细胞培养概念：动物细胞培养 就是从动物机 体中取出相关 的组织,将它分 散成单个细胞, 然后,放在适宜 的培养基中,让 这些细胞生长 和增殖。

2.1.2《植物细胞工程的实际应用》课件(新人教版选修3)

1、动物细胞培养过程动物组织细胞间隙中 含有一定量的弹性纤 维等蛋白质，将细胞 网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织 和器官。遗传物质 未改变

动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官 单个细胞(水解弹性纤维)

胰蛋白酶

加培养液

细胞悬浮液 原代培养 10代细胞

细胞株

50代细胞遗传物质 已改变

传代培养

细胞系 无限传代

2.1.2《植物细胞工程的实际应用》课件(新人教版选修3)

1.动物细胞的培养过程取动物器官 和组织 幼龄动物 剪碎组织

胰蛋白酶处理

动物细胞工程

其它动物细胞工程的基础动物细胞培养 动物 细胞 工程 常用 技术 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体

学习目标：【知识能力】1、动物细胞培养的过程、条件及应用2、应用细胞的基础知识，分析细胞工程的理论基础

【情感态度与价值观】1、讨论细胞工程技术的社会意义 2、认同细胞学基础理论研究与技术开发之间的关系

重点难点【重点】

动物细胞培养的过程及条件。 用动物体细胞核移植技术克隆动物的 过程。 【难点】 用动物体细胞核移植技术克隆动物的 过程。

–思考与回忆： 1、动物细胞全能性特点？

随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制， 分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。

2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞 发育成动物个体？

不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中， 伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养 条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功 能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细 胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。

3、动物的细胞培养的理论依据(原理)? 细胞增殖

动物细胞培养的应用和概念：1、概念：动物细 胞培养就是从动物 有机体中取出相关 的组织,将它分散 成单个细胞,然后, 放在适宜的培养基 中,让

你还在为没有做过细胞培养实验而烦恼吗？你还在为做细胞实验而痛苦吗？看了这个《细胞培养的有关名词及其概念》相信一定会释疑我的烦恼

细胞培养的有关名词及其概念

1．原代培养（primary culture）

直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。这种培养称之为原代培养。

2．传代培养（subculture）

细胞从一个培养皿以1：2或1：2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养，这种培养称之为传代培养。

3． 悬浮培养（suspension culture）

细胞培养的一种类型。培养时通过一特殊的装置，使细胞瓶按一定的速度不断地转动，使细胞始终处于悬浮状态中进行增殖。

4．克隆（clone）

克隆指的是从一个细胞靠有丝分裂获得的一个细胞群体（population）。

5．细胞系（cell line）

在第二届细胞和组织培养专题讨论会上提出细胞系的概念为“原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成。如果不能继续传代或传代数有限，可称有限细胞系（finite cell line），如果可以连续传代，则可称为连续细胞系（continous cell line）。以