外周血单个核细胞的分离结果

论文

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论著

Ｂ淋巴细胞刺激因子及其受体ＢＡＦＦ．Ｒ在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

何志翔蔡小燕林小军许艳丽唐莼叶静华秦曙光傅君舟

【摘要】目的探讨Ｂ淋巴细胞刺激因子（ｅｌｙｓ）＆其受体ＢＡＦＦ－Ｒ在系统性红斑狼疮（ｓＬＥ）患者外周

血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中的表达情况及临床意义。方法应用流式细胞仪技术，检测９０例ＳＬＥ患者ＰＢ ＭＣｓ中Ｂｌｙｓ及其受体ＢＡＦＦ－Ｒ的表达，井与４５例健康志愿者检测结果进行比较。分析Ｂｌｙｓ及ＢＡＦＦ－Ｒ的表达与ＳＬＥ病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系。结果①ＳＥＥ患者ＰＢＭＣｓ中Ｂｌｙｓ及ＢＡＦＦ—Ｒ的表述百分率比健康对照组高（均Ｐ＜０．００１）。其中，活动期和稳定期ｓＬＥ患者Ｂｌｙｓ和ＢＡＦＦ－Ｒ的表达率均高于健康对照组（Ｐ＜０．００１或Ｏ．０１）；活动期和稳定期比较，Ｂｌｙｓ的表达较高（Ｐ＜Ｏ．０５），而ＢＡＦＦ－Ｒ的表达无统计学差异。②ＳＬＥ患者ＰＢＭＣｓ中Ｂｌｙｓ的表达水平与ＳＬＥ疾病活动指数评分呈正相关（ｒ＝０．７２８，Ｐ＜０．００１），与免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ呈正相关（ｒ＝０．６９１，Ｐ＜０．００ｌ和ｒ＝０．４５３，Ｐ＜０．０１），与补体ｃ３、ｃ４呈负相关（ｒ＝一０．

目的 探讨猪外周血单个核细胞(PBMC)最佳分离条件,为寄生虫免疫学研究提供有效的方法。方法使用猪淋巴细胞分离液,在不同离心转速和时间条件下分离猪PBMC,观察所得云雾状PBMC层的厚度,计算细胞得率及细胞活力,以确定猪淋巴细胞分离液分离猪PBMC的最佳实验条件。同时采用文献报道的人淋巴细胞分离液分离猪PBMC的分离条件(1500r／min,30min)分离猪PBMC,比较两者分离PBMC

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9 12

中国血吸虫病防治杂志 2 0 0 7年第 1第 3 9卷期 C i JS hsoC nrl 0 7Vo.9 N . hn c i o t 0, 11, o 3 t o2

[章编号] 1 0—6 1 20 ) 30 9— 4文 0 56 6 (0 7 0—1 20

论著

Fcl密度梯度离心法分离猪外周血 iol单个核细胞条件的探讨张素华，林丹丹，张关娟，陈雪松，徐进梅，单昊，吴观陵，海玮吴[要]目的摘的方法。方法

探讨猪外周血单个核细胞 (B P MC)佳分离条件，寄生虫免疫学研究提供有效最为使用猪淋巴细胞分离液，不同离心转速和时间条件下分离猪 P MC,察所得云在 B观

雾状 P MC层的厚度，算细胞得率及细胞活力， B计以确定猪淋巴细

小鼠肠粘膜单个核细胞的分离和纯化 一．材料： （一）试剂：

1×Phosphate-buffered saline (PBS)、1×HBSS、FBS、100 U/ ml青霉素, 100 U/ ml链霉素、细胞分离液（Percoll） （二）器材：

剪刀、镊子、培养皿、40um和100um的细胞筛、15ml和50ml离心管、巴氏管 （三）试剂配制：

1）预消化液--HBSS (Hanks Balanced Salt Solutions)：5mM EDTA (100*)和1mM DTT(2000*)。

2）消化液：将0.05 g collagenase D (Roche)、0.05 g DNase I (Sigma)和0.3 g dispase II (Roche)溶解于100ml 1*PBS中。临用临配，配制后37℃孵育几分钟。 3）FACS缓冲液：1*PBS+3% FBS (vol/vol)。

4）40% Percoll(vol/vol)(100mL)：42.01 ml Percoll分离液（Sigma，密度为 1.124 g/ml）+57.99ml 1*PBS。

5）80% Percoll(vol/vol

运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测系统性红斑狼疮(SLE)患者和正常对照组外周血单个核细胞中Toll样受体9(TLR9)mRNA和蛋白的表达水平。结果显示,SLE活动期患者外周血单个核细胞中TLR9 mRNA和蛋白的表达水平踞显高于SLE缓解期患者和正常对照组(P〈0.05),后两者间比较亦有统计学差异(P〈0.05)。认为TLR9与SLE疾病的活动性呈一定的线性相关关系。

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山东医药 20 0 8年第 4 8卷第 1期

制，分地显示了 C T更充 A O抢救甲亢危症高效、全安的优势。

报，05,14)3 53 6 20 1 (:0 - . 0

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[考文献】参[]欧阳芳， 1温先勇，徐玲， Gae病死亡的常见病因[]中国现等. rvs J.代医学杂志，06,6 1 ) 30 -0 3 2 0 1 (9:0 130 .f]苏会璇 . 2甲状腺机能亢进症合并感染的调查[]海南医学院学 J.

d edarn l y i: p a f no i re J .E r n

　　据介绍，北京市积分落户工作分为申报、核查、复查、公示及落户办理4个阶段。其中，7月31日至9月4日为复查阶段，在此期间，以配偶自有住所、在京投资企业纳税积分的，需现场审核夫妻关系证明、投资企业纳税情况;对合法稳定住所指标自有住所信息、创新创业指标奖项信息、荣誉表彰指标荣誉称号信息的初核结果有异议的，可提出一次复查申请。因此，目前系统显示的并非具体分值，而是各部门对各项指标是否有效的初核结果，其中配偶自有住所、在京投资企业纳税情况和职住区域指标显示仍为待审核状态。申请人的最终得分需待现场审核和复查工作全部完成后才能得出，预计将于四季度公布查询。对于积分指标不涉及现场审核和复查的申请人，在此期间无须任何操作，耐心等待四季度公布积分结果即可。

　　北京市人保局积分落户服务中心提示，7月31日至9月4日期间，申请人需现场审核夫妻关系证明、投资企业纳税情况的，请提前在市人力社保局“积分落户服务专栏”下载填写《授权委托书》，并按照专栏提示准备好相关材料交单位经办人员。其中，申请人在京投资

实验六 人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备

实验目的

1、了解人体外周血淋巴细胞短期培养的原理及方法。 2、初步掌握人外周血淋巴染色体的制备技术。 实验用品

1、器材：超净工作台（或无菌接种箱）、光学显微镜（附照相装置）、隔水式恒温培养箱、干燥箱、水平式离心机、冰箱、恒温水浴箱、高压蒸气消毒锅、真空泵（或电动吸引器）、10ml刻度离心管、10ml培养瓶（可用环磷酰胺药瓶代）、2ml注射器、吸管、滴管、试管架、三角烧瓶、染色缸、酒精灯、各种试剂瓶、载玻片、镊子、吸水纸、洗耳球、搪瓷盘、铝制饭盒、消毒用酒精棉球与碘酒棉球等。

2、材料：人外周血

3、试剂：RPMI l640培养液（含10~20％小牛血清）、碳酸氢钠（AR）、PHA、青霉素、链霉素、肝素、5％NaHCO3溶液、1mol／L HCl、三蒸水或双蒸水、0.075 mol／L KCl、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液，pH6.8的磷酸缓冲液。

实验原理

据测定，健康成年人体内的淋巴细胞总数约有500×109，其中约有2％在外周血中循环。在外周血的淋巴细胞中，以小淋巴细胞为主（每毫升血中的含量可达1~3×106个）。在通常情况下，它们都处于间期的G0或G1期，所以很难见到正在分裂的淋巴细

外周血细胞形态学检验及技巧 卫生部北京医院血液科 郑天林

卫生部临床检验中心 彭明婷 谷小林 陆红

一． 血液学及血细胞形态学临床应用：

● 是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验学的基础工作。

● 血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速简捷的要求。

● 近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞遗传学、融合基因、造血干细胞及其细胞因子、骨髓造血微环境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系细胞发生及其疾病表现，细胞增殖动力学与细胞凋亡以及骨髓组织病理学应用，推动了血液的临床与实验室的新知识迅猛发展。

● 当前血液病不能单凭临床与形态学 作出 诊断，必须以临床和血细胞形态学为基础，将免疫学、细胞遗传学及分子生物学新知识、新技术应用到血液学中，构成现代临床血液学与分子生物学诊断技术，弥补形态学的经验性与主观性带来负面缺陷，才能提高血液病的诊断与治疗水平。

● 进入 90 年代以来，国内外采用多学科联合技术综合诊断技术与方案：

○ FAB-AL （ 1976 ）、 NCL （美国国家癌症研究所）对 FAB-AL 分型的补充 （ 1995 ）、 AL-MIC 分（类）型， MIC 及

实验四十五 大蒜细胞SOD的提取与分离

一. 实验目的

学习超氧化物歧化酶的提取与分离方法

二. 实验原理

超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它

－－

可催化超氧负离子（O2）进行歧化反应，生成氧和过氧化氢：2O2＋H2＝＝O2＋H2O2。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲液提取。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。

三. 实验方法及步骤

1．组织或细胞破碎

称取5g左右大蒜蒜瓣或大蒜细胞，置于研磨器中研磨，使组织或细胞破碎。 2．SOD的提取

将上述破碎的组织或细胞，加入2－3倍体积的0.05mol/L,pH7.8的磷酸缓冲液，继续研磨搅拌20min，使SOD充分溶解到缓冲液中，然后用离心机在5000rpm，离心15min，弃沉淀，得提取液。 3．除杂蛋白

提取液加入0.25倍体积的氯仿－乙醇混合溶剂搅拌15min，5000rpm离心15min，去杂蛋白沉淀，得粗酶液。 4．SOD的沉淀分离

将上述粗酶液加入等体积的冷丙酮，搅拌15min,5000rpm离心15min，得SOD沉淀。 将SOD沉淀溶于0.05mol/L,pH7.8的磷

人教版普通高中课程标准实验教科书《生物》（1）必修分子与细胞第三章第三节

细胞核──系统的控制中心

张荣政 太原师范学院

教学目标

知识：1、阐明细胞核的结构和功能以及结构和功能相适应的关系。 2、尝试制作真核细胞的三维结构模型。 3、认同细胞核是生命系统的控制中心。

能力：1、培养学生的对比、分析和归纳的能力。 2、培养学生的识图能力，动手制作能力。

情感态度与价值观：培养学生树立生物体结构和功能、局部与整体统一的观点。 教学重点

1、细胞核的结构和功能。

2、制作真核细胞的三维结构模型。 教学难点

理解细胞核是生命系统的控制中心。 教学用具 多媒体 教学过程 教学环节 教师活动 学生活动 教学意图 细胞内部像一个繁忙的工厂，在细胞质中有许多如线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体、核糖体、溶酶体等，这些都是细胞器。我们知道这些细胞器内部进行着有条不紊的生物化学反应，并且彼此之间互不干扰。那为什么细胞能够如此精确而有序的进行这些 生物化学反应呢？一个工厂要正常运行，必须要有厂是整个工厂的核心，那么在细胞这个工厂中，它的灵魂，控制中心是什么呢？所有的细胞都有细胞核

第3节 细胞核——系统的控制中心

[学习目标]1.阐明细胞核的结构和功能。（重点）

2.尝试制作真核细胞的三维结构模型。

3.认同细胞核是生命系统的控制中心。

环节1：自主学习·基础知识

一、细胞核的分布与结构

1.分布

(1)_________细胞无细胞核。

(2)高等植物_________细胞无细胞核。

(3)哺乳动物成熟的_________无细胞核。

2.结构（如图）

(1)由图可知[_____] _________与[_____] 核膜

直接相连，使细胞质与核内杨质的联系更为紧密。

(2)[3]染色质是遗传物质的主要载体，主要由

_________和_________组成。

(3)图中[2]的功能是实现核质问频繁的_________和_________。核糖体的形成与

[____]_________有关。

思考交流

科学家将棕鼠卵丘细胞的核物质注入内部已经抽空的黑鼠卵细胞内，激活以后，移入白鼠的子宫，白鼠最后产下一只克隆鼠。这只克隆鼠的体色和性别是什么？

二、细胞核的功能与模型建构

1.将下列探究实验名称与结论（连线）

① 美西螈核移植

a.细胞核控制细胞形态构建 b.皮肤的颜色由细胞核控制 c.细胞分裂和分化由细胞核控制 d.应激性由细胞核控制 ① 螈螈受精卵横