细胞传代污染原因

交流

养成良好的无菌操作的习惯拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。

决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！

我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）

另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！

还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！ 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

1. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。

4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

2. 1.注

交流

养成良好的无菌操作的习惯拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。

决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！

我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）

另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！

还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！ 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

1. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。

4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

2. 1.注

1.HePG2细胞和L-02细胞的传代：

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。

细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，3分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以在显微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，则要终止消化了。

HepG2细胞株的传代经验：

首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%，不需要长满，就准备传代。倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，我用的是25平方厘米的培养瓶，加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶－0.02íTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤，再用一次性过滤器过滤除菌，再分装成1ml的小包装，刚好每次用完一个，避免每次反复冻存，会使胰酶的活性下降），加入的量以刚好盖满瓶

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结

实验一：细胞传代培养

材料：15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10?S的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等

步骤：（以下均在超净台内，酒精灯旁操作）（SKOV-3）

1、打开超净台，将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10?S的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。

2、取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中，细胞成梭形连接，贴壁良好），弃旧培养基，PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。

3、用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入，然后放平培养瓶，使贴壁细胞与trypsin充分接触，置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长，以免损伤细胞）。

4、往培养瓶中加入1640 1~2ml，随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中，离心1000 r/min，5min。

5、弃上清液，加入少量10?S的1640培养基使成细胞悬液。

6、分装，按1:2~3传代，每瓶4~5ml。倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

人结肠癌ＨＣＴ１１６细胞传代培养的简易方法－

２＊

王　倩１，徐云丹１，赵　刚１，

（湖北中医药大学基础医学院，湖北武汉４１．３００６５；

）湖北中医药大学中药资源与复方教育部重点实验室，湖北武汉４２．３００６５

摘　要：目的：针对人结肠癌ＨＣ建立一种简Ｔ１１６细胞在体外培养时常出现部分细胞聚团生长的特性，－

——水平震荡法。方法：采用简单高效的水平震荡方法替代胰酶消化法对易的细胞传代培养方法—

利用水平震荡方法传代后的细胞在新瓶中可以正常贴壁。２ＨＣＴ１１６细胞进行传代培养。结果：４ｈ和－

该方法无４８ｈ观察到胰酶消化法传代的细胞生长情况与水平震荡法传代的细胞未见明显差异。结论：

需使用胰蛋白酶，避免了胰酶对细胞的损伤作用，而且操作简便，降低了实验成本和污染的风险。水平震荡传代法可以替代胰酶消化法作为ＨＣＴ１１６细胞的简易传代方法。－关键词：传代培养；水平震荡法ＨＣＴ１１６细胞；－

（）中图分类号：Ｒ３２９．２＋８　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３２１９７２０１３０２００３５０２－－－

ＡＳｉｍｌｅＭｅｔｈｏｄｏｆＨｕｍａｎＣｏｌｏｎＣａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ１１６ＣｅｌｌｓＳｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　　　　　　　－　ｐ

１１１２

，，ＷａｎＱｉａｎＸｕＹｕｎｄａ

重金属污染物在土壤中的传播特征

重金属系指密度4.0以上约60种元素或密度在5.0以上的45种元素。砷、硒是非金属，但是它的毒性及某些性质与重金属相似，所以将砷、硒列入重金属污染物范围内。环境污染方面所指的重金属主要是指生物毒性显著的汞、镉、铅、铬以及类金属砷，还包括具有毒性的重金属锌、铜、钴、镍、锡、钒等污染物。 随着全球经济化的迅速发展，含重金属的污染物通过各种途径进入土壤，造成土壤严重污染。土壤重金属污染可影响农作物产量和质量的下降，并可通过食物链危害人类的健康，也可以导致大气和水环境质量的进一步恶化。因此引起世界各国的广泛重视。目前，世界各国土壤存在不同程度的重金属污染，全世界平均每年排放Hg约1.5万 t、Cu为340万 t、Pb为500万 t、Mn为1500万 t、Ni为100万 t[1]。中国北方大城市的蔬菜基地和部分商品粮基地也存在着不同程度的重金属污染，如北京、天津、西安、沈阳、济南、长春、郑州等地；。

南方相对较轻，如福州、宁波、上海、武汉、成都等地。土壤重金属污染将会造成生态系统的严重破坏。从中国土壤资源状况看，到2000年底中国人均耕地仅为0.1 hm2，而且随着今后中国经济社会的发展如生态退耕、农业结构调整及自然灾害

细胞培养常见污染的判别及应对措施

2011-01-02 10:19:04| 分类： 实验 | 标签：污染 无菌 细胞 培养基 灭菌 |字号大中小 订阅

一、避免细胞培养污染的措施：

污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是

可以避免 的：

1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再

用酒精擦台面，紫外照20分！

2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大

褂）。

5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的

培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

中国耕地污染现状及对策

土地污染是指土地因受到采矿或工业废弃物或农用化学物质的侵入，恶化了土壤原有的理化性状，使土地生产潜力减退、产品质量恶化并对人类和环境造成危害的现象和过程。据初步调查显示，因污水灌溉和农药、化肥不合理使用，工业废渣和城市生活垃圾随意堆放等因素，我国约有1000万公顷耕地受到不同程度的污染，其中矿区污染土地达200万公顷，石油污染土地约500万公顷，固体废弃物堆放污染土地约5万公顷。土地污染具有很大的危害性，对我国的经济、环境、社会等各方面都产生了深远的影响。 1.中国耕地污染现状

土壤污染主要分为三个类型的污染，分别是化学方面、物理方面和生活方面，在这些污染类型中化学方面的污染是最普遍、最严重和最复杂的．这些污染物进入土壤的途径多种多样，主要途径包括污水灌溉、废弃物堆放、农药和化肥的过分使用等．据统计，农村工业废弃物和建筑废弃物年总量达6.5 亿吨，工业“三废”和城乡垃圾对村庄的污染正由局部向整体蔓延，农村的污染排放已经占到全国的“半壁江山”，农村地区环境污染和生态恶化继续加重，水、空气、土壤污染十分突出，环境不安全隐患增多。据环保部调查，全国约有1000万公顷 耕地受到“三废”危害，其中遭受大工业“三废”污染的耕地达4