微生物的基本操作

培养基的制备

培养基概念：

是指以液体、半固体或固体形式，包含天然或合成成分，用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。 培养基的分类：

按功能分类：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基。

按物理性状分类：液体培养基、固体培养基、半固体培养基。 液体培养基：所配制的培养基是液态的，这种培养基被用来微生物的增菌和生长状态观察。

固体培养基和半固体培养基：在液体培养基中加入适量的凝固剂制成成固体培养基和半固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂。固体培养基琼脂用量1.5-2%，半固体培养基琼脂用量在0.5～1%之间。固体培养基用作微生物的分离、鉴定、计数、保藏等。半固体培养基被用来观察微生物的动力和保藏菌种。 今天给大家展示一下各种培养基的制备。 培养基制备的基本过程：

调配成分、溶解、校正pH、分装、灭菌、质量检查和保存 所需物品：试剂、锥形瓶、天平、量筒、微波炉、高压蒸汽灭菌器、

玻璃试管、玻璃平板、接种工具。 （1） 调配成分：

在锥形瓶或大容量烧瓶中依次加入蒸馏水200ml， 1％蛋白

微生物检验操作规程

1. 目的

建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。 2. 范围

适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。 3. 职责

3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程； 3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。 4. 操作规程

4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤

4.1.1 一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。

4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。

4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。 4.2 器皿的包扎

4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。

4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。 4.2.3 吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。 4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。 4.3消毒和灭菌：

微生物检验操作规程

1. 目的

建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。 2. 范围

适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。 3. 职责

3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程； 3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。 4. 操作规程

4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤

4.1.1 一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。

4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。

4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。 4.2 器皿的包扎

4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。

4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。 4.2.3 吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。 4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。 4.3消毒和灭菌：

微生物检验操作规程

1. 目的

建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。 2. 范围

适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。 3. 职责

3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程； 3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。 4. 操作规程

4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤

4.1.1 一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。

4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。

4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。 4.2 器皿的包扎

4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。

4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。 4.2.3 吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。 4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。 4.3消毒和灭菌：

微生物检验操作规程

1. 目的

建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。 2. 范围

适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。 3. 职责

3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程； 3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。 4. 操作规程

4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤

4.1.1 一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。

4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。

4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。 4.2 器皿的包扎

4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。

4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。 4.2.3 吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。 4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。 4.3消毒和灭菌：

微生物学假期综合教学实习

实习时间： 2013年 6 月 25 日 开始

实习班级： 应技1101-1102 人

生命科学技术学院微生物教研室

微生物教学实习基本实验流程

第 配制牛肉膏固体培养基、3倍和单倍乳糖发酵液， 一准备无菌水及各种器皿、器材 天

）

灭菌

采集样品

（

第按要求做10倍梯度稀释

二

天

）配制伊红美测样品的细菌总数： 乳糖培养基初发酵试验：

样品的稀释液涂布按实验要求将稀释液接入兰固体和E.C液 牛肉膏平板 3倍、单倍乳糖发酵培养液 体培养基

37OC培养 37OC培养 灭菌

数平板上菌落看乳酸发酵 倒伊红美兰平板 （数，计算样品的细结果，查MPN表 第菌总数 三 检验乳酸发酵管中产酸产气的样品天 ）

伊红美兰平板划线 接E.C管

37OC培养 44.5OC培养

（挑有金属光泽、看结果，鉴定是 第

无光泽的菌落 否有粪大肠杆菌 四

天接单倍乳糖发酵管 革兰氏染色 ）

37OC培养

看复发酵结果 （ 第 综合本实验的六项结果（细菌总数、乳糖管初发酵（MPN）、伊红美兰平板鉴定、 五E.C平板鉴定、革兰氏染色、乳糖复发酵），写出实验报告 天清洗器材，并做好室内清洁。 ） （

微生物学综合教学实习

学习目

第四章 病毒

1 病毒具有哪些特点？病毒壳体有哪几种对称类型？

答：①体积微小 ②无完整的细胞结构，主要成分是核酸跟蛋白质 ③严格活细胞内寄生 ④对干扰素敏感，对抗生素不敏感 ⑤繁殖方式是复制，且具有感染性；有螺旋对称型、二十面体对称型、复合对称型。

2 什么是病毒的一步生长曲线？包括几个期？各有何特点？

答：主要以烈性噬菌体为例，一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线，反映了每种噬菌体的三个重要的特征参数：潜伏期、裂解期的长短及裂解量。包括潜伏期、裂解期和平稳期，潜伏期细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段，裂解期宿主菌迅速裂解、溶液中噬菌体颗粒急速增加的阶段，平稳期宿主细胞已经全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高峰的时期。

3 以噬菌体为例，说明病毒的增殖过程。

答：①吸附和侵入：噬菌体感染细菌时，其尾部为吸附器官，能识别宿主菌表面的特殊受体，然后分泌酶类溶解细胞壁，使细胞壁出现小孔，讲头部的核酸注入宿主菌内，蛋白质外壳留在宿主菌细胞外；②生物合成：进入宿主菌内的噬菌体核酸，首先转录翻译产生早期蛋白，进行晚期转录并复制子代核酸，再转录产生噬菌体的结构蛋白，子代核酸和蛋白质按一定程序装配成完整的子代噬菌体颗粒；③当宿主菌细胞

第四章 病毒

1 病毒具有哪些特点？病毒壳体有哪几种对称类型？

答：①体积微小 ②无完整的细胞结构，主要成分是核酸跟蛋白质 ③严格活细胞内寄生 ④对干扰素敏感，对抗生素不敏感 ⑤繁殖方式是复制，且具有感染性；有螺旋对称型、二十面体对称型、复合对称型。

2 什么是病毒的一步生长曲线？包括几个期？各有何特点？

答：主要以烈性噬菌体为例，一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线，反映了每种噬菌体的三个重要的特征参数：潜伏期、裂解期的长短及裂解量。包括潜伏期、裂解期和平稳期，潜伏期细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段，裂解期宿主菌迅速裂解、溶液中噬菌体颗粒急速增加的阶段，平稳期宿主细胞已经全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高峰的时期。

3 以噬菌体为例，说明病毒的增殖过程。

答：①吸附和侵入：噬菌体感染细菌时，其尾部为吸附器官，能识别宿主菌表面的特殊受体，然后分泌酶类溶解细胞壁，使细胞壁出现小孔，讲头部的核酸注入宿主菌内，蛋白质外壳留在宿主菌细胞外；②生物合成：进入宿主菌内的噬菌体核酸，首先转录翻译产生早期蛋白，进行晚期转录并复制子代核酸，再转录产生噬菌体的结构蛋白，子代核酸和蛋白质按一定程序装配成完整的子代噬菌体颗粒；③当宿主菌细胞

XXX人民医院检验科微生物室 标准操作文件 编写者：XXX XXX 审核者：XXX 文件编号：WSW-SOP-007 版本号：2007 第1次修改 修订日期：2012年1月15日 页码：第 1 页 共 2 页 穿刺液标本细菌学检验标准操作规程

1．目的

规范穿刺液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围

穿刺液标本培养。 3．标本

3.1 标本类型 胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。

3.2 标本采集 采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约2 ml，注入无菌试管，或抽取穿刺液1～2m1注入多功能体液培养瓶，或抽取穿刺液2～5 ml注入血培养瓶，混匀，立即送检。如怀疑厌氧菌感染，应做床边接种或接种运送培养基。

3.3 标本拒收标准

3.3.1 标本标识与化验申请单不符。

3.3.2 标本不是无菌留取，容器不符合要求。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，放置时间不应超过2小时。

4．试剂、仪器

4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。

4.2 全自动血培养系统、多功能体液培养瓶、VIT

本节课是利用多媒体手段,将微观的细菌、病毒以比较直观的面貌介绍给学生。让他们可以全面的了解关于细菌病毒的基础知识,并渗透辩证的看问题科学观点。

全国中小学“教学中的互联网搜索”优秀教学案例评选

教案设计

本节课是利用多媒体手段,将微观的细菌、病毒以比较直观的面貌介绍给学生。让他们可以全面的了解关于细菌病毒的基础知识,并渗透辩证的看问题科学观点。

五、

教学过程

【引言】播放视频：超级细菌垄全球夺 6 条命，这小小的细菌，弄得人们束手无策，你了解细 菌吗？想了解其他那些更微小的生物吗？那就请你和老师一起走进《神奇的微生物》世界。 【百度视频】在搜索超级细菌垄全球夺 6 条命的视频中，优酷的视频 http://www.77cn.com.cn/v_show/id_XMTk4MjQ2Mjc2.html 微生物是一类身体非常微小的生物，直到近代才被人们发现与认识

,那它们是怎样被发现 的呢？ 【多媒体展示】学习目标(一) 微生物的组成及发现部分： 1、 微生物的组成 2、 最早发现微生物的人 【教师活动】展示 PPT 课件，介绍微生物的发现及组成 【百度知道】http://www.77cn.com.cn/question/181782472.html 【学生活动】完