tcid50测病毒滴度原理

病毒TCID50测定

操作步骤 (1) 准备细胞

取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细 胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。

细胞对照选取16个孔即可。滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。 (2) 稀释待测病毒液。

A法为参考书上标准的操作方法 B法参照书将液体量减少后的结果

病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。

A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。

B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。首次滴定可以多稀释几个滴度。

根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500μl，即10-1为50μl加入450μl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100μl加入900μl孵育液中。若接种8个孔，则相应增加液

TCID50测定方案

2012112339

1 简介

TCID50(Tissue Culture Infective Dose)，半数组织培养感染量，又称50%组织细胞感染量，指能在半数细胞培养板孔或试管内引起细胞病变(Cytopathic effect，CPE)的病毒量。

将不同稀释度的病毒接种到96孔板上培养的单层细胞上。观察细胞病变，待细胞不再病变时记录每个稀释度出现病变和未出现病变的孔数，按照Reed-Muench公式计算TCID50值。

2 试剂

试剂

DMEM-basic培养基 胰蛋白酶

胎牛血清Fetal bovine serum PBS

来源 Gibco，上海 Gibco， Hyclone， Hyclone，

保存条件 4℃保存 -20℃冻存 -20℃冻存 -20℃冻存

3 仪器与耗材

仪器

CO2培养箱 生物安全柜 倒置显微镜 显微照相系统 高速冷冻离心机 电子天平 移液器 液氮罐 电冰箱

规格

耗材 细胞培养瓶 无菌离心管 一次性移液管 细胞培养板

规格

25cm2

15mL，50mL

1mL，2mL，5mL，10mL 96孔

4 细胞及培养基

DF-1细胞株

细胞

实验 病毒感染力的滴定（TCID50的测定）

滴度：在半定量或定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱。 滴度（抗体的多少）越高，受传染的机会就越小。

一、实验目的

了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法

半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测

半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测 蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测

三、材料

1、长满单层的细胞1瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96孔细胞培养板 4、加样器、枪头 5、病毒液（PRV） TCID50的操作步骤

1) 准备细胞

取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细

胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。每个孔的细胞铺成单层

病毒感染力的滴定（TCID50的测定）

概念：半数感染量（median infective dose， ID50） 表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。 一、实验目的

了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 二、测定病毒感染力的方法

半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测 半数细胞培养物(tissue,组织)感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测

蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测 三、材料

1、长满单层的细胞1瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96孔细胞培养板 4、加样器、枪头 5、病毒液（PRV） 四、TCID50的操作步骤

1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl

病毒感染力的滴定（TCID50的测定）

概念：半数感染量（median infective dose， ID50） 表示在规定时间内，通过指定感染途径，使一定体重或年龄的某种动物半数感染所需最小细菌数或毒素量。 一、实验目的

了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 二、测定病毒感染力的方法

半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测 半数细胞培养物(tissue,组织)感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测

蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测 三、材料

1、长满单层的细胞1瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96孔细胞培养板 4、加样器、枪头 5、病毒液（PRV） 四、TCID50的操作步骤

1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl

1、PFU:plaque forming unit，空斑形成单位：感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。

2、MOI :multiplicity of infection，感染复数：传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。

然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其公式为：

P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）。 其中

中和试验

动物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。中和试验

(Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。

中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合；然后把血清－病毒混合物置适当的条件下感作一定时间后，接种于敏感细胞、鸡胚或动物，测定血清阻止病毒感染宿主的能力及其效价。如果接种血清病毒混合物的宿主与对照(指仅接种病毒的宿主)一样地出现病变或死亡，说明血清中没有相应的中和抗体。中和反应不仅能定性而且能定量，故中和试验可应用于：

1.病毒株的种型鉴定：中和试验具有较高的特异性，利用同一病毒的不同型的

毒株或不同型标准血清，即可测知相应血清或病毒的型，所以，中和试验不但可以定属而且可以定型。

2.测定血清抗体效价：中和抗体出现于病毒感染的较早期，在体内的维持时间

较长。动物体内中和抗体水平的高低，可显示动物抵抗病毒的能力。

3.分析病毒的抗原性。

毒素和抗毒素亦可进行中和

动态法测油滴电荷量的研究

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摘要：OM99 CCD微机密立根油滴仪是用于验证电荷的不连续性及测量基本电荷电量的物理实验仪器，也是学习了解CCD图象传感器的原理与应用、学习电视显微测量方法的实验仪器。适用于理科、工科及大、中专学校的近代物理实验和普通物理实验的教学。

关键词：动（静）态测量法 密立根油滴仪 匀速上升

1 实验目的

会使用OM99 CCD微机密立根油滴仪验证电荷的不连续性及测量基本电荷电量的物理实验仪器，学习了解CCD图象传感器的原理与应用、学习电视显微测量方法的实验仪器。

2 实验原理

一个质量为m，带电量为ｑ的油滴处在二块平行极板之间，在平行极板未加电压时，油滴受重力作用而加速下降，由于空气阻力的作用，下降一段距离后，油滴将作匀速运动，速度为Vg，这时重力与阻力平衡（空气浮力忽略不计），如图1所示。根据斯托克斯定律，粘滞阻力为

《计算机系统安全》 课程结课论文

《蠕虫病毒的传播原理》

学生姓名 陈军辉 学 号 5011212502 所属学院 信息工程学院 专 业 计算机科学与技术 班 级 计算机16-5 指导教师 李鹏

塔里木大学教务处制

摘要:蠕虫病毒发展迅速，现在的蠕虫病毒融入了黑客、木马等功能，还能阻止安全软件的运行，危害越来越大。本文介绍了蠕虫病毒的定义，特点，结构及其在传播过程中的功能，最后介绍了蠕虫病毒的传播机制。 关键词：计算机蠕虫；传播；

目录

引言................................................................ 1 正文................................................................ 1 1.蠕虫病毒的定义及特点.............................................. 1 2.蠕虫病毒的构成及在传播过

对各数据库进行检索形成报告

检索题目：计算机病毒原理及防治

系院：

专业：

学号：姓名： 信息学院 通信工程 201009110204 彭存超

前 言

对各数据库进行检索形成报告

1946年2月，在美国宾夕法尼亚大学诞生了世界上第一台"电子数值积分计算机

"(Electronic Numerical Integrator And Calculator)，简称ENIAC，从而开创了现代计算机阶段的新纪元。

现代计算机经历了半个世纪的发展，英国科学家tu灵(Alan Matheson Turing)和美籍匈牙利科学家冯·诺依曼(John von Neumann)是这个时期的杰出代表。

tu灵对现代计算机的贡献主要是建立了tu灵机的理论

模型，发展了可计算理论，并提出了定义机器智能的tu灵

测试。

冯·诺依曼的贡献主要是确立了现代计算机的基本结构，即冯，诺依曼结构。其特点可概括为：使用单一的处理部件来完成计算、存储以及通信的工作；存储单元是定长的线性组织；存储空间的单元是直接寻址的；使用机器语言、指令，通过操作码来完成简单的