细胞工程实验技术

实验一细胞的凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品

1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。

四、实验步骤

1２％鸡血红细胞悬液制备

取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备

土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min） 3 细胞凝集反应

制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管

植物细胞工程

实验一 培养基母液的制备

一、实验目的与意义

学习和掌握培养基母液的配制方法。

在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。

二、实验器材

电子天平（称量为0.0001g）、电子天平（称量为0.01g）、烧杯（500ml、100ml、50ml）、容量瓶（1000ml、100 ml、50 ml、25 ml）、细口瓶（1000 ml、100 ml、50 ml、25 ml）、药勺、玻璃棒、电炉。

三、实验药品

NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、 H3BO3、 MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、 Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素(维生素B1)、甘氨酸。

四、实验步骤

每种母液均配制500ml，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制

表1 MS培养基大量元素母液制备

序号 1 2 3 4 5

第二章细胞工程基础

本章是本课程的理论基础和技术基础，重点回顾了一些重要的与细胞工程有关的理论背景知识，以及涉及的相关设施与技术，目的是为后续细胞工程各章的学习奠定基础。 内容提要：第一部分细胞工程的理论基础

第二部分细胞工程的技术基础

第一部分细胞工程的理论基础 一、细胞的基本结构及功能 四、组织与器官 二、细胞分化及细胞凋亡 五、生殖与发育 三、细胞周期及细胞分裂

一、细胞的基本结构及功能

细胞（cell）是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。

1、由膜包围的原生质团，通过质膜与周围环境进行物质和信息交流；

2、构成有机体的基本单位，具有自我复制的能力，是有机体生长发育的基础； 3、代谢与功能的基本单位，具有完整的代谢和调节体系，不同的细胞执行不同的功能； 4、遗传的基本单位，具有发育的全能性。

（一）细胞的基本共性

1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的生物膜，即细胞膜。 2、所有的细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA作为遗传信息复制与转录的载体。 3、作为蛋白质合成的机器─核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内。 4、所有细胞的增殖都以一分为二的方式

实验时间 4月11日 4月18日 4月25日 实验内容 实验一 培养用液的配制、除菌与分装 实验二 细胞的传代培养 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（1-5组）401 实验四 染色体制备（6-10组）301 5月2日 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（6-10组）401 实验四 染色体制备（1-5组）301 5月9日 实验五 细胞的复苏与冻存

1

实验一 培养用液的配制、除菌与分装

【实验目的】

1. 掌握常见培养用液的配制方法。 2. 掌握常用的灭菌方法。 3. 了解每种培养用液的作用。

【实验原理】

常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和 EDTA。培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。

细胞

专业实验 指 导

李国平 贾小丽 张剑 胡永乐 编生态与资源工程学院 2013年8月20日

实 验书

目 录

前 言 ········································································································································1 学生实验守则 ·····························································································································2 实验一 MS培养基的配制 ·········································································································3 实验二 无菌操作及愈伤组织诱导技术 ··················································

细胞工程综述

摘要：

细胞工程学是应用细胞生物学和分子生物学原理与方法，在细胞水平研究改造生物遗传特性，以获得具有目标性状的细胞系或生物体的有关理论和技术的学科。它是一门现代生物科学理论和工程技术相结合的综合性学科。它是现代生物技术的重要组成部分，同时也是现代生物学研究的重要技术工具。其研究技术涉及到细胞器、细胞、组织和器官水平利用工程技术原理和手段所进行的各类体外操作。

本文以学习细胞工程的意义为起点，接着从细胞工程涉及领域、应用及其种类对细胞工程进行了论述。

关键词：细胞工程 意义 涉及领域 应用 种类 正文：

引言

细胞工程就是在细胞水平研究、开发。利用各类细胞的工程。亦即人们根据科学设计改变细胞的遗传基础，及通过无菌操作，大量培养细胞、组织乃至完整个体的技术。迄今为止，人们已经从基因水平、细胞器水平以及细胞水平开展了

多层次的大量一丁作，在细胞培养、细胞融合、细胞代谢物的生产和生物克隆等诸多领域取得一系列令人瞩目的成果。

细胞工程是一种细胞水平上的遗传工程，它是将一种生物细胞中携带遗传信息的细胞核或染色体整个地转移给另一种生物细胞，使新细胞产生具有人们

所需要的功能，从而改变受体细胞的遗传特性，打破只有同种生物才能进行杂交的限制

一.名词解释。

1.细胞工程；2.细胞全能性；3、细胞分化；4、脱分化；5、再分化；6、细胞培养；7、代谢工程；8、代谢流；9、载流途径；10、植物组织培养；11、极性现象；12、玻璃化现象；13、人工种子；14、胚胎工程；15、胚胎移植；16、细胞核移植；17、体细胞克隆；18、胚胎分割；19、性别控制；20、细胞重组；21、核体；22、胞质体；23、微细胞；24、细胞融合；25、体细胞杂交；26、雌核发育；27、植物细胞培养；28、看护培养；29、细胞悬浮化培养；30、细胞固定培养；31、原代培养；32、传代培养；33、细胞系；34、细胞株；35、转基因技术；36、胚胎干细胞；37、组织工程；38、愈伤组织；39、植物细胞固定化培养；40、干细胞；41、胚胎嵌合；42、单克隆抗体；43、试管动物；44、动物细胞培养；45、细胞大规模培养；46、转基因生物反应器；47、成体干细胞。

1、细胞工程：是指以细胞为对象，应用生命科学的理论，借助工程学的原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。（☆☆）

2、细胞全能性：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需的全部遗传

细胞工程综述

摘要：

细胞是生命活动的最基本单位，为各种基因的表达和产物的合成提供了基础和载体。当前细胞工程所涉及的主要技术领域有细胞培养、细胞融合、细胞拆合、染色体操作及基因转移等方面。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。 关键字：

细胞融合；细胞培养；概述；种类；应用；展望 正文：

一、细胞的概述

细胞工程是生物工程的一个重要方面。总的来说，它是应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。细胞工程所涉及的范围很广，按生物类型可分为动物细胞工程、植物细胞工程和微生物细胞工程，按实验操作对象可分为细胞与组织培养、细胞融合、细胞核移植、染色体操作及基因转移等方面。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。

细胞工程就是在细胞水平研究、开发。利用各类细胞的工程。亦即人们根据科学设计改变细胞的遗传基础，及通过无菌操作，大量培养细胞、组织乃至完整个体的技术。迄今为止，人们已经从基因水平、细胞器水平以及细胞水平开展了多层次的大量一丁作，在细胞培养、细胞融合、细胞代谢物的生产和生物克隆

专题2 细胞工程

2.1．1《植物细胞工程的基本技术》学案

【学习目标】

1、掌握植物组织培养的原理和过程。（重、难点） 2、理解植物体细胞杂交技术。（重、难点）

【自主预习】

一、细胞工程和植物细胞的全能性 1．细胞工程的概念： 原理和方法 操作水平 目的 分类 和分子生物学 或细胞器水平 按照人的意愿来改变细胞内的 或获得 、 。 2、植物细胞的全能性

（1）含义：具有某种生物 的任何一个细胞，都具有发育成 的潜能。

(2)脱分化：让__________的细胞，经过诱导后，失去其特有的________________而转变成未分化细胞，进而形成____________。

(3)再分化：____________在一定的培养条件下，分化出__________，进而形成完整小植株。

（4）在理论上，生物的任何一个细胞都具有 的潜力，但在生物的生长发育过程中，细胞

细胞工程学习题

1．诱导试管苗生根时，培养基的调整应 D

A．加大盐的浓度 B．加活性炭 C．加大分裂素的浓度 D．加大生长素的浓度 2．下列实验中可能获得三倍体植株的是 C A．小麦的茎尖培养 B．番茄花药培养 C．玉米胚乳培养 D．玉米花粉培养

3．动物体内各种类型的细胞中，具有最高全能性的细胞是 C A．体细胞 B．生殖细胞 C．受精卵 D．干细胞 4．下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类 D

A． 葡萄糖 B．果糖 C．麦芽糖 D．蔗糖 5．农杆菌介导的转化方法主要适用于 D

A．草本植物 B．木本植物 C．单子叶植物 D．双子叶植物 6．原生质体纯化步骤大致有如下几步：

①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。

③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂