总多酚含量测定方法

原理

以没食子酸为主的多酚类化合物在碱性溶液中可将钨钼酸还原成蓝色化合物，该化合物在765nm处有最大吸收，且吸收值与多酚化合物含量成正比，以没食子酸为标准物质，标准曲线法定量。

试剂

（1） 钨酸钠——钼酸钠混合溶液：称取50.0g钨酸钠，12.5g钼酸钠，用350ml水溶解到

1000ml的回流瓶中，加入25ml磷酸及50ml盐酸，充分混匀，小火加热回流两小时，再加入75g硫酸锂、25ml蒸馏水、数滴溴水，然后继续沸腾15min（至溴水完全挥发为止），冷却后，转入500ml容量瓶定容，过滤，至棕色瓶中保存，使用时稀释一倍。

（2） 75g/L碳酸钠溶液：称取37.5g无水碳酸钠溶于250ml温水中，混匀，冷却，稀释至500ml，过滤到储液瓶中备用。

（3） 没食子酸标准储备液：准确称取0.1100g一水合没食子酸，溶解并定容至100ml，此溶液没食子酸质量浓度为1000mg/L,在冰箱中2——3度可保存五天。

（4） 没食子酸标准使用液：分别称取1000mg/L的没食子酸标准储备液0、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml至100ml容量瓶中，定容，溶液质量浓度为0、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、

酒石酸亚铁法测定过岗龙中总多酚含量（方案设计） 1实验目的

使用酒石酸亚铁法测定过岗龙中总多酚的含量。 2实验原理

酒石酸亚铁法为物质总多酚含量测定的常用方法。酚类物质的羟基与酒石酸铁中的铁离子生成蓝色络合物，根据络合物溶液颜色深浅，在540nm处比色，可用分光光度法测定其含量。 3仪器材料

紫外分光光度计、电子分析天平、没食子酸对照品、酒石酸钾钠、硫酸亚铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、过岗龙药材提取液 4实验内容

4.1 标准溶液配制：精密称取25.0mg没食子酸标准品,置于100ml容量瓶中,纯化水溶解并定容至刻度,摇匀,即得0.25mg/ml的没食子酸标准溶液,低温保存备用。

4.2 酒石酸亚铁溶液配制：称取0.5g硫酸亚铁及2.5g酒石酸钾钠置于500ml容量瓶中,纯化水溶解并定容至刻度,摇匀,低温保存备用。 4.3 磷酸缓冲溶液配制：将0.0667mol/l磷酸氢二钠溶液与0.0667mol/l磷酸二氢钾溶液按84∶16的比例混合,调节pH至7.5,备用。 4.4 标准曲线的绘制：精密吸取没食子酸标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分别置于25ml的容量瓶中,加蒸馏水至体积为5.0ml,再加入酒石酸亚铁溶液5.0ml,用

多酚

精确称取没食子酸标准品25mg，用水溶解并定容至250ml，得对照品标准溶液。精密吸取对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml于25m比色瓶中，再加入1ml福林酚显色剂，摇匀后再加入2ml 10% Na2CO3溶液，定容至10ml，室温下反应20min后测定A760.取一定量的香椿加蒸馏水碾碎，测其上清液测定。（根据吸光值自己调整量）

称取剪碎的香椿0.5g（按需称取），加入5 mL 80%乙醇研磨过滤，将滤液放置20 min。取0.1 mL滤液，加入5 mL水及0.5 mL福林酚反应8 min，再加

1.5 mL 10%的碳酸钠溶液，于760 nm处测定吸光度值。根据标准曲线算出总酚含量。 黄酮

精确称取芦丁标准品10mg，加入几滴无水乙醇溶解，然后用60%乙醇定容至100ml，得对照品标准溶液。取芦丁标准液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80 和1.00 mL 分别放入1～6号25ml比色管中，然后分别加入5ml蒸馏水，加入0.2mL 5%NaNO2，摇匀,静置6min ;再分别加入0.2mL 10%Al(NO3)3，摇匀，静置6min，再分别加入1mL 4%NaOH，用60%乙醇定容至刻度10ml处

1 总黄酮含量测定

1． 1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法． 重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。

1． 1． 1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－ 可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～ 280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。 1． 1． 2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。

1． 1． 3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。

1． 1． 4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联

总花色苷含量测定—分光光度法

1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A 的方法[1]:

(1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,

计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620) (2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:

a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。

计算公式为: A = Amax

直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。

b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。

计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5

pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性

总花色苷含量测定—分光光度法

1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A 的方法[1]:

(1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,

计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620) (2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:

a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。

计算公式为: A = Amax

直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。

b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。

计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5

pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性

时珍国医国药２００７年第１８卷第８期

ＩＪＩｓＨＩｚＨＥＮＭＥＤＩｃｌＮＥＡＮＤ

ＭＡＴＥＲｎＭＥＤＩｃＡＲＥＳＥＡＲｃＨ２０ｃｒ７ＶｏＬ．１８

Ｎｏ．８‘

多糖含量测定方法比较

钟方晓１，任海华２，李岩１

（１．山东省中医药研究院，山东济南２５００１４；２．山东省肿瘤医院，山东济南２５０１１７）

摘要：目的探讨中药多糖含量测定方法酶可行性及稳定性。方法对测定多糖常用对照品葡萄糖、鼠李糖、半乳糖，参

考文献方法，分别采用硫酸一苯酚法、硫酸一蒽酮法比较显色反应后吸收曲线的稳定性。结果不同单糖对照品显色反

应后最大吸收波长不同，其中硫酸一苯酚法显色反应后稳定性较好，硫酸一蒽酮法稳定性较差。结论硫酸一苯酚法为

较理想的多糖含量测定方法。

关键词：多糖；硫酸一苯酚法；硫酸一蒽酮法．中图分类号：Ｒ２８４．２

文献标识码：Ａ

文章编号：１００８电８０５（２００７）０８－１９１６旬１

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天然产物

一些天然产物的含量测定方法

成分名称 提取方法 流动相 检测波长(纳米) 流速 柱温

丹参酮IIA 甲醇回流 甲醇-水(75:25/73：27) 270 1 室温

丹酚酸B 75%乙醇回流 甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59) 286 1 室温

丹参素 水,超声/乙醇-水超声/盐酸(1->10)50毫升,超30分钟,冷,补足,氯化钠5克,取上清液25毫升,乙乙提取4次,合并,干,50%甲醇溶,定10毫升./50%甲醇超提 甲醇-水-乙酸(8:91:1)/乙腈-水-磷酸(2:60:0.5)/乙腈-水-乙酸(9:90:1)/甲醇-二甲基甲酰胺-水-乙酸(4:4:90:2/2:95:2:1)/甲醇-0.4%乙酸(5:95)/甲醇-1%乙酸(8:92)/乙腈-甲醇-水-冰醋酸（0.5：8：92：1） 280 1 室温

天然产物

362页后

《欧洲药典》中蛋白含量的测定方法

1. 《欧洲药典》第7版2.5.33，USP<1057>Biotechnology-derived articles-Total protein assay。

EP2.5.33收录了7种检测方法，即扫描法、Lowry 法、Bradford 法、BCA法、Biuret 法、荧光法和氮分析法。 1.1 扫描法：

原理：依据蛋白质结构中含有芳香族氨基酸（如酪氨酸、色氨酸），其在280nm处有吸光值。检测时，如果溶解蛋白质的溶剂也有高吸光度，则采用干扰对照液进行补偿消除。但如果干扰对照液吸光值也很高，则检测结果误差大。此外，低浓度蛋白质溶液会因蛋白质吸附至检测池上而影响浓度，后者可使用高浓度或用去离子去污剂处理样品。 待测品：蛋白质溶液浓度一般为0.2mg/mL~2 mg/mL。

对照品：选择合适的对照品，用溶解待测品蛋白质的溶剂配制，浓度与待测品溶液一致。 检测：检测过程中，将待测蛋白溶液、对照品溶液和干扰对照液保持在相同温度。使用石英比色皿检测280nm处吸光值，并使用规定的溶液进行补偿。溶液浓度应尽可能保持在适宜范围内以便获取准确结果。

光散射影响：样品引起的光散射会导致蛋白质检测结果准确度降低。如果蛋白质溶液中存

果胶的测定（方案一）：

黄晓钰，刘邻渭等．食品化学综合实验[M]．中国农业大学出版社. 2002．158~159

实验原理：果胶经水解，其产物——半乳糖醛酸可在强酸环境中与咔唑试剂产生缩合反应，

生成紫红色化合物，其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比，由此可进行比色定量测定果胶。 实验试剂：1.化学纯无水乙醇或95%乙醇。

2.精制乙醇：取无水乙醇或95%乙醇1000ml，加入锌粉4g，硫酸（1:1）4ml，

至于衡温水浴中回流10h，用全玻璃仪器蒸馏，馏出液每1000ml加锌粉和氢氧化钾各4g，并进行蒸馏。

3. 0.15%咔唑乙醇溶液：称取咔唑0.150 g，溶于精制乙醇并定容至100ml。 4.半乳糖醛酸标准溶液：先用水配置成浓度1 g/L的溶液，再配制成浓度分别为

（0、10mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L、70mg/L）的

系列半乳糖醛酸标准溶液。

5.优级纯浓硫酸。

操作方法：1样品处理： 总果胶提取：（鲜样）研磨新鲜样品50g，放入1000ml烧杯中，加入0.05mol/L

HC