免疫共沉淀为什么设计IgG

免疫共沉淀 from WHU SKY

1用细胞刮子收细胞，3000rpm，5min，离心，去上清；或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温，冰上或4度冰箱或4度离心机。

2 PBS清洗，重复步骤1

3选择合适的bufer裂解细胞，现加1000XAL（一般核质均分布的建议使用NP-40，核内分布的建议使用High Salt ，只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer），加入1ml Buffer (106-107个细胞)，4℃,30min（在功能旋转仪上旋转裂解）。 4 12000rpm，15min，离心取上清（若上清仍浑浊，可重复离心1-2次）50ul上清作为 Input，其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug（可根据抗体效价酌情增减），4℃,旋转2-4h，

加抗体时要计算使用相同抗体的样品数，取（N+1~2）*1ug，用小量裂解buffer

稀释，再均分到各样品中，以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间，准备Protein G（一个反应20ul纯beads，如果beads原管中液体和beads体积比是1:1，一个样品取总体积40ul，多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物）

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

　　读书好似在阅读作者的阅历，在跟作者对话，从作者的角度去思考问题，于是体验着不同的人生。而写作，就是把此时此刻的思想记录下来，也许幼稚、也许荒诞，但却是我此时真情实感的表达。

　　意识

　　序言中，原研哉说阿部雅世身上有“自我展示”的主动意识，这让我想到了谢丽尔的《向前一步》中形容的“往桌前坐”。(没有记住作者的名字，现查的，也许这本书也会重读一遍)自我感觉这两种意识是差不多的，这种主动的意识可以被锻炼，也是自我打开的第一步。生活中的我们缺少这个主动的意识，也许是缺少被push的力量，被动前进也是可以的，直到这种被动行为转换为主动行为。

　　文中说到“设计是基础教育的一部分，是美术的一种”“设计应该是所有人都应该掌握的一项现代基础素养”，而我觉得这种意识的培养是主要的。这种设计意识的培养不同于落到实处的知识教育，比如英语单词、数学公式等，而是让学生在学习的过程中产生的主动意识，主动去解决“为什么”。那我们为什么设计?是为了说明书更易被人读懂，是为了让人们对产品产生兴趣，是为了传达自己的意图、消除误解&hell

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《花儿为什么这样红》教学设计 1、教学目标

知识与技能：了解花红的原因；了解事理说明文的基本特点。

过程与方法：通过默读、精读，了解文章内容，师生共同讨论说明文的知识。 情感、态度与价值观：认识自然，热爱自然，激发探索科学奥秘的兴趣。 教学重点：学习本文从多角度说明事理的方法作为以及品味文章准确、严密的说明语言。 教学难点：深入理解课文的逻辑顺序 ，进一步理清行文思路 2、教学流程 第一课时 一、导入新课

播放多媒体课件《花儿为什么这样红》的插曲及有关花朵的图片。）

同学们，当你尽情享受这大自然赐给你的绚丽、芬芳时，你可曾想过：这些花为什么这样红呢？今天我们学习一篇介绍有关花的科学知识的说明文《花儿为什么这样红》。 。(板书课题及作者。) 二、整体感知

1、介绍作者（学生交流课前收集的相关资料）

贾祖璋，浙江省海宁县人，我国着名的生物科普作家。。他的科学小品，内容充实，构思精巧，语言简洁洗练，文笔清新朴实。本文最早发表于1979年《光明日报》副刊上，曾获得新长征全国优秀科普作品创作奖一等奖。 2、积累字词（检查学生预习情况）

萎wěi谢 灼zhuó伤

《我为什么而活着》教学设计

教学目的：

1、 引导学生学会思考，在阅读中领悟文章的主旨，认识和感悟人生意义。 2、 使学生能够正确分析文章结构，体会作品中作者表现出来的博大胸怀。 教学重点、难点：

1、 领悟文章的主旨，深刻体会并正确认识人生意义。

教学方法：讲个故事，2、读篇文章，3、听首歌曲，4、写段感想，5、悟点道理 教学课节： 一课时 教学过程： 一、导入：

人从何而来？ 人为何而生？ 人死后又会如何？ ——困扰着哲学界的三大命题 一、从伦理学意义上来说，我当然是我母亲生下来的；从生理学意义上来说，我当然是由一个受精卵经过283天的时间发育而成! 而当我们把自身个体放到整个人类的发展历史中时，再次为我之生感到迷惑与震憾——如果从一个人一生下来往上推，他之所以存在，他的父母必须存在（2个个体生命），他的父母的父母必须存在（4个个体生命）??以此类推，人类出现在300万年前，仅以以计算，二十年一代，15万次。最起码是以2的15万次方的生命个体为基数而产生的；再往下推理的话，在整个宇宙产生的一刹那间便决定了在140亿年后的你的生命的开始。140亿年间有其它各种各样的天灾与人祸，只要在此间中任何一个环节，至少是2的15万

篇一：动物怎样过冬教学设计

动物怎样过冬

教学目标：

知识与技能：通过学习，学生能够认识季节变化对动物的影响。 过程与方法：通过学习，学生知道动物对环境的适应方式。 情感态度与价值观：体会动物与环境之间的相互关系。

教学重、难点：

重点： 认识季节变化对动物的影响。难点：了解动物对环境的适应方式。

教学准备：多媒体、课件。

教学过程：

一、导入（谈话导入课题）

1、谈话

师：同学们“现在是什么季节？你感觉怎样？”

生：秋天，天气开始凉了。

师：好，那么再过一个月是什么季节呢？感觉天气怎样呢？ 生：（冬天，天气寒冷。）

师：那么，“请大家想一想，冬天人们是怎样过冬的？”

自由回答：穿棉衣、安装取暖设备、常在室内活动、加强锻炼、晚上睡觉加被子等。

2、导入课题：人们有这么多的好办法过冬，那么小动物在寒冷的天气里又是怎样过冬的呢？季节的变化又是怎样影响动物的呢？今天，我们就一起来走进奇妙的动物世界，去研究一下“动物怎样过冬”。

3、板书课题：动物怎样过冬。

二、新授

下面请同学们一起来看一个小视频。看的时候思考问题：“这里面有几种动物？它们是怎样过冬的？”大家边看边记，记时可以用简单的方式去记，比如说青蛙----冬眠，咱们来比一下，看谁记的最多，最准确。准备好了吗？

1、播放视频：动物

为什么读古书？一个是充实精神，一则与传统或个人精神活动之背景有关，第三个方面是找乐趣。不论哪个，略一张望，似有现成的答案，但细细想来，义各不安

随意地、不带目的地读点前人的书，也还是有用的。

□ 刀尔登 | 文

有人说我古书读得多，实在是谬奖。古书只读过一点点，多则远谈不上，至于写些说今道古的文章，不过是觑个空子，蒙一蒙圆家，方家若是见了，准定笑倒。我们这一代人，所谓“老底子”，谁也没有，就是偶承家学的，比起除了旧书旧文一无可见的前人，相去也很远。这差距尤其是在语感上，不过今人接触的知识，远迈古人，所以只要不去写什么旧诗旧文，也没什么可遗憾的。

有这么一个问题：今天的人，为什么还要读古书？这个问题包含许多方面的意思。第一种意思，是读古书有什么用，而这里的“用”，在不同人那里，意义又各不同。我的朋友缪哲，一遇到这种提问，立刻斩钉截铁地说：“没屁用。”不过他一边说没用，一边读旧书，别人听其言观其行，对他的回答，也不怎么信服，说不定还以为他在藏私，好比挖宝的，路人问他在挖什么，他一定说：“废铁，废铁。”

我明白他的意思。一种用处是实际的，比如他研究艺术史，既然曰“史”，古书非读不可，就算不喜欢，捏着

篇一：入党为什么 当干部做什么 为后人留下什么

“入党为什么 当干部做什么 为后人留什么” 发言稿 各位党员老师好！

入党为什么？当干部做什么？为后人留什么？很久没有想这些问题，今天安排我们开展这样的讨论有着十分积极的作用，也是对我们党员起着鞭策作用。下面谈谈个人的看法。

一、为什么入党？当初我们都曾在入党志愿书中写到这个问题，而且说的可能还很多。具体到我个人，我想主要有三条：一是为了干事业，实现自身的人生价值。我出身农村，但却充满着干事创业的热情和冲动，加入共产党后，我和其他党员一样有了共产党人的崇高理想，那就是“为实现共产主义而奋斗终身”。千里之行，始于足下。多年来，我始终坚持今天的努力与远大的理想相结合，凭着忠诚为党的伟大事业而奋斗。二是为了做公仆，全心全意为人民服务。做人民的公仆，就应该为人民办事，就要做到情为民所系，利为民所谋，权为民所用。就县委机关而言，就必须把服务县委和维护人民群众利益作为工作的根本出发点和落脚点，要主动解决群众的生活疾苦，积极引导群众致富奔小康，做到权为民所用、利为民所谋。三是为了当表率，发挥先锋模范作用。共产党是中国工人阶级的先锋队，加入先锋队的一员，就应该处处做表率。端正入党动机，则是新形势下保持共产党员先进性的

　　人们总希望活着，活着就会有希望，往往忽略了活着到底为了什么。

　　芸芸众生，各有各的活法：有的人活一天算一天，抱着做一天和尚撞一天钟的想法而活着；（我称它为混）有的人看破红尘踏入佛门认为那才是自己最终的归属；（佛)有的人选择放弃，认为一死百了；（死）有的人为追求更好的生活质量而不断进取，不断的努力，最后成功。（我认为这才是真正的活）

　　人活着的理由太多，我主要说两件事感情和事业。先说说事业吧，每个人都希望自己能有所作为，能成就一番事业。但这个过程是漫长而艰巨的，挺过来了就是胜利。不是每个人都能风声水起，都能扭转乾坤的。所以当你遭遇挫折和失败的时候，你该怎么做：是不停的抱怨；是怨恨他人；怨恨自己；怨恨老天爷不公；是继续坚持还是就此放弃。这里我要告诉所有人老天爷对每个人都很公平的，机会人人均等就看你是否能抓住。通常老天爷在对你关了一扇门的同时会在旁边开一扇窗，遭遇失败和挫折的人你要注意了，这个时候你要是保持清醒的头脑仔细的分析自己目前的状况，你就会找到那扇窗，就会抓住这个机会翻身。相反你整天的想不通，整天的怨这怨那，把大量的时间浪费掉，当然看不见老天爷为你开的那扇窗，也就失去了翻身的机会；你就会觉得周围黑暗一片，毫无光明，前途渺茫。

　　昨天很冷